慢性移植物肾病患者血瘀证与其临床病理关系的研究

目的：研究慢性移植物肾病（CAN）患者血瘀证评分与其肾活检病理类型及临床指标的关系,探讨血瘀证在CAN病情发展过程中的作用,为临床使用活血化瘀中药治疗CAN提供依据。方法：对符合纳入标准的患者行血瘀证症状分级量化标准评分,分析患者肾活检病理类型以及年龄、移植时间、三酰甘油（TG）、胆固醇（CHO）、蛋白尿等临床指标与血瘀证评分的关系。结果：（1）共收集到符合标准的CAN患者64例,其中符合中医血瘀证患者50例（占78.13%）,非血瘀证患者14例。（2）BanffⅠ级CAN患者8例,血瘀证评分为（26.75±1.98）分;BanffⅡ级CAN患者26例,血瘀证评分为（35.84±6.05）分;BanffⅢ级CAN患者16例,血瘀证评分为（48.43±4.93）分,三组之间血瘀证评分有统计学差异（P〈0.05）。（3）CAN患者有合并蛋白尿或高血压的血瘀证评分均较高,与无合并症患者有统计学差异（P〈0.05）。（4）患者血瘀证评分分别与移植时间、TG、CHO具有统计学差异（P〈0.05）。结论：（1）血瘀证是CAN常见中医证候,CAN患者血瘀证与其病理分级及患者的蛋白尿、高血压、高血脂有密切关系;（2）研究结果为临床上应用活血化瘀中药（或改善微循环药物）治疗CAN提供理论依据,同时揭示了纠正CAN患者蛋白尿、高血压、高血脂的重要性。     

致敏肾移植受者术前单次大剂量抗胸腺细胞球蛋白诱导治疗的价值

目的探讨致敏肾移植受者术前单次大剂量抗胸腺细胞球蛋白(ATG)免疫诱导治疗的价值. 方法 21例致敏肾移植受者随机分为大剂量(9 mg/kg,术前单次)和常规剂量(1.5～2 mg·kg-1·d-1,10～12 d)ATG诱导治疗组,大剂量组受者男6例、女4例、年龄(38.2±3.4)岁、透析时间(9.3±13.4)个月、群体反应性抗体(PRA)水平[Ⅰ类(27.6±26.4)%,Ⅱ类(25.3±19.8)%]、抗人白细胞抗原(HLA)错配数(1.9±0.7)个;常规剂量组男3例、女8例、年龄(42.2±6.7)岁、透析时间(8.6±10.7)月、PRA水平 [Ⅰ类(32.6±28.4)%;Ⅱ类(23.9±19.7)%]、HLA错配数(2.0±0.8)个,2组差异均无显著性意义(P＞0.05). 结果 2组受者均未发生超急性排斥反应.术后1个月内发生急性排斥反应大剂量组受者1例,常规剂量组4例,2组差异无显著性意义(P＞0.05).大剂量组受者血清肌酐均在术后3～7 d降至正常,常规剂量组2例发生移植肾功能延迟恢复,其中1例在术后21 d恢复正常,另1例术后45 d时血肌酐降至300 μmol/L.所有受者均无严重不良反应和感染.大剂量组受者发生肝功能损害1例.随访4～14个月,大剂量组受者移植肾功能正常,常规剂量组1例受者在术后3个月时移植肾失功. 结论术前单次大剂量ATG给药安全有效,可作为致敏肾移植受者新的术前免疫诱导治疗方法.     

