三氧化二砷对裸鼠膀胱癌细胞凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)抑制膀胱癌细胞生长的作用。方法体外培养膀胱癌T24细胞,取指数生长期T24细胞裸鼠皮下接种,成瘤后连续7 d尾静脉分别注射As2O3(5、10 mg·kg-1·d-1)、丝裂霉素(MMC)及生理盐水。应用电镜、流式细胞术和免疫组化等方法检测了癌细胞的超微结构变化、细胞的凋亡和Caspase3蛋白的表达。结果电镜下As2O3组可见典型癌细胞凋亡的形态学改变;流式细胞分析,As2O3组可见癌细胞凋亡峰,凋亡率分别为10．67％和23．42％,明显高于对照组(0．83％);免疫组化检测As2O2组Caspase 3蛋白表达(33．54％和56．22％)也明显高于对照组(6．25％)。结论As2O3可以通过诱导膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞生长。     

人肝再生增强因子基因转导对大鼠肝硬化的保护作用

目的 探讨人肝再生增强因子(augmenter of liverregeneration，ALR)基因转导对肝硬化的保护作用。方法 构建hALR真核表达载体，并以肌肉注射方式转导至硫代乙酰胺诱导的大鼠肝硬化模型中，观察对肝硬化大鼠的代谢支持作用。结果 构建的hALR真核表达载体pchALR肌肉注射后显著降低了血清AST、ALT、ADH水平，延长了生存时间，提高了存活率。结论 人肝再生增强因子基因转导对肝硬化大鼠具有预防和治疗作用，可显著降低血清AST、ALT、ADH水平，延长生存时间，提高存活率。     

供体凋亡/坏死细胞对大鼠脾移植急性排斥反应的作用研究

目的 探讨供体凋亡与坏死细胞对大鼠脾移植急性排斥反应的作用及机制.方法 建立大鼠异位脾移植模型后,随机分为4组:A组输注生理盐水2 ml;B组输注供者凋亡细胞5×106;C组输注正常供体细胞悬液5×106;D组输注5×106坏死细胞.术后不同时间点每组取大鼠8只进行指标测定.结果 移植后脾出现排斥反应并逐渐加重,D组最为严重,A组和C组次之,B组最为轻微.各组移植脾匀浆和受体血清中IFN-γ水平逐步增加,为B组低于A组,而D组高于A组,A组与C组相似.B组大鼠移植脾匀浆和血清中TGF-β水平明显升高,其他各组TGF-β1水平持续于较低水平.凋亡细胞抑制混合淋巴细胞反应,而坏死细胞则作用相反.结论 供体细胞能够影响大鼠脾移植急性排斥反应,可能与细胞因子偏移和受体同种免疫反应性改变有关.     

正丁酸钠对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的:探讨正丁酸钠拮抗高迁移率族蛋白-1（HMGB-1）表达对大鼠肝脏缺血-再灌注（I/R）损伤的保护作用。 方法:建立大鼠肝脏I/R损伤模型。将40只雄性大鼠随机分成5组：假手术组、I/R组、正丁酸钠预处理组、正丁酸钠治疗A组和正丁酸钠治疗B组。预处理组、A组和B组于不同时相经阴茎背静脉注射正丁酸钠（400mg/kg）。每组以I/R后6h作为检测时点，检测血清AST，ALT，TNF-α浓度及肝脏组织中HMGB-1表达水平；光镜下观察肝组织病理学改变。结果:正丁酸钠预处理组、治疗A组、治疗B组AST，ALT，TNF-α浓度及HMGB-1表达水平均较I/R组显著降低（P＜0.05）；预处理组的AST和TNF-α较A组和B组显著降低（P＜0.05），且肝细胞病理损害较轻。 结论:正丁酸钠对肝脏缺血再灌注损伤具有确切的保护作用，尤以预处理组的保护效果为佳。     

