优化和验证人精浆miRNAs提纯方法

目的优化精浆miRNAs提纯方法,为后续实验奠定基础。方法收集国家卫生计生委科研所生殖健康服务中心正常精液样本5例,非梗阻性无精子症(NOA)患者(经北京大学第三医院检查确诊)精液样本22例。根据不同RNA提取方法分为4组:Trizol LS组、蛋白酶K+Trizol LS组、miRNeasy Micro kit组及Trizol LS+miRNeasy Micro kit联合使用组(改良组)。比较4组提纯NOA患者精浆RNA的OD260/280,使用Agilent2100生物分析仪检测改良法提纯精浆miRNAs的纯度和质量,采用实时定量PCR方法比较4组精浆miR-106b的溶解曲线,并比较精液参数正常组(n=5)和NOA患者组(n=10)精液样本中的miR-106b的表达量。结果改良组提纯精浆RNA的OD260/280为(1.90±0.03)显著高于其他3组(P0.05);改良组提纯精浆miRNAs的完整数合格,色谱图位置特异性明显,峰值清晰;4组miR-106b的溶解曲线中,改良组曲线符合标准;NOA患者精浆中miR-106b的表达丰度显著低于参数正常组(P0.01)。结论Trizol LS与miRNeasy Micro kit联合使用提纯的精浆miRNAs质量好,能满足后续实时定量PCR、深度测序等实验要求。小样本分析发现NOA患者精浆miR-106b含量显著低于精液参数正常组,有待大样本验证其是否能作为临床诊断NOA的分子指标。     

脊柱结核椎间盘LncRNA表达差异性分析及潜在诊断标志物筛选

目的 :应用表达谱芯片检测脊柱结核(spinal tuberculosis,STB)患者椎间盘中差异表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)及mRNA,并筛选有诊断标志物潜力的LncRNA。方法:从2018年9月～2020年12月于宁夏医科大学附属总医院脊柱骨科就诊的患者中选取STB患者(实验组)及脊柱退变患者(对照组)各28例。收集两组患者病变椎间盘并提取总RNA,两组各挑选3例合格标本通过Arraystar人类LncRNA V5.0版芯片进行检测并进行芯片数据处理计算各RNA的差异倍数(fold change,FC),其中FC≥2的LncRNA及mRNA为差异表达的RNA(P0.05)。将差异表达的LncRNA邻近的差异表达的mRNA视为cis-靶基因,将LncRNA可能结合的蛋白质视为trans-靶蛋白,并对mRNA、cis-靶基因、trans-靶蛋白进行基因功能注释分析。从差异表达的LncRNA中选取cis-靶基因与STB发病可能相关的LncRNA用剩余各25例标本进行RT-PCR验证,筛选有诊断标志物潜力的LncRNA并进行基因功能注释分析。结果:基于两组间芯片数据的差异共筛选出444个差异表达的LncRNA、186个差异表达的mRNA。基因功能注释分析提示差异表达的LncRNA的cis-靶基因主要参与对转录、翻译、剪接、免疫反应、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等生物学过程的调控及信号通路的传递;trans-靶蛋白主要参与对RNA的剪接、加工、转运等基因表达过程的调控;差异表达的mRNA主要参与对转录、翻译、剪接、炎症反应、免疫反应等生物学过程的调控及信号通路的传递。RT-PCR验证发现LINC01128-201、Lnc-DNALI1-205在STB患者中存在明显下调表达,与芯片检测结果一致,且这两个LncRNA可能通过调控ISG15、SNIP1、HES4表达量在STB发病过程中发挥重要作用。结论:STB患者与脊柱退变患者椎间盘的LncRNA及mRNA存在较大的表达差异,其中下调表达的LINC01128-201、Lnc-DNALI1-205可能在STB发病过程中发挥重要作用,且有成为诊断标志物的潜力。     

上颌窦海绵状血管瘤动脉栓塞后切除1例

患者女,24岁,主因“右侧鼻腔通气差,间断流黄水1个月”入院。查体：外鼻无畸形,右侧上颌窦区、筛窦区压痛,右鼻腔外侧壁凸出一白色新生物,鼻中隔受压轻度左偏,肿物下方可见下鼻甲。鼻与鼻窦CT显示右侧上颌窦肿物,右鼻腔外侧壁骨质受压移位;增强扫描肿物明显不均匀强化（图1）。术前穿刺抽出新鲜血液,穿刺处渗血较多。患者于术前经右股动脉插管,接受双侧颌内动脉、面动脉造影及栓塞治疗。     