TNF-α和IFN-γ对肾小管上皮细胞趋化因子表达的影响

目的探讨细胞因子TNF-α和IFN-γ对肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11表达的影响。方法分别以TNF-α以及IFN-γ和TNF-α联合作用肾小管上皮细胞HK-2不同时间后,用Real-time PCR和ELISA分别检测CXCL9、CXCL10和CXCL11 mRNA和蛋白水平。用流式细胞术检测淋巴细胞表面CXCR3表达情况,通过趋化实验检测细胞培养上清对淋巴细胞的趋化作用。结果肾小管上皮细胞在TNF-α作用12 h后能够诱导趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11mRNA表达上调,CXCL9 mRNA的表达在48 h达到高峰,而CXCL10和CXCL11 mRNA表达高峰在12 h;CXCL9、CXCL10和CXCL11蛋白的基础分泌水平均较低,在TNF-α作用12 h后,分泌水平也逐渐升高,CXCL9、CXCL10在48 h时分泌达到高峰,CXCL11分泌高峰在72 h。与TNF-α单独作用组和IFN-γ单独作用组相比,TNF-α和IFN-γ联合作用使肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11 mRNA表达和蛋白分泌明显增强(P<0.05)。与新鲜分离的淋巴细胞相比,活化的淋巴细胞表面的CXCR3表达明显升高(P<0.05)。TNF-α以及IFN-γ和TNF-α联合作用HK-2细胞培养上清对活化的淋巴细胞具有明显的趋化作用(P<0.05)且能被抗CXCR3抗体所阻断(P<0.05)。结论细胞因子TNF-α能诱导肾小管上皮细胞趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11表达,且与IFN-γ联合作用对趋化因子的表达具有协同作用。     

输尿管镜手术并发症分析与防治

目的：总结输尿管镜手术并发症及其防治措施。方法：：对250例应用输尿管镜手术患者临床资料进行回顾性分析，统计术中、术后发生的各种并发症及其处理方法。结果：术中输尿管穿孔3例（1．20％），1例改行开放手术，2例经留置双J管保守治疗；术后肉眼血尿173例（69．2％），应用止血药物对症治疗1～2天后血尿消失；术后腰痛41例（16．4％），其中肾绞痛5例（2．0％），针对引起腰痛的不同原因进行相应处理；感染9例（3．6％），经抗感染和拔除双J管等治疗后恢复；结石残留28例（占输尿管结石患者12．4％），子保留双J管行ESWL治疗后痊愈。结论：应用输尿管镜手术成功率高。严重并发症较少见，且绝大多数行保守治疗可得到解决；熟练的手术操作是减少输尿管镜手术并发症的关键。     

肾移植术后患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制物水平与肾功能的关系

目的 探讨肾移植术后患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制物(CyC)的水平变化与移植肾功能的相关性.方法选择193例使用他克莫司(FK506)加霉酚酸酯(MMF)加泼尼松(Pred)三联免疫抑制剂肾移植患者术后的血、尿标本,测定血清CyC和血、尿肌酐.经统计学分析,与常规的血清肌酐(SCr)浓度及尿肌酐清除率(CCr)和内生肌酐清除率(CkCCr)作相关性比较,评估CyC判断移植肾肾小球滤过功能的敏感性和特异性.结果 193例肾移植患者术后第5天血清CyC、SCr和CCr、CkCCr分别为(1.91±1.28)mg/L、(174.2±129.1)μmol/L、(67.9±27.3)ml/min、(68.1±27.8)ml/min.其中CyC浓度＜1.25 mg/L者42例,1.25～2.00 mg/L者102例,＞2.0 mg/L者49例;SCr浓度＜125/μmol/L者62例,125～200μmol/L者83例,＞200/μmol/L者48例;CkCCr＞80ml/min者52例,80～60 ml/min者96例,＜60 ml/min者45例.CyC与SCr呈正相关(r=0.886,P＜0.001),与CkCCr呈负相关(r=-0.907,P＜0.001);SCr与CkCCr呈负相关(r=-0.889,P＜0.001).非参数受试者工作特征曲线分析CyC、SCr、CCr、CkCCr曲线下面积分别为0.877、0.771、0.832、0.909,其诊断敏感性和特异性分别为91.6%、69.3%,52.2%、96.1%,67.5%、77.1%和84.6%、71.3%. 结论 肾功能轻度损害时,血清CyC比SCr先一步增高,有可能成为评定肾移植患者移植肾功能的敏感性标志物.     