白介素-1α基因多态与阿尔茨海默病及血管性痴呆的关系

目的 研究中国汉族人群中白介素-1α基因(IL-1α多态与阿尔茨海默病及血管性痴呆的关系。方法 随机选取125名阿尔茨海默病患者、70名血管性痴呆患者和93名对照人群，用PCR(聚合酶链式反应)和RFLP(限制性片段长度多态性1方法，分析受检者的IL-1α、载脂蛋白E(APOE)基因型。结果 IL-1α等位基因在三组中差异无显著性区别。占主导地位是IL-1α等位基因(约90％)。APOE4等位基因在AD患者组中过表达。APOE4等位基因不影响IL1-1αd基因型或等位基因的分布频率。IL-1α等位基因，特别是TT纯合子，低于白种人，或许可解释白介素-1α基因(IL-1α多态与汉族AD无关。结论 IL-1α等位基因的出现不能被用来作为区分AD、VD和健康对照人群的标识。     

异甘草酸镁上调血红素氧合酶-1对巨噬细胞过度分泌炎症因子的作用研究北大核心CSCD

目的探讨异甘草酸镁（MgIG）在脂多糖（LPS）刺激的RAW264．7巨噬细胞中是否能通过上调血红素氧合酶-1（HO-1）起到抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和一氧化氮（NO）释放的作用。方法用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264．7制作炎症细胞模型。①先用不同浓度的MgIG与LPS合并处理24h,分别为Control组、LPS组和LPS＋MglG不同剂量组（O．01mg／mL、0．10mg／mL、0．50mg／mL和1．00mg／mL）;②再将培养细胞随机分为不同处理组（每组n=5）：Control组、LPS组、LPS＋MdG（1．00mg／mL）和LPS＋MdG（1．00m∥mL）＋血红素氧化酶抑制剂[ZnPPIX（10μmol／L）]组。用ELISA方法测定上清HMGBl浓度,用Griess法测定上清液NO的浓度水平,用Western bolt检测细胞内HO-1和iNOS蛋白的表达。结果①与Control组比较,LPS能够明显增加上清液HMGB1和NO浓度（均P〈0．05）,并且在一定程度上增加细胞内HO-1的蛋白表达水平（P〈0．05）;与LPS组比较,LPS＋MgIG不同剂量组均减少了HMGB1和NO的释放（均P〈0．05）,并且随着剂量的增加,HMGB1和NO的上清液水平降低越明显,而HO-1的表达水平在LSP＋MgIG（0．10mg／mL、0．50mg／mL和1．00mg／mL）组均明显诱导增加（均P〈0．05）。②与Control比较,LPS同样明显增加上清液HMGB1和NO浓度（均P〈0．05）,以及明显增加细胞内HO-1和可诱导一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达水平（均P〈0．05）;与LPS组比较,LPS＋MgIG（1．00mg／mL）组上清液中HMGBl和NO浓度明显下降（均P〈0．05）,细胞内HO-1的蛋白水平明显增加（P〈0．05）,细胞内iNOS的蛋白水平则明显下降（P〈0．05）,而LPS＋MgIG（1．00mg／mL）＋ZnPPIX（10μmol／L）组上清液HMGB1和NO浓度、细胞内HO-1和iNOS的蛋白水平差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论MglG能抑制LPS刺激巨噬细胞过度释放HMGBl和NO,能明显抑制LPS诱导的iNOS表达,并且依赖于HO-1的上调。     

PCR诱导猴免疫缺陷病毒SF2、SF3位点突变和转染研究

目的研究猴免疫缺陷病毒（ｓｉｍｉａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ,ＳＩＶ）ＬＴＲ区ＳＦ２或ＳＦ３位点结构与病毒转录活性的关系。方法利用ＬＴＲ５端引物和含ＳＦ２或ＳＦ３部位双点突变的中间引物,首次用ＰＣＲ扩增长度约０．６ｋｂ的ＳＩＶｍａｃ２３９ＬＴＲ５端ＤＮＡ片段,经纯化后,作为正向引物,再次用ＰＣＲ扩增长度约１．１ｋｂ的ＬＴＲ全段（９２０９～１０２７９）并将其连接到ＰＢＳ－ＳＩＶｍａｃ２３９３端病毒的重组质粒上,后者再经ＳｐｈⅠ切点与ＳＩＶｍａｃ２３９５端病毒连接。用突变的病毒转染外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）,用ＥＬＩＳＡ法动态测定培养液中ＳＩＶ核心蛋白Ｐ２７浓度。结果与ＳＩＶｍａｃ２３９株相比,ＳＦ２或ＳＦ３突变株在转染后,其核心蛋白Ｐ２７水平无明显降低。结论两步ＰＣＲ诱导突变是一种简单有效的方法;ＳＦ２或ＳＦ３位点结构对于ＳＩＶｍａｃ２３９在外周血淋巴细胞中的转录活性可能不具重要的影响     

