慢性脑供血不足血栓前状态标志物水平变化及用药干预后的影响

目的探讨慢性脑供血不足（CCCI）患者是否存在血栓前状态及药物干预对血栓前状态标志物水平的影响。方法根据日本2000年修订的CCCI诊断标准选择研究对象90例,将其分为基础治疗组（A组）、养血清脑颗粒组（B组）、联合用药组（C组）各30例,同时选正常对照组（D组）27名,用药前后测定一氧化氮（NO）、血管内皮素-1（ET-1）、纤维蛋白原（FIB）、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）及组织型纤溶酶原激活物（t-PA）水平。结果A组、B组、C组治疗前分别与D组比较,NO、t-PA水平降低,ET-1、PAI-1、FIB水平升高（P〈0.05或P〈0.01）;B组、C两组治疗后各检测指标水平较治疗前均有统计学意义（P〈0.01）。治疗后,B组、C组与A组各检测指标比较均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论CCCI患者存在血栓前状态,而养血清脑颗粒能改善血栓前状态的各指标。     

碱性成纤维细胞生长因子对脑出血模型大鼠脑内神经干细胞增殖的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子( bFGF)对大鼠脑出血后运动功能恢复及脑部神经干细胞增殖的影响.方法 SD大鼠24只制作大鼠脑出血模型,随机分为对照组和实验组,每组12只.分别给予生理盐水和bFGF,分别于模型制作后和给药后28 d进行运动功能评分和Nestin抗原检测.结果给予bFGF组患鼠运动功能恢复明显优于对照组,实验组脑组织切片显示Nestin阳性细胞增殖明显.结论损伤局部注射bFGF可通过促进神经干细胞增殖和神经保护两条途径促进脑出血机体神经功能恢复,是一种值得进一步深入研究的方法.     

吡那地尔对癫痫持续状态大鼠海马神经元保护作用及对Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的研究吡那地尔对癫痫持续状态(SE)大鼠海马神经元保护作用及可能机制。方法随机将96只大鼠分成N组、SE组、Pin组、Gli组,每组按SE后12h、24h、72h、5d分为4亚组,用LiCl-PILO法进行SE动物造模,采用SABC检测Bcl-2、Caspase-3,TUNEL法检测凋亡细胞。结果N组TUNEL阳性细胞、Bcl-2及Caspase-3均有基础表达。SE组、Pin组、Gli组TUNEL阳性细胞均在72h达峰值、Caspase-3均在24h达峰值。同时间点比较,SE组、Pin组、Gli组较N组均明显增多(P0.05);Pin组较SE组、Gli组均明显减少(P0.05);SE组与Gli组比较差异无统计学意义(P0.05)。SE组、Pin组、Gli组Bcl-2均在12h达高峰。同时间点比较,SE组、Pin组、Gli组较N组均明显增多(P0.05);Pin组较SE、Gli组均明显减低(P0.05);SE组与Gli组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论吡那地尔可上调Bcl-2表达,抑制Caspase-3释放,对SE大鼠有脑保护作用,格列吡嗪拮抗吡那地尔此作用。     

抗癫痫中药作用机制研究进展

从调节神经递质、调控离子通道、抑制神经胶质细胞增生、抑制细胞凋亡、清除氧自由基等方面研究抗癫痫中药作用机制.     

大鼠神经干细胞的分离培养和鉴定

目的建立神经干细胞分离、培养、鉴定技术.观察神经干细胞生长、增殖特点.方法利用无血清培养,从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离神经干细胞,进行体外扩增培养、传代观察.采用荧光免疫细胞化学检测技术,观察鉴定神经干细胞.结果从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞克隆中有nestin表达阳性细胞,显微镜下观察到典型的干细胞特征.结论用上述方法分离培养的神经干细胞具有自我更新和增殖能力,通过鉴定确为神经干细胞.     

长托宁对癫痫持续状态大鼠海马神经元保护作用研究

目的探讨长托宁干预对癫痫持续状态(SE)后大鼠海马神经元损伤的保护作用及其可能机制。方法54只Wistar大鼠随机分为A组(对照组)、B组(模型组)和C组(长托宁组),后两组又分为6h、12h、24h、48h亚组。应用氯化锂-匹罗卡品制备SE模型。TUNEL法检测大鼠海马细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-2和Caspase-3的表达。结果SE后6h海马组织可见TUNEL、Caspase-3和Bcl-2阳性细胞表达,TUNEL和Caspase-3表达高峰均在24h;Bcl-2表达高峰在12h。C组各时间点TUNEL、Caspase-3阳性细胞较B组减少(除6h外,均P0.05),而Bcl-2阳性细胞数增加(除6h外,均P0.05)。结论长托宁可以上调Bcl-2,下调Caspase-3,长托宁可能通过抑制SE后海马神经元凋亡的机制,减轻SE时脑组织损伤,起到脑保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后脑组织CD40L、MMP-3的表达