C4d沉积在抗体介导的慢性排斥反应中的临床意义

Objective To explore the significance of peritubular capillary C4d deposition in histopathological changes, renal function and prognosis of the patients with antibody-mediated chronic rejection (AMCR). Methods Deposition of C4d in the kidney was examined by irnmunohistochemistry on routine paraffin-embedded sections using anti-C4d polyclonal antibody. Seventy-seven patients were divided into C4d+ group (n = 35) and C4d- group (n = 42). The relationship of C4d and renal function,histopathological changes and prognoses of allografts were analyzed. Results The number of patients with tubular atrophy and glomerular basement membrane proliferation in C4d+ group was significantly more than that in C4d group (P＜0.05). Mean serum creatinine level was significantly higher in C4d+ group than in C4d- group 12 months after renal transplantation [(379.1 + 260.2)μmol/L vs (260.5 + 175.3) μmol/L, P＜0.05]. According to Kaplan-Meier analysis, the one-year graft survival rate was lower in the C4d+ group (62.9% ) than in the C4d- group (83.3% ) (logrank P＜0.05). Conclusion Patients with C4d deposition are associated with tubular atrophy and glomerular basement membrane proliferation. The serum creatinine level in C4d+ patients was significantly higher than in C4d- group at the 12th month after transplantation. More patients with C4d deposition lost their grafts during the study period.     

肾移植术后的肝功能异常

为探讨肝功能异常对肾移植患者存活的影响，对４８例肾移植前后发生肝功能异常的病例资料进行分析。术前乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阳性，伴或不伴丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）升高者３２例，术后肝功能正常者１８例，肝功能异常但经治疗预后好者６例，预后差者８例；术前仅ＡＬＴ升高者９例，术后肝功能正常者３例，肝功能异常但经治疗预后好者５例，预后差者１例；术前肝功能正常，术后发生肝功能异常者２８例，大部分系药物的肝毒性所致，经治疗预后好者１４例，预后差者１４例。认为ＨＢｓＡｇ阳性和ＡＬＴ异常并非肾移植术的禁忌证；对药物的肝毒性应引起足够的重视。     

Notch1受体表达水平在移植肾排斥反应诊断中的意义

目的 探讨肾移植受者外周血单个核细胞(PBMC)上Notch1受体表达水平与移植肾排斥反应之间的关系.方法 肾移植受者40例均采用环孢素A(或他克莫司)、吗替麦考酚酯和糖皮质激素预防排斥反应.根据移植肾穿刺活检结果(Banff'97标准)将受者分成3组,其中急性排斥反应组11例,钙调磷酸酶抑制剂(CNI)中毒组16例,肾功能稳定组13例,抽取血液样本;急性排斥反应组中有8例于排斥反应逆转后再次抽取血液样本;另取11名正常人的血液样本作为对照.常规提取样本中PBMC,用流式细胞仪间接荧光法检测Notch1的表达水平.结果 急性排斥反应组受者外周血PBMC上Notch1的荧光强度明显高于CNI中毒组、肾功能稳定组和正常对照组(P<0.05).CNI中毒组、肾功能稳定组和正常对照组荧光强度的差异无统计学意义(P>0.05).40例受者外周血PBMC上Notch1的荧光强度为2.60±2.37,血肌酐为(241.2±137.1)μmol/L,二者之间存在相关性(r=0.358,P<0.05).急性排斥反应组受者排斥反应逆转后的Notch1的荧光强度低于排斥反应期间,差异有统计学意义.结论 肾移植受者急性排斥反应期间外周血PBMC上Notch1受体表达水平增高.Notch1可做为监测肾移植受者免疫状态的指标,其表达水平与同期肌酐水平有相关性,可在一定程度上反映排斥反应对肾功能的损害程度.     

C4d沉积在抗体介导的慢性排斥反应中的临床意义

目的 探讨移植肾肾小管周围毛细血管补体片段C4d沉积与抗体介导的慢性排斥反应的病理形态、移植肾功能及预后的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测77例肾移植受者移植肾肾小管周围毛细血管中C4d的沉积情况,根据检测结果分为C4d阳性组(35例)和C4d阴性组(42例).检测并比较C4d阳性和阴性组受者移植肾的病理形态结构、移植肾功能及预后.结果 与C4d阴性组比较,C4d阳性组受者移植肾肾小管萎缩和肾小球基底膜增生分层的例数明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05).C4d阳性组受者的血肌酐水平在移植肾穿刺后12个月时较C4d阴性组受者明显升高,分别为(379.1±260.2)μmol/L和(260.5±175.3)μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05).C4d阳性组受者移植肾穿刺明确C4d阳性后1年内移植肾存活率为62.9%(22/35),而阴性组受者为83.3%(35/42),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在抗体介导的慢性排斥反应中,移植肾C4d沉积常见的病理学改变为肾小管萎缩和肾小球基底膜增生分层,C4d阳性抗体介导的体液性慢性排斥反应加快了移植肾功能丧失的进展速度,使C4d阳性受者的移植肾功能丧失率升高,导致存活率降低.     

