hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451通过调控MDRl/P-gp的表达和功能参与卵巢癌和乳腺癌细胞耐药

背景与目的：肿瘤细胞耐药是临床化疗失败的主要原因,微小RNA(microRNA,miRNA)在肿瘤细胞中的异常表达与耐药关系密切。本研究旨在探讨卵巢癌及乳腺癌细胞中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表达差异及其与耐药的关系。方法：用浓度递增法建立卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;颈环状引物实时定量聚合酶链反应(stem-loop quantitative real-time PCR,stem-loop RT-PCR)检测卵巢癌耐紫杉醇细胞A2780/Taxol和亲本细胞A2780以及乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM和亲本细胞MCF-7中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表达;利用Lipofectamine^TM 2000分别将成熟miRNA27a的模拟物、阻遏物及阴性对照(negative control,NC)RNA转染A2780和A2780/Taxol细胞,将成熟miRNA451的模拟物及NC转染MCF-7/ADM细胞;RT-PCR技术检测细胞MDR1 mRNA表达;蛋白[质]印迹法(Western blot)检测细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况。结果：miRNA27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比,表达增高2.2±0.30倍,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA451在MCF-7/ADM细胞中低表达,与MCF-7细胞相比,表达降低84%,差异有统计学意义(P<0.05)。A2780/Taxol细胞转染miRNA27a阻遏物后,MDR1 mRNA表达明显下降,与转染NC组相比,表达下降(39±0.14)%,差异有统计学意义(P<0.05)。P-gp相对表达量［(26±5.3)%)］与转染NC组的P-gp相对表达量［(43±6.7)%］比较,下降39%,差异有统计学意义(P<0.05)。对紫杉醇的敏感性增加,半数抑制浓度(IC₅₀)为0.53 μmol/L,与转染NC组IC50(6.8 μmol/L)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。A2780细胞转染miRNA27a模拟物后,细胞的MDR1 mRNA表达升高,与转染NC组相比,升高(121±0.11)%,差异有统计学意义(P<0.05);细胞对紫杉醇的敏感性下降,IC₅₀为0.2 μmol/L,与转染NC组IC₅₀(0.06 μmol/L)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。MCF-7/ADM细胞转染miRNA451模拟物后,MDR1 mRNA表达明显下降,与转染NC组细胞相比,表达下降(65±12)%,差异有统计学意义(P<0.05);P-gp相对表达量［(31±19)%)］与转染NC组细胞P-gp相对表达量［(83±12)%］相比,下降62%,差异有统计学意义(P<0.05);对阿霉素的敏感性增加,IC₅₀为4.61 μmol/L,与转染NC组细胞IC₅₀(26 μmol/L)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：在卵巢癌耐紫杉醇细胞A2780/Taxol和乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM中,miRNA27a和miRNA451分别异常表达,它们可能分别通过间接或直接作用于MDR1/P-gp,参与肿瘤细胞耐药的发生、发展。     

母婴分离产妇心理情绪对泌乳素及后期母乳喂养率的影响

目的 研究母婴分离产妇心理情绪对产妇泌乳素（PRL）及后期母乳喂养率的影响,探讨有针对性的早期干预措施.方法 选择192例母婴分离的产妇作为观察组,另选取同期住院分娩的176例母婴同室的产妇为对照组.采用症状自评量表SCL-90对产妇进行心理情绪评分,同时检测PRL水平,观察并比较产后乳汁分泌情况及后期母乳喂养率.结果 与母婴同室的产妇相比,母婴分离产妇的SCL-90心理情绪评分明显升高（P＜0.01）;伴随负面心理情绪的出现,母婴分离产妇PRL水平降低、泌乳始动时间延长、乳汁量减少、后期母乳喂养率降低,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 母婴分离产妇应激引起的负面心理情绪影响产妇PRL水平,关注母婴分离产妇的心理变化,适时采取积极的护理干预措施,对保证和促进母婴健康有推动作用.     

钙敏感受体在阿霉素诱导大鼠心肌损伤过程中的表达

目的检测阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导大鼠心肌损伤过程中心肌钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)表达水平的变化,初步探讨钙敏感受体在心肌损伤中的作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组(n=10)和损伤组(n=30),损伤组大鼠分为3周组、6周组和9周组。采用腹腔注射阿霉素(2.5mg.kg-1.w-1)诱导大鼠心肌损伤。应用超声心动图检测各组大鼠左心室内径以及功能。取大鼠心肌组织,HE染色观察大鼠心肌形态和结构的变化。Western blot和免疫组化法检测CaSR蛋白的表达。结果①与对照组相比,9周组大鼠左室舒张末期内径(LVDD)增加(P<0.05),左室射血分数(LVEF)明显降低(P<0.01);②HE染色显示对照组心肌细胞形态正常,损伤组心肌出现细胞肿胀,胞浆疏松淡染、嗜酸性增强,细胞核增大,横纹不清及空泡样变性;③阿霉素作用3周后CaSR表达明显降低(P<0.01)。6周组与3周组比较无显著性差异。9周组与对照组无明显差异,但明显高于3周组和6周组(P<0.01)。结论在DOX诱导大鼠心肌损伤过程中,CaSR表达先降低后升高,这可能为临床治疗阿霉素引起的心肌损伤提供药物作用靶点及对心肌损伤和心功能降低的判定具有一定意义。     

