携带变形链球菌表面蛋白、葡聚糖结合蛋白及信号肽基因的真核表达质粒的构建

目的通过构建带有变形链球菌表面蛋白SpaP的P区、葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区（glucan bind-ing domain,GBD）及一段信号肽基因的嵌和体真核表达质粒pSSG,为基因疫苗的制备提供实验基础。方法通过PCR扩增,获得分别编码SpaP的P区和GBD的两个基因片段sp和gg,以及人白介素2信号肽基因（signal）。将它们分别定向插入pMD20-T克隆载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆,初步鉴定后测序。将获得的3个基因片段分别双酶切,胶回收纯化后将同样进行双酶切的pVAX1质粒在T4 DNA连接酶作用下进行连接反应,获得真核表达质粒pSSG,并转化DH5α,提取纯化pSSG,进行质粒RCR,酶切电泳鉴定并测序。结果真核表达质粒pSSG构建正确,目的基因sp、gg和signal定向插入至真核表达载体。结论真核表达质粒pSSG包含了SpaP的P区和GBD以及人白介素2信号肽的编码基因,为基因疫苗研究奠定基础。     

变形链球菌pacA和gtfB-cat与ctxB嵌合表达质粒的构建及表达

目的:构建含变形链球菌表面蛋白A区编码基因(pacA)、葡糖基转移酶催化区编码基因(gtfB-cat)及霍乱毒素B亚单位编码基因(ctxB)的嵌合表达质粒并表达目的蛋白。方法:将目的基因pacA、gtfB-cat、ctxB克隆至原核克隆载体pET32-a(+)构建嵌合质粒pET-pacA-cat-ctxB,将其转入表达宿主菌E.coliBL21(DE3),并测量其表达情况。结果:构建的重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,证实目的基因均正确插入到载体pET-32a(+)中,插入的相位正确,未改变目的基因的阅读框架,经诱导后表达目的蛋白,分子质量大小与预期一致。结论:成功构建了嵌合质粒pET-pacA-cat-ctxB,且它们均在原核细胞内获得正确表达。     

案例教学法在口腔内科临床实习中的应用

基于案例的教学法是在传统教学模式基础上发展而来的一种实践教学方法.重庆医科大学附属口腔医院口腔内科学教研室在口腔医学本科生临床实习期间尝试开展案例教学法,通过与传统教学方法进行比较,发现案例教学法能激发学生学习兴趣,提高学生临床思维.同时,师资队伍的培养和考核方式的改革应与新的教学模式相适应,以充分发挥其优势.     

茶多酚对复发性阿弗它溃疡患者血液流变学的影响

目的:探讨茶多酚对复发性阿弗它溃疡患者的疗效及血液流变学影响.方法:80例轻型RAU患者按就诊先后顺序随机分为TP治疗组和常规治疗组,用药前后进行血液流变学检测,同时观察治疗效果.结果:TP治疗组显效20例、有效16例、无效4例,总有效率90%;患者的全血比粘度(高切和低切)、血浆比粘度、纤维蛋白原和红细胞压积较治疗前...     

四川省洪雅县工矿区燃煤型氟中毒调查分析

目的了解四川省洪雅县工矿区燃煤型氟中毒流行现状及相关因素。方法选择洪雅县7个工矿区,以煤矿、冶炼企业密度在2.00个/km~2以上的4个乡镇为暴露组,密度在2.00个/km~2以下的3个乡镇为对照组。对人群进行氟斑牙、氟骨症病情调查,并测定空气、烟尘、食物含氟量及儿童尿氟水平。结果①暴露组与对照组比较,氟斑牙总检出率及8～12岁儿童氟斑牙检出率差异均有统计学意义(x~2值分别为830.849、9.615,P<0.01);而氟骨症检出率差异无统计学意义(x~2=1.075,P>0.05)。②暴露组室内、外空气及烟尘含氟量高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为5.87、17.82、7.68,P<0.01)。③暴露组居民食物含氟量与对照组比较,除腊肉(t=0.06,Jp>0.05)外,大米、玉米、马铃薯及饮用水含氟量差异均有统计学意义(t值分别为6.86、6.18、4.58、236.59,P<0.01)。④儿童尿氟水平两组比较差异无统计学意义(t=0.47,P>0.05)。结论工矿分布对地方性氟中毒病情有影响,防治氟中毒要以空气降氟为重点。     

变形链球菌质子移位膜ATP酶研究进展

耐酸性是变形链球菌的重要生理特征之一熏极大程度地影响细菌的竞争力和致龋性。质子移位膜ATP酶是耐酸性的决定因素,是变形链球菌固有的主要毒力因子。本文对变形链球菌质子移位膜ATP酶的结构、功能及作用机制等多方面研究作概括性介绍。     

饮料与牙齿健康

龋病发生中的食物因素,尤其是含糖类饮料的致龋性日趋引起国内外学者的关注和研究。本文总结了近几年有关的研究,着重综述了各种软饮料与牙齿健康的关系,以及降低酸性饮料对牙齿损害的措施。     

变形链球菌基因疫苗pcDNA3-gtfB鼻黏膜免疫家兔的实验研究

目的 观察变形链球菌防龋基因疫苗pcDNA3-gtfB经鼻腔黏膜免疫日本长耳大白兔后的免疫反应性,初步观察不同剂量质粒pcDNA3-gtfB免疫机体后的抗体效价.方法 实验分两部分,第一部分:30只日本长耳大白兔平均分为5组,每组6只,分别为:200 μg、400 μg 、600 μg pcDNA3-gtfB质粒组,400 μg pcDNA3组,灭活全菌疫苗阳性对照组.质粒组及全菌组以1:1比例添加弗氏佐剂后进行免疫,共免疫两次.第二部分:采用间接ELISA法检测血液、唾液中特异性IgG、S-IgA.结果 ①血液、唾液中抗体高峰时间为初始免疫后8~10周左右;②自免疫后1~2周,各质粒组兔血液、唾液中特异性抗GTF的IgG、S-IgA抗体水平同阴性对照组比较差异有统计学意义 (P＜0.05);③200 μg组与400 μg及600 μg组比较多时点差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ①基因疫苗pcDNA3-gtfB具有免疫反应性;②200 μg 、400 μg、600 μg的基因疫苗对于体重1.5 kg左右的兔都是有效的免疫剂量;③在本研究的条件下,400 μg、600 μg疫苗组效价优于200 μg组.     

变异链球菌表面蛋白SpaP P区真核表达质粒的构建及表达

背景：变异链球菌是龋病的主要致龋菌,针对介导变异链球菌非蔗糖依赖性黏附的重要毒力因子SpaP的基因疫苗在理论上能对抗变异链球菌黏附于牙面和进一步破坏牙体硬组织。 目的：构建变异链球菌表面蛋白P 区(SpaP/P)真核表达质粒pVAX1-spap/P,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。 方法：通过基因重组技术,构建真核表达质粒pVAX1-spap/P,并经酶切分析、测序分析鉴定正确后,采用脂质体转染法,将其转染至COS-7细胞中,然后经免疫组织化学SABC法检测其在细胞中的表达。 结果与结论：真核表达质粒pVAX1-spap/P经 EcoR Ⅰ和 Xba Ⅰ双酶切分析,证实携带1.2 kb的目的基因spap/P片段,经测序分析,目的基因正向插入到预先设计的载体位点处。pVAX1-spap/P转染的细胞胞质呈褐色,pVAX1空载体质粒转染的细胞胞质中无着色。证实实验成功构建真核表达质粒pVAX1-spap/P,所携带的基因序列正确,能够在真核细胞COS-7中正确表达目的蛋白。