草酸和草酸钙结晶损伤肾小管上皮细胞的差异蛋白质组学研究

目的 分析并鉴定草酸和一水草酸钙(COM)结晶损伤人肾小管上皮细胞(HK-2)后细胞蛋白质谱的表达变化,探讨肾小管上皮细胞受损在肾结石形成中的可能作用.方法 体外培养正常HK-2细胞至90%融合后,换无血清培养基,随机分为2组.实验组培养基内加入2 mmol/L草酸+200 mg/L COM结晶,37 ℃孵育.分别抽提2组细胞的总蛋白,双向凝胶电泳结合液相色谱-电喷雾离子阱质谱(LC-ESI-MS/MS)技术对2组中差异表达的蛋白质进行分离和鉴定.蛋白印迹法对鉴定出的蛋白进行验证.结果 成功建立细胞总蛋白的双向凝胶电泳图谱,经软件分析和质谱鉴定出差异蛋白质12个:FK506结合蛋白4、α-烯醇酶、M2型丙酮酸激酶、ATP合成酶α亚单位、3′,5′-二磷酸核苷酸酶1、核磷蛋白2、L-乳酸脱氢酶B、芽胞发芽蛋白3、Cofilin-1、Fascin、40S核糖体蛋白S17和胞液氨基肽酶1.差异蛋白涉及细胞能量代谢、细胞增殖、凋亡、钙离子通道活性调控、细胞运动及信号转导等多种生理活动.蛋白印迹法检测示HK-2细胞损伤后ENO1蛋白表达上调,而Cofilin-1表达下调,证实双向凝胶电泳和质谱分析可靠.结论 高浓度草酸和COM结晶可使正常人HK-2细胞蛋白表达发生改变,这些差异表达蛋白既可起到细胞的自我保护作用,又可能通过相应途径在肾结石的形成中起重要作用.

Abstract：

Objective To analyze and identify the differentially expressed proteins in human renal tubular epithelial cells (HK-2) after injury caused by oxalic acid and calcium oxalate monohydrate (COM) crystal, and to explore the potential role of renal tubular cell injury in kidney stone formation.Methods Normal HK-2 cells were cultured in vitro and the culture medium was changed with serum-free medium after cell growth to confluence. Oxalic acid and COM crystals (final concentration at 2 mmol/L and 200 mg/L, respectively) were added in the experimental group. Cells in both groups were then incubated at 37 ℃ for 12 h. The extracted proteins from both groups were separated by two dimensional electrophoresis followed by analysis, and the differentially expressed proteins were identified by liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). Two identified proteins were then verified by western blot. Results Reproducible two dimensional gel images of the proteins from both groups were successfully obtained. By using LC-ESI-MS/MS, 12 proteins: FK506-binding protein 4, isoform alpha-enolase of alpha-enolase, isoform M1 of pyruvate kinase isozymes M1/M2, ATP synthase subunit alpha, isoform 1 of 3′(2′), 5′-bisphosphate nucleotidase 1, isoform 2 of nucleophosmin, L-lactate dehydrogenase B chain, Budding uninhibited by benzimidazoles 3, Cofilin-1, Fascin, pyIsoform 1 of cytosol aminopeptidase, were identified. The deferentially expressed proteins were related to cellular processes including energy metabolism, cell multiplication, apoptosis, Ca2+ channel activity regulation, cell movement and signal transduction. Western blot verified that higher ENO1 but lower Cofilin-1 expressed in HK-2 cells after the injury. Conclusions High level oxalic acid and COM crystals can cause protein expression profile changes in normal human HK-2 cells. The changes of protein expression may not only protect HK-2 cells from being injured, but also be related to kidney stone formation.