普米克配伍博利康尼雾化治疗毛细支气管炎52例疗效观察

资料与方法 1临床资料 本组为2004年11月至2005年2月的住院患儿，按1987年成都会议诊断标准诊断为毛细支气管炎（简称毛支）者92例，随机分为两组，其中治疗组52例（男27例，女25例），年龄2～14个月；对照组40例（男21例，女19例），年龄3～15个月。两组均急性起病，持续或阵发性喘憋，明显呼气性呼吸困难及双肺充满高调喘鸣音为主要特征，喘憋缓解时或可听到双肺弥漫性细湿罗音。白细胞总数正常，分类淋巴细胞比例稍偏高。X线表现为不同程度梗阻肺气肿及支气管周围炎影像，少数肺纹理增粗。两组动脉血氧饱和度和血氧分压的平均值无显著性差异（P〉0．05）。     

二胎婴儿母乳喂养的影响因素分析与护理对策

目的了解全新计划生育政策下二胎婴儿的母乳喂养情况,分析其母乳喂养的影响因素,并探讨母乳喂养的针对性护理方法。方法随机选取2016年7月至2017年7月我院住院分娩的5000例二胎产妇为研究对象,采用调查问卷方法了解产妇母乳喂养情况,并对调查资料予以单因素方差分析及多元线性回归分析。结果 5000例二胎婴儿中,纯母乳喂养1084例,混合喂养1946例,产妇分娩方式、家庭人均收入、产后伤口是否疼痛、乳头是否凹陷、乳房是否胀痛、母乳喂养认知以及乳汁是否充足组间比较差异具有统计学意义(P 0. 05);将单因素纳入多元回归分析显示,剖宫产、家庭人均收入 4000元、产后伤口疼痛、乳头凹陷、乳房胀痛、乳汁不足为影响二胎婴儿母乳喂养的主要危险因素,知晓母乳喂养知识为保护因素。结论二胎婴儿母乳喂养率较低,应针对其影响因素制定相关护理干预措施,有效提升母乳喂养率,促进二胎婴儿优生优养。     

急性冠脉综合征高同型半胱氨酸血症与血叶酸等的关系

目的:测定急性冠脉综合征(ACS)患者中血浆高同型半胱氨酸(Hcy)水平,研究其与血浆叶酸、维生素B12的关系。方法:对52例ACS患者与46例对照组患者的血浆Hcy及叶酸、维生素B12水平进行比较分析。结果:ACS患者血浆Hcy含量明显高于对照组(P<0.01),而血浆叶酸和维生素B12水平明显低于对照组(P<0.01)。两组血浆Hcy含量与叶酸、维生素B12含量呈负相关(r=0.505,0.405,P<0.01)。结论:高Hcy血症通过加速动脉粥样硬化而导致急性冠脉综合征。补充叶酸、维生素B12或许对急性冠脉综合征的防治有益。     

接受式音乐疗法在老年糖尿病患者中的应用

目的 探讨接受式音乐疗法对于老年糖尿病患者的疗效.方法 76例老年糖尿病患者随机分为治疗组和对照组.两组均给予常规糖尿病治疗,治疗组同时配合以接受式音乐疗法.运用汉密顿焦虑量表评分及血糖谱、糖化血红蛋白测定,在治疗前后对两组患者进行评定.结果 接受式音乐疗法可以帮助老年糖尿病患者克服焦虑情绪,促进康复,血糖代谢水平也得到不同程度缓解.     

栽培黄藤药材的化学成分研究

目的:研究栽培黄藤(Fibraurea recisa PielTe.)药材的化学成分.方法:化学成分用溶剂提取后以色谱方法分离,经波谱分析鉴定结构.结果:分离鉴定了巴马汀(Palmatine,1)、药根碱(Jatrorrhizine,2)、小檗碱(Betberine,3)、非洲防己碱(Columbamine,4),四氢巴马汀(Terahydropalmatine,5),罗默碱(Roemerine,6)、黄藤内酯(Fibrautin,7)、Fibleucin(8)、齐墩果酸(Oleanolic acid,9)、β-谷甾醇(β-sitosterol,10)和胡萝卜苷(Daucosterol,11)共11个化合物.结论:栽培和野生黄藤药材化学成分的结构类型和主成分一致,均以巴马汀(1)和黄藤内酯(7)为主.化合物5-6、8-11为首次从黄藤中分离得到.     

EZH2 shRNA真核表达载体的构建及其在卵巢癌A2780细胞系的稳定表达

目的 采用基因工程技术,构建EZH2 shRNA的真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的卵巢癌A2780细胞系.方法 合成特异性干扰EZH2的shRNA片段并定向克隆插入Supersilencing shRNA质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo,获得表达载体pGPU6/GFP/Neo-shEZH2.脂质体介导重组质粒转染A2780细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,Real time RT-PCR和Western blot检测转染后细胞系EZH2的表达.结果 测序结果证实重组载体构建成功,稳定转染shEZH2的A2780细胞EZH2的mRNA和蛋白水平下降(90.20±1.66)%和(73.80±5.49)%,P＜0.01,差异有统计学意义. 结论成功构建EZH2 shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的A2780细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的卵巢癌治疗奠定实验基础.     

游泳时室温恒定下不同湿度对早产儿的影响

目的探讨游泳时室温恒定下不同湿度对早产儿的影响。方法纳入适宜游泳早产儿研究对象,分三个不同湿度组(50～60%,60～80%,80%以上),每组60例,观察记录三组新生儿每日游泳后第1次进奶量、游泳后第1次睡眠时间、游泳后7d体重的改变、院内感染人数。结果湿度增加,早产儿第1次进奶量增加,游泳后第1次睡眠时间合理,一周体重增长程度高,但院内感染率有增加趋势。结论早产儿游泳需要有适宜的湿度。