聚合酶链反应检测三种病毒感染的回顾性分析

人乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒(ＨＳＶ2)、巨细胞病毒(ＣＭＶ)是3种常见的引起性传播疾病的病原,临床表现为尖锐湿疣、生殖器疱疹、人工流产及其后遗症。近年来这3种病毒在我国人群中的感染率不断增加。我们用聚合酶链反应(ＰＣＲ)筛查了100例妇科门诊的病人,分析病毒感染与宫颈及卵巢肿瘤的关系。全部病例选自1998年3月至12月间来哈医大附属一院妇科门诊就医的100名患者,年龄18～50岁,平均28岁。以无菌棉拭在宫颈口或外阴患处涂取少量分泌物,洗脱于1ｍｌ生理盐水中,15000ｒ/ｍｉｎ离心10ｍｉｎ,向沉淀中加入100μｌ裂解液(10ｍｍｏｌ/ＬＴｉ…     

二氢青蒿素对胰腺癌生长的抑制作用

Objective To investigate the anti-tumor activity of dihydroartemisinin in pancreatic cancer in vitro and in vivo. Methods For cultured cells,cell growth was determined by the MTT assay and apoptosis was evaluated by flow cytometry analysis stained with Annexin V-FITG/PI. The protein expression in BxPC-3 cells was analyzed by Western blot assay. BxPC-3 cells were injected subcutaneously into nude mice to establish pancreatic xenograft tumors and the tumor volume was monitored after exposure to dihydroartemisinin. Ki-67 staining and TUNEL assay were used to assess tumor cell proliferation and apoptosis in tumor tissue. Results After treatment by dihydroartemisinin in vitro, the proliferative inhibition rates of pancreatic cancer cells BxPC-3 and AsPC-1 reached up to (76.2 ± 3.5) % and (79.5 ± 2.9) %, and the apoptosis rates were up to (55.5 ± 3.2)% and (40.0 ± 3.5)%, the differences were significantly (P ＜ 0.01) compared with control [(2.0 ± 1.3) % and (0.9 ± 0.4) %]. Dihydroartemisinin inhibited the growth of pancreatic xenograft tumors in nude mice. The proliferation index and apoptusis index were (49.1 ± 3.9)% and (50.2 ± 4.4)% respectively in dihydroarternisinin 50 mg/kg treatment group, compared to those of (72.1 ± 3.3) % and (9.4 ± 2.9) % in control, the differences were significantly (P ＜0.01). Western blot assay indicated that dihydroartemisinin up-regulates expression of proliferation-associated protein p21WAF1 and down-regulates expression of PCNA, increases expression of apoptosis-associated protein Bax and decreases expression of Bcl-2 and activates caspase-9 in BxPC-3 cells. Conclusions Dihydroartemisinin exerts anti-tumor activity in pancreatic cancer both in vitro and in vivo by proliferation inhibition and apoptusis induction. Dihydroartemisinin can be used as a potential anti-tumor drug in pancreatic cancer.     

8型腺相关病毒的制备及体内表达的初步研究

目的探讨8型腺相关病毒的制备方法,初步检测其在体内的表达。方法采用载体质粒、辅助质粒和包装质粒三质粒磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装病毒,经超声破碎一饱和硫酸铵沉淀一氯化铯梯度离心提取并纯化病毒。肌肉注射感染肌肉组织,检测报告基因增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluoresent protein,EGFP）在体内的表达活性。结果成功包装制备出8型腺相关病毒,重组病毒能够有效感染肌肉组织,绿色荧光蛋白在肌肉组织中稳定高效表达。结论此实验方法制备病毒的质量能够满足小动物体内实验的要求,为进一步应用其进行基因治疗打下基础。