液基细胞学检测及巴氏涂片在宫颈癌筛查中的应用比较

目的:比较潮州农村地区宫颈癌筛查中液基细胞学检测(TCT)和巴氏涂片检测的应用价值.方法:采用分阶段整群抽样方法,选取潮州市5 个乡镇,招募35 ～ 59 岁的女性,同时行人乳头状瘤病毒(HPV)检测、TCT 和巴氏涂片检测,符合条件者进行阴道镜下活检和随访,评价TCT 和巴氏涂片检测的筛查效果.结果:3 723 例接受筛查女性中,总体而言,TCT 检测的灵敏度高于巴氏涂片(Fisher′s Exact Test,P ＜ 0.01),特异度、阳性预测值、阴性预测值无明显差异.两种检测方法的结果具有一致性(Kappa ＝ 0.14,P ＜ 0.001).巴氏涂片制片不满意率高于TCT(χ2 ＝ 64.3,P ＜ 0.001).结论:此次农村地区宫颈癌筛查中,相比巴氏涂片检测,TCT更为灵敏、制片效果更好,能提高宫颈病变的检出率,但诊断准确性没有明显差异.     

活血化瘀法治疗急性充血性青光眼术后反应

活血化瘀法治疗急性充血性青光眼术后反应山东博兴县中医院（２５６５００）韩其江，李智敏急性充血性青光眼由于来势凶猛，高眼压又难以单用药物迅速控制，为了减少对视功能的损害，在用药物使眼压得到基本控制后，眼部组织虽有水肿充血的情况下也可施行眼外引流术。但是...     

黄芪多糖对高氧致新生大鼠支气管肺发育不良 mir?34a/sirt1轴的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)对高氧诱导支气管肺发育不良(BPD)新生大鼠微小 RNA?34a(mir?34a)/沉默信息调节因子 1(sirt1)轴的影响。方法将 2018年 1月至 2019年 1月参加实验的 64只大鼠按照随机数字表法分为空白对照组(NC组)、 APS对照组(APS组)、高氧诱导 BPD模型组(BPD组)、 APS治疗 BPD组(BPD+APS组)每组 16只。 NC组、 APS组暴露在空气中; BPD组、 BPD+APS组大鼠暴露在氧浓度(70±5)%环境中。 24 h后 APS组和 BPD+APS组,腹腔注射 100 mg·kg-1·d-1 APS,NC组和 BPD组腹腔注射同体积生理盐水,每天 1次直至大鼠处死。建模 10、17 d,称量大鼠体质量变化;苏木素 ?伊红(HE)染色观察肺组织形态学变化;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测肺组织中白介素 ?6(IL?6)、白介素 ?10(IL?10)、肿瘤坏死因子 ?α(TNF?α)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性变化;实时荧光定量 PCR(qRT?PCR)检测肺组织中 mir?34a水平变化;免疫组化、蛋白质印迹法(Western blot)检测肺组织中 sirt1水平变化。结果 NC组与 APS组建模 10、17 d体质量,肺组织形态, IL?6、 IL?10、TNF?α、MDA、mir?34a、sirt1水平, SOD活性均无明显变化(P＞0.05)。与 NC组、 APS组相比, BPD组建模 10、17 d体质量下降,肺组织结构不完整、肺泡数量减少、体积增大、结构简单化, IL?6、TNF?α、MDA、mir?34a表达升高［(211.32±47.68)比     

EZH2基因与卵巢癌细胞系A2780化疗敏感性的关系

目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系.方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Rea...     

EZH2基因沉默逆转卵巢上皮性癌细胞顺铂耐药性的实验研究

EZH2基因是果蝇zeste基因增强子的人同源物,作为一种转录抑制因子参与基因沉默,在细胞生长调控中发挥着重要作用~([1]).研究发现,EZH2基因可以抑制相关癌基因的活性,在前列腺癌~([2])、乳腺癌~([3])和胰腺癌~([4])等多种恶性肿瘤组织中高表达,促进肿瘤生长、侵袭和转移.然而迄今为止,对EZH2基因参与卵巢上皮性癌(卵巢癌)化疗耐药及其机制的研究鲜见报道.     

抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性影响的研究

目的:研究抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性的影响。方法:用浓度递增法建立卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;Stem-loop real-time PCR技术检测A2780/Taxol及亲本细胞A2780中hsa-miR-27a表达水平;利用脂质体Lipofectamine2000将化学合成的miR-27a抑制物及阴性对照(Negative Control,NC)转染A2780/Taxol细胞;分别用Real-time PCR和蛋白印迹法技术检测MDR1mRNA和P-glyco-protein(P-gp)蛋白表达;MTT检测A2780/Taxol对紫杉醇敏感性的变化;流式细胞术检测细胞内P-gp荧光底物罗丹明123(Rh-123)的荧光强度。结果:(1)成功建立了卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;(2)miR-27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比,表达增高2.2倍。(3)P-gp蛋白在A2780/Taxol细胞中高表达,在A2780细胞中未检测出其表达;(4)转染miR-27a抑制物后,A2780/Taxol细胞的MDR1mRNA和P-gp表达下降,与转染NC组相比,P-gp表达降低36%;对紫杉醇的敏感性增加,IC50为0.53μmol/L,与转染NC组IC506.8μmol/L相比,有明显差异;(5)流式细胞仪结果显示,细胞内Rh-123荧光强度在转染抑制物的A2780/Taxol细胞为5.10±0.35,与A2780/Taxol细胞的2.95±0.39和转染NC的A2780/Taxol细胞的3.30±0.45相比,差异均有统计学意义。结论:hsa-miR-27a在卵巢癌耐紫杉醇A2780/Taxol细胞中高表达,可能通过间接调节P-gp的表达和功能,参与耐药。抑制miR-27a表达后,可以增加A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性,部分逆转耐药。     

