鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22表达的关系及意义

目的研究鼻咽癌中MAP3K5和Epstein-Barr病毒编码的miR-BART22的表达及其相关性。方法收集53例鼻咽癌石蜡档案标本和30例鼻咽黏膜慢性炎标本,分别行EBER和miR-BART22原位杂交及MAP3K5免疫组化检测;另分别选取10例鼻咽癌和鼻咽黏膜新鲜标本提取蛋白行MAP3K5的Western blot检测。结果 53例鼻咽癌EBER均阳性,49例miR-BART22阳性;30例鼻咽黏膜慢性炎EBER和miR-BART22均阴性。MAP3K5在53例鼻咽癌组织中50例为阴性,癌巢周围粘膜组织呈阳性表达,3例弱阳性(+)表达。30例鼻咽粘膜慢性炎中,25例强阳性表达(++～+++),3例弱阳性(+)表达,2例阴性;鼻咽癌和鼻咽黏膜慢性炎MAP3K5差异具有统计学意义(P<0.001);Westernblot检测结果黏膜慢性炎MAP3K5蛋白表达值高于鼻咽癌(P=0.029)。MAP3K5和miR-BART22表达呈负相关(P<0.001)。结论 MAP3K5在鼻咽癌组织中表达水平低于黏膜上皮组织。MiR-BART22与之相反,在鼻咽癌中高表达,而黏膜慢性炎中缺乏。MAP3K5和miR-BART22在鼻咽癌中表达呈负相关。根据以上实验和相关文献,我们推测MAP3K5可能是EB病毒miR-BART22靶标基因,EB病毒miR-BART22通过抑制MAP3K5的表达,使相应磷酸化MAP3K5蛋白减少,进而下调MAPK通路下游基因蛋白的磷酸化,并行使对NPC细胞抑制凋亡、阻止分化并促进免疫逃逸等作用。     

新生儿肾脏成熟性实性畸胎瘤1例

死婴,女,3天,系第一胎第一产,胎龄42+2周,骨盆狭窄,过期妊娠于1999年5月9日剖宫产娩出.出生时阿氏评分1分钟8分,5分钟、10分钟均10分,第2天开始多次出现全身皮肤苍灰、呼吸急促、困难,心率减慢,第3天经抢救无效死亡.生前体格检查:     

RT-PCR检测癫痫手术标本中柯萨奇病毒B感染

目的 观察癫痫病理标本的病理组织学表现,并检测临床诊断癫痫病手术标本中是否存在柯萨奇病毒B感染.方法 显微镜下观察30例癫痫病理切片组织学改变,利用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测柯萨奇病毒B(Coxsackierirus B,CVB)感染情况,并选用20例无癫痫病史的尸体解剖组织作为对照组.结果 30例癫痫标本有共同的病理组织改变,其中14例(46%)CVB阳性,20例正常脑组织均阴性.结论 提示临床诊断为原发性和难治性癫痫的病人其实有相当部分存在嗜中枢神经病毒如CVB的感染,癫痫的发生可能同病毒感染有一定关系,但有时因感染症状为一过性或处于亚临床状态或以癫痫为首要表现,而常被临床医生忽视.所以,当利用各种抗癫痫药物甚至手术治疗都无明显的效果时,临床应该考虑到病毒感染可能是尚未根除的原因之一,并且积极进行病毒学相关检查.     

粘附分子CD29和VEGF在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨胃癌组织中粘附分子CD29的表达水平及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的关系.方法:选择胃癌患者84例和浅表性胃炎患者48例对CD29和VEGF抗体SP法免疫组化染色.结果:84例胃癌标本中CD29有68例阳性,阳性率为80.9%,48例浅表性胃炎组织中有12例阳性表达,阳性率为25%(P<0.05).胃癌中70例(83.3%)VEGF阳性表达.其中有63例VEGF与CD29共同表达.具显著正相关(P<0.05).CD29的表达与患者的年龄、性别和肿瘤的大小、组织学类型及浸润深度无关.但与肿瘤的淋巴结转移具有显著的相关性(P<0.05).结论:CD29可通过介导VEGF的表达促进肿瘤新生血管的形成,从而进一步促进肿瘤的生长和转移.     

