脂肪组织来源干细胞的细胞生物学研究

目的 探索从脂肪抽吸物中脂质部分分离、培养脂肪组织来源干细胞(ASCs)的方法,并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定.方法 酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;MTT比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定其表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红"O"染色定性.结果 原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;MTT比色法活性测定均证实ASCs具有很强的增殖活性,细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性.丫啶橙染色3、4、6、8代无明显衰老.流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均成阳性;HLA-DR、CD133表达为阴性;免疫化学染色发现Ⅷ因子、CD31、CD34、CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红"0"染色可见胞浆内有大量红染颗粒.结论 自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化.     

荧光活性染料DiI标记人脂肪干细胞

目的:观察荧光活性染料DiI标记的人脂肪干细胞生长增殖情况,为脂肪干细胞研究寻找理想的细胞标记方法。方法:实验于2006-06/09在广州市创伤外科研究所完成。取人吸脂术中吸出的脂质部分,知情同意并签署知情同意书,用PBS缓冲液反复冲洗,剪刀剪碎。0.1%胶原酶37℃消化40min,使用等量体积含体积分数为0.1胎牛血清 DMEM 双抗完全培养基中和后,1300r/min离心5min,去上清液,沉淀混悬后150UM尼龙网过滤,按1×104～2×104接种于25cm2培养瓶中,置入37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中培养,2～3d换液。待细胞生长融合达80%即可传代,取第3～4代细胞供实验用。将收集细胞用PBS清洗离心2次,加入无血清DMEM制成细胞悬液,以1×109L-1密度加入5μLDiI应用液,37℃下孵育20min,1500r/min离心5min,PBS清洗离心2次,加入含体积分数为0.1胎牛血清DMEM培养基,应用荧光显微镜观察24,48,72h脂肪干细胞显色情况及形态变化。检测脂肪干细胞上清液乳酸脱氢酶含量及细胞XTT比色值,分析脂肪干细胞受损及增殖情况。结果:①DiI标记脂肪干细胞体外观察:台盼蓝染色见脂肪干细胞活力好,仅偶见蓝染细胞,荧光显微镜下观察,见全部细胞标记后均显红色荧光,标记的脂肪干细胞呈梭形,胞浆丰富,保持了良好的正常形态,DiI标记阳性率为100%。DiI标记后早期细胞形态呈荧光环状,48h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光。②培养脂肪干细胞上清液中乳酸脱氢酶含量及XTT法检测脂肪干细胞受损及增殖情况:未标记DiI的脂肪干细胞与标记DiI的脂肪干细胞形态、细胞上清液乳酸脱氢酶含量及XTT值差异不明显(P>0.05)。结论:①DiI能有效标记体外脂肪干细胞,并在细胞内稳定表达。②DiI标记的脂肪干细胞形态良好,对活体细胞无毒性。     

益气通络方加减内服外敷配合针灸治疗面神经炎效果探究

目的分析探讨面神经炎患者采用益气通络方加减内服外敷配合针灸的治疗效果。方法选择2015年6月至2017年6月在我院接受治疗的70例面神经炎患者参与研究,随机将患者分成两组,对照组35例,观察组35例。对照组患者采用常规的西医治疗方式,观察组患者则采用益气通络方加减内服外敷配合针灸进行治疗,对比两组患者的临床治疗效果。结果经过治疗对比,观察组患者的临床治疗效果显著优于对照组患者(P0.05)。结论对面神经炎患者采用益气通络方加减内服外敷配合针灸进行治疗,治疗效果显著。     

VEGF_(165)基因转染脂肪组织来源干细胞后目的基因表达

目的检测人脂肪组织来源干细胞(ADSC)经血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染后目的基因的表达,为下一步利用经基因转染的ADSC构建血管化组织工程脂肪组织打下基础。方法行腺病毒重组血管内皮生长因子165(Ad-VEGF165)基因转染ADSC,通过免疫细胞荧光和ELISA鉴定VEGF在细胞中的表达情况。结果经免疫荧光和ELISA检测证实腺病毒能成功地将VEGF165基因转染至ADSC中,并获得有效的表达。结论采用Ad-VEGF165基因转移技术,可以将VEGF转染至ADSC中,并有目的基因的表达,为促进脂肪组织工程血管化奠定基础。     

家族性腺瘤性息肉病的手术治疗:附45例报告

目的　总结家族性腺瘤性息肉病 (FAP)的临床诊治经验和教训。方法　回顾性分析手术治疗 45例FAP的临床病例资料。行全大肠切除回肠造瘘术 2 5例 ,次全结肠切除 直肠息肉电灼术15例 ,结肠全切除、直肠黏膜剥除、回肠经直肠肌鞘脱出及回肠肛管吻合术 5例。结果　患者首诊平均年龄 3 3 .5岁 ,3 5例有家族史。便血、腹泻、腹痛是常见临床表现。息肉数量均在 10 0个以上。术前漏误诊 10例 (2 2 .2 % )。癌变者 2 8例 (62 .2 % ) ,未癌变者 10例 (2 2 .2 % ) ,不典型增生 7例 (15 .6% )。癌变组与未癌变组间年龄相差有显著意义 (P <0 .0 5 )。 40例获定期复查随访。无癌变者存活 2～ 2 0a ;肝转移是癌变者死亡的主要原因 ,其存活时间 2 .5～ 4.5a。结论　FAP缺乏特征性临床表现 ,容易漏诊误诊 ;根据患者具体情况 ,早期手术治疗是防止FAP癌变的关键。     

改良臀区下部臀大肌肌皮瓣修复骶尾部褥疮

2008年6月至2010年3月,我们应用臀区下部臀大肌肌皮瓣修复骶尾部褥疮5例,皮瓣全部成活,效果满意. 1 资料与方法 1.1 一般资料 本组共5例,男4例,女1例,其中脊髓损伤3例,双下肢多发创伤、骨折1例,老年痴呆病1例.褥疮面积为7 cm×8 cm～12 cm×13 cm,深达骶脊韧带,创面均有不同程度感染.发病原因:骶尾部组织过度受压、组织坏死.     

持续输注法用于低位硬膜外麻醉效果观察

目的 观察持续输注法用于低位硬膜外麻醉的麻醉效果.方法 随机将60例需在低位硬膜外麻醉下完成手术的患者分为两组,每组各30例.常规分次给药组(I组),持续输注组(II组).硬膜外用药为2%利多卡因.两组患者均先注入试验量4～5 ml,观察5 min,未见全脊麻及局麻药中毒征象后,I组注入8～12 ml药液,间隔2 mi...     

光棒引导下气管插管的临床应用

目的:对光棒引导气管插管方法的临床效果及安全性等进行探讨和评价。方法:80例行气管插管的患者,随机分为光棒引导组(A组)和喉镜组(B组),观察记录两组插管时间、循环监测指标及不良反应。结果:A组患者插管时间明显短于B组(P<0.05),A组咽喉疼痛病例明显少于B组(P<0.05),B组患者插管后1 min MAP、HR与诱导前比较明显增加(P<0.05),A、B两组患者插管后1 min MAP和HR比较差异有统计学意义(P<0.05),两组插管成功率是一样的。结论:光棒插管技术简便实用,容易掌握,并发症少,成功率高。