目的探讨大鼠脑组织中CD40L和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在脑缺血再灌注损伤中的表达。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO)。将Wistar大鼠随机分组,假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组,又分为6h、24h、48h、72h、7d亚组)。采用免疫组化法检测大鼠脑组织中CD40L、MMP-3的表达。结果CD40L、MMP-3在假手术组不表达,再灌注6h后CD40L和MMP-3开始表达,24h表达明显增加,48h达高峰,72h开始下降,7d时有微量表达。神经功能评分与脑含水量变化与其一致。结论大鼠脑组织中的CD40L、MMP-3参与了脑缺血再灌注损伤。     

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中褪黑素受体和多效蛋白的表达

目的体外诱导成人骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经元样细胞分化,并探讨分化过程中多效蛋白（PTN）和褪黑素（Mel）受体亚型MT1、MT2 mRNA的表达,以探索MSCs向神经元样细胞分化的特性和机制。方法密度梯度离心加贴壁培养法分离成人MSCs,原代和传代培养。取第6代MSCs设对照和实验组进行诱导,诱导后30min至3d,观察细胞形态并计数。免疫细胞化学法和RT—PCR法测定分化后细胞神经细胞特异性表面标志神经元特异性烯醇化酶（NSE）、微管相关蛋白-2（MAP-2）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和诱导前、诱导后12hPTN和MT1、MT2 mRNA的表达。结果接种24h后MSCs开始贴壁,呈圆形或椭圆形。3d后可见梭状细胞呈集落状生长,10d～14d融合。第5代～第6代时呈现较均一的成纤维细胞样形态。诱导后胞体向胞核收缩;出现双极及多极细胞。12h变形细胞增多,细长突起相互连接。24h后变形细胞增多不明显。诱导后12h大部分细胞表达NSE、MAP-2,未检测到GFAP的表达。实验组诱导后12h细胞有PTN和MT1 mRNA的表达。结论PTN和Me1信号传导可能参与调控了MSCs向神经元样细胞的分化。     

依达拉奉对大鼠癫痫持续状态神经元细胞凋亡的影响

目的研究自由基清除剂依达拉奉对大鼠癫痫持续状态（SE）后神经元细胞凋亡的影响。方法采用氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态模型,实验Wistar大鼠随机分为实验组（72只）和对照组（C组,6只）,实验组分为模型组（M组）、依达拉奉单药治疗组（ED组）、联合地西泮治疗组（ED＋DI）,每组按照时间点分为4个亚组（12 h、24 h7、2 h、7 d）。免疫组化法检测大鼠脑组织的Bcl-2蛋白表达,及TUNEL法检测细胞凋亡的情况。结果 Bcl-2蛋白表达与对照组相比,M组12 h达高峰,24 h开始减少,7 d减至基础水平（P〈0.05）。而依达拉奉单药和联合地西泮治疗组与之比较,变化趋势相同但Bcl-2表达增多（P〈0.05）;M组TUNEL染色阳性细胞极多,12 h开始上升,48 h达高峰,之后有下降趋势（P〈0.01）。ED组TUNEL染色阳性细胞数值变化趋势相同但低于M组（P〈0.01）,高于ED＋DI组;ED＋DI组与C相比仍有统计学意义（P〈0.05）。结论依达拉奉对氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态所致脑损伤具有保护作用,其机制可能通过清除自由基上调Bcl-2蛋白表达及减少神经元细胞凋亡,联合地西泮治疗效果更显著。     

急性缺血性脑血管病患者血清可溶性CD40配体浓度变化的临床研究

对100例急性缺血性脑血管病患者及20例健康体检者采用超声检测颈动脉内膜中层厚度及斑块情况,头颅CT或MRI检查梗死灶,ELISA检测外周血清可溶性CIM0配体（sCIMOL）浓度,对脑梗死患者进行神经功能缺损评分。结果显示急性缺血性脑血管病患者斑块组血清sCIMOL水平高于无斑块组,梗死组高于腔隙梗死组与短暂性脑缺血组,且均高于对照组（P〈0．01）。血清sCIMOL浓度与神经功能缺损评分呈线性相关（r=0．748,P〈0．001）。CIM0／CIMOL信号通路参与颈动脉粥样硬化形成和斑块的破裂,且可能参与缺血性脑组织损伤。