人NESG1基因慢病毒载体的构建及其在293FT细胞中的表达

目的克隆人NESG1基因,构建与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的慢病毒载体pGC-FU-NESG1-EGFP,包装慢病毒,感染293FT细胞并进行鉴定。方法以NESG1全长克隆为模板扩增其编码框序列,通过限制性内切酶AgeI酶切、T4 DNA连接酶连接,将NESG1插入慢病毒载体pGC-FU-EGFP,构建pGC-FU-NESG1-EGFP重组载体。质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经PCR及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染人胚肾细胞系293FT,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293FT细胞,荧光显微镜下观察感染效率,Western blot方法检测NESG1-EGFP融合蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体pGC-FU-NESG1-EGFP,三质粒共转染293FT细胞后可见大量绿色荧光;浓缩病毒后测定其滴度为2×107 TU/ml;以复感染系数MOI为1感染293FT细胞,感染效率在90%以上。Western blot证实细胞表达NESG1。结论成功构建NESG1慢病毒表达载体,包装得到高滴度慢病毒,为后续感染鼻咽癌细胞,探索其在鼻咽癌发生和发展中的作用奠定了基础。     

促性腺激素释放激素激动剂对卵巢上皮性癌裸鼠移植瘤化疗效果的影响及卵巢功能的保护作用

目前,卵巢上皮性癌(卵巢癌)仍是妇科恶性肿瘤中首要的死亡原因,其发病日趋年轻化,且多数确诊时已到晚期.传统的手术治疗、放化疗及生物治疗等治疗措施疗效有限,副反应大,5年生存率徘徊在30%左右.     

具有转移能力鼻咽癌细胞株候选抗药与多药耐药相关基因的筛选

目的 筛选具有转移能力的鼻咽癌细胞株中候选抗药与多药耐药相关基因.方法 利用8000点的基因芯片比较5-8F和6-10B细胞株之间的差异表达基因,并利用在线MILANO程序分析,筛选抗药与多药耐药相关基因.半定量RT-PCR验证差异表达基因.结果 分析5-8F和6-10B细胞株之间基因表达谱后,共找到283个差异表达基因,其中表达上调基因185个,下调基因98个.MILANO程序分析后,在5-8F细胞株中找到4个可能与抗药和多药耐药相关的高表达基因:UGT1A9(15.85倍)、MVP(6.77倍)、CAV1(2.49倍)和HIF1A(2.67倍).半定量RT-PCR验证4个基因筛选结果的可靠性.结论 经在线MILANO程序分析鉴定的鼻咽癌5-8F和6-10B细胞株之间的差异表达基因可能与具有转移能力鼻咽癌细胞株的抗药和多药耐药有关.     

临床基因诊断的伦理问题及对策探讨

分子诊断尤其是基因诊断是近年来随着生命科学研究的不断发展而应用于疾病诊断和治疗的新技术,主要包括产前基因诊断、儿童基因诊断及成人基因诊断。从医学实践方面阐述了分子诊断领域的医学伦理学问题以及如何正确的开展分子诊断方面的医疗实践工作,旨在指导所有的医学工作者在分子诊断领域形成正确的伦理观。     

联合检测P16及Ki67在宫颈鳞状上皮内病变中的表达及临床意义

目的 探讨子宫颈鳞状上皮内病变（SIL）中免疫组化检测P16和Ki67表达情况及其临床意义。方法 收集经宫颈活检或宫颈锥切术样本120例。实验样本均经过有经验的病理医生诊断为SIL。其中47例诊断为低级别鳞状上皮内病变(LSIL),73例诊断为高级别鳞状上皮内病变(HSIL)。选择宫颈慢性炎30例作为对照组。采用免疫组化方法检测研究标本中P16和Ki67蛋白的阳性表达情况，并总结分析其结果。结果 在宫颈不同级别鳞状上皮内病变病例中，P16和Ki67蛋白的阳性表达率具有显著差异（P<0.01）,HSIL P16蛋白阳性表达率比LSIL明显升高（P<0.05）；在不同级别SIL中，同时表达P16和Ki67阳性率不同（P<0.001）。HSILP16和Ki67蛋白同时阳性率比LSIL明显升高（P<0.05）。结论 联合检测P16和Ki-67蛋白可以鉴别不同级别的鳞状上皮内病变，可帮助鉴别LSIL和HSIL的病理诊断，对临床预后的判断有较高的价值。