Egr1信号途径参与NDRG1表达调节的机制研究

目的:研究人宫颈癌细胞中早期生长反应基因1(Egr1)信号途径参与N-myc下游调节基因1(NDRG1)表达调节的机制。方法:以人宫颈癌细胞株SiHa为研究对象,利用siRNA干扰技术使Egr1基因沉默,用RT-PCR和W estern blot检测转染前后Egr1表达的变化。通过RT-PCR和W estern blot检测细胞在低氧条件下,以及转染siRNA-Egr1后在低氧或低氧模拟物(DFX)条件下,Egr1与NDRG1表达的变化。结果:siRNA能有效地抑制Egr1基因表达(P0.001)。低氧条件下,Egr1、NDRG1的蛋白水平均明显升高(P0.001)。转染siRNA-Egr1 48h后,细胞在低氧条件下作用1h,Egr1 mRNA表达显著下降(P0.05)。细胞转染siRNA-Egr1 48h后,在低氧及DFX条件下作用24h,结果显示DFX使NDRG1 mRNA的表达显著高于低氧条件(P0.05)。同时也显示siRNA-Egr1能够使NDRG1 mRNA水平明显减少(P0.05)。结论:体内环境因素如低氧、DFX等上调NDRG1基因的表达,通过Egr1信号途径参与NDRG1在宫颈癌细胞中表达的调节。     

Box-Behnken设计-响应面法优化滇龙胆药材产地初加工工艺

目的:优化滇龙胆药材的产地初加工工艺。方法:采用高效液相色谱法测定滇龙胆中马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量,再以上述3种成分含量的总评归一值(OD值)为评价指标,对热烫温度、热烫时间和干燥温度进行单因素试验;在此基础上,采用Box-Behnken设计-响应面法优化滇龙胆药材产地初加工工艺并进行验证,再与阴干样品进行比较。结果:滇龙胆药材产地初加工最优工艺为热烫时间5 min,热烫温度40℃,烘干温度60℃。验证试验结果显示,滇龙胆药材中3种成分的平均OD值为0.565 2,与预测值(0.570 6)的偏差为0.94%。与阴干样品比较,滇龙胆最优工艺样品中3种成分含量的OD值明显升高,表明优化工艺加工的滇龙胆样品质量更好。结论:优化的工艺稳定、可行,可用于滇龙胆药材的产地初加工。     

微小RNA 27a在卵巢上皮性癌紫杉醇耐药细胞中的表达及其与耐药的关系

目的 研究微小RNA 27a(miR-27a)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)紫杉醇耐药细胞中的表达及其与耐药的关系.方法 采用实时PCR技术检测卵巢癌A2780细胞及其紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol中miR-27a的表达水平.利用脂质体lipofectamine 2000将成熟miR-27a的模拟物、阻遏物及阴性对照(NC)转染A2780和A2780/Taxol细胞,实时PCR技术检测转染细胞中MDRI基因mRNA的表达;蛋白印迹法检测转染细胞中P-糖蛋白(P-gp)和同源结构域相关的蛋白激酶2(HIPK2)蛋白的表达;采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪分别检测紫杉醇作用于转染后细胞的增殖情况及细胞凋亡率.结果 (1)miR-27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比表达水平增高2.2倍,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染miR-27a阻遏物后,A2780/Taxol细胞中MDR1 mRNA的表达水平为0.61±0.14,与转染NC细胞(表达水平为1.00)比较下降39%,差异有统计学意义(P<0.05);P-gp印蛋白的表达水平为(26±5)%,HIPK2蛋白的表达水平为(30±6)%,分别与转染NC细胞的P-gp蛋白[(43±7)%]和HIPK2蛋白[(19±4)%]的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性增加,半数抑制浓度(IC50)为0.5 μmol/L,与转染NC细胞(IC50为6.8 μmol/L)比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率明显升高,达(32.5±3.6)%,与转染NC细胞的凋亡率(5.6±2.1)%比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)转染miR-27a模拟物后,A2780细胞中MDR1 mRNA的表达水平为2.21±0.11,与转染NC细胞(表达水平为1.00)比较升高121%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 miR-27a在卵巢癌紫杉醇耐药细胞中高表达,其町能通过调控靶基因HIPK2,间接调节MDB1及P-gp的表达和功能而参与耐药.