乙型肝炎病毒所致慢性肝病病人肝脏铁沉积和脂肪变性的MRI定量研究

目的 根据多回波Dixon技术定量测得的R₂*值和质子密度脂肪分数（PDFF）评价乙型肝炎病毒（HBV）所致慢性肝病病人的肝脏铁含量和脂肪含量,探讨定量测量与病情进展的关系。方法 回顾性分析97例HBV所致慢性肝病病人,所有病人均行钆塞酸二钠（Gd-EOB-DTPA）增强MRI检查。根据病情进展状态将病人分为3组,慢性乙型肝炎（CHB）组21例,乙肝肝硬化（LC）组44例,LC合并肝细胞癌（HCC）组32例。另外纳入正常对照（NC）组20例。全部研究对象均进行了MRI多回波Dixon序列扫描,测量其肝实质R₂*值和PDFF;测量HCC病人病灶处的R₂*值和PDFF,获取所有LC病人的肝功能Child-Pugh评分。采用Kruskal-Wallis检验比较组间R₂*值和PDFF差异;采用配对t检验比较HCC组病灶与邻近正常肝组织的R₂*和PDFF。采用Spearman相关分析所有受试者R₂*值与PDFF,及LC病人Child-Pugh评分与其R₂*值、PDFF之间的相关性。结果 ①LC组、HCC组R₂*均高于NC组（均P<0.05）,HCC组R₂*高于CHB组（P<0.05）;HCC组PDFF高于NC组（P<0.05）。其余2组间R₂*和PDFF的差异均无统计学意义（均P>0.05）。②HCC病人病灶处的R₂*低于邻近正常肝组织（P<0.05）,而两者PDFF差异无统计学意义（P>0.05）。③所有受试者R₂*与PDFF呈正相关（r=0.558,P<0.05）,LC病人肝脏R₂*与Child-Pugh评分呈正相关（r=0.336,P<0.05）,PDFF与Child-Pugh评分无相关性（r=0.102,P>0.05）。结论 HBV所致慢性肝病病人可出现肝脏铁沉积和脂肪变性;随着病情的进展,肝脏铁含量和脂肪含量呈升高趋势;癌变病灶表现为肝脏富铁背景下的乏铁灶。     

衰老大鼠跑台抗阻训练模型的实验研究

目的:探讨衰老大鼠跑台抗阻训练模型的建立。方法:以45只19月龄SD大鼠为实验对象,利用动物跑台,通过大鼠爬坡状态和运动后血乳酸变化确定跑台抗阻训练的爬坡最大角度、跑速及间歇训练时间,在此基础上,以无负重(抗阻训练模型Ⅰ组)、30%(抗阻训练模型Ⅱ组)、50%(抗阻训练模型Ⅲ组)和70%(抗阻训练模型Ⅳ组)最大负重等4种强度进行8周抗阻训练。训练结束后测量骨骼肌形态、横截面及蛋白质含量,评价抗阻训练对衰老大鼠骨骼肌的作用。结果:衰老大鼠跑台抗阻训练方案为跑台适宜坡度为35°,跑速15m/min,每次跑15s,间歇30s,每组4次,组间间歇3min,训练3组为一个循环,每天训练2个循环,隔天训练1次。训练8周后,抗阻训练模型各组肌纤维排列相对整齐,且抗阻训练模型Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组实质横截面积和肌蛋白含量均显著大于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:利用动物跑台的动力和坡度结合大鼠负重建立抗阻训练模型可解决大鼠训练的主动性以及对训练强度、次数、组合的定量控制,跑台抗阻训练模型可有效预防和延缓衰老引起的增龄性骨骼肌质量下降。     

兔眼玻璃体内木质异物的磁敏感加权成像研究

目的 探讨兔眼玻璃体内木质异物的磁敏感加权成像(SWI)的特点.方法 取实验兔48只,右眼玻璃体内分别植入1枚直径0.2 mm、长2 mm的木质异物,以不植入异物的左眼为对照,于术后2小时行SWI序列检查.结果 对于48枚兔眼玻璃体内木质异物,SWI序列检出率为100％,检出的异物呈点状或条状,在幅值图、最小信号强度投影(mIP)图及SWI图上呈低信号,相位图上31枚呈低信号,13枚呈高信号.SWI序列检出异物直径较异物实际直径大.结论 兔眼玻璃体内木质异物在SWI序列上具有特征性,异物在SWI上具有放大效应,SWI序列可用于兔眼玻璃体内微小木质异物的检出和诊断.     

热打击致大鼠肠上皮IEC-6细胞钙超载损伤的初步研究

目的 研究不同程度热打击对体外培养大鼠肠黏膜上皮细胞IEC-6的钙超载及钙超载相关的损伤.方法 设置培养IEC-6细胞的温度梯度,Fluo-3Am探针加荧光显微镜及流式细胞术观察细胞内钙离子水平的改变,相差显微镜观察细胞形态学改变,考马斯亮蓝染色法观察细胞骨架变化,CCK-8法观察细胞活性改变,黏附实验观察基底膜黏附性改变.结果 与正常对照组比较,热打击组细胞内钙水平上升(P＜0.01),呈温度依赖性.热打击组细胞形态变圆,伪足变短,细胞间隙增大,45℃较43℃改变更为明显.考马斯亮蓝染色显示,热打击组细胞骨架增粗、紊乱,出现应力性纤维,45℃较43℃改变更为明显.CCK-8法显示,热打击组细胞活性下降(p＜0.01),呈温度依赖性.基底膜黏附实验显示,热打击组基底膜黏附性显著下降(P＜0.01),呈温度依赖性.结论 热打击可造成IEC-6细胞钙超载,并造成与钙超载相关的一系列细胞损伤,热打击对于肠黏膜上皮钙超载的影响及其机制的进一步研究将有助于了解热射病的发病机制.     

芬太尼复合右美托咪啶用于腰椎术后患者镇痛的效果

右美托咪啶(dexmeditomidine,DEX)是一种高效、高选择性α2肾上腺素能受体激动剂,具有剂量依赖性的镇静、镇痛、抗焦虑及交感神经抑制等作用[1],不良反应少。作者观察了芬太尼复合DEX用于腰椎术后患者的镇痛效果,报道如下。1对象与方法1.1研究对象60例ASAⅠ-Ⅱ级择期腰椎手术患者,年龄25~60岁,分为观察组和对照组,每组30例。术前用药为阿托品0.5mg和鲁米那0.1g肌内注射。1.2镇痛方法患者入室后静脉注射异丙酚2mg/kg、芬太尼2μg/kg、琥珀胆碱1.5mg/kg行麻醉诱导插管。术中以七氟醚和阿曲库铵维持麻醉。2组术毕均连接静脉自控镇痛泵。观察组给予芬太尼20μg/kg+止吐药帕洛诺司琼0.25mg+DEX2μg/kg,生理盐水稀释至100mL,对照组给予芬太尼20μg/kg+帕洛诺司琼0.25mg,生理盐水稀释至100mL。     

苍附导痰汤对米非司酮诱导PCOS大鼠卵巢形态及雄激素的影响

目的探讨苍附导痰汤对米非司酮诱导多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠卵巢形态及雄激素的影响。方法 60只Wistar大鼠分为正常组、模型组、二甲双胍组和苍附导痰汤高、中、低剂量组。采用皮下注射米非司酮造模并以阴道涂片监测大鼠发情周期,造模成功后各组灌胃干预9 d,处死动物,称量双侧卵巢质量,HE染色观察卵巢形态及卵泡发育情况,放射免疫法测定血清睾酮水平。结果和正常组比较,模型组大鼠血清睾酮水平、卵巢指数、窦前卵泡及初级卵泡数量明显增加,差异具有统计学意义(P0.05);和模型组比较,中药组及二甲双胍组大鼠血清睾酮、窦前卵泡数量、初级卵泡数量都明显降低(P0.05)。结论苍附导痰汤作用于米非司酮诱导的PCOS大鼠,可降低血清睾酮水平,使PCOS大鼠窦前卵泡、初级卵泡数量明显减少,改善卵巢多囊样改变。     

麦门冬汤对肺纤维化大鼠肺功能及内质网应激作用的影响

目的探讨麦门冬汤改善博来霉素所致肺纤维化模型大鼠肺功能及内质网应激(ERS)作用的相关机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、麦门冬汤1组(麦门冬与大枣质量比4∶1)、麦门冬汤2组(麦门冬与大枣质量比20∶1),经气管插管雾化注射博来霉素建立肺纤维化大鼠模型。造模后第14天每日早晚2次灌胃麦门冬汤,连续给药20 d。观察大鼠一般情况,通过HE和Masson染色观察肺组织的病理变化,检测大鼠用力肺活量(FVC)、0.4秒率(FEV0.4/FVC)、质量FVC、吸气阻力(Ri)、呼气阻力(Re)、肺顺应性(Cydn),并用Western blot和免疫组织化学染色分析肺组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况。结果与正常组相比,模型组FVC降低、0.4秒率升高、质量FVC下降、Cydn降低;与模型组相比,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组FVC升高、0.4秒率降低,麦门冬汤2组质量FVC回升,麦门冬汤1组和麦门冬汤2组Cydn升高。病理可见模型组大鼠的肺组织实变区内慢性炎性细胞浸润,大量胶原沉积,高表达的GRP78和CHOP蛋白主要定位于空泡化的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡs)。麦门冬汤2组大鼠炎症缓解,胶原沉积减少,肺组织中GRP78和CHOP蛋白的表达均减少。结论麦门冬汤能够明显改善大鼠肺功能,减少肺间质胶原沉积,可能与调节纤维化肺组织实变区内AECⅡs的GRP78和CHOP蛋白表达,缓解ERS压力,恢复AECⅡs的正常功能有关。