Flow-FISH同时检测白血病患者细胞端粒长度及表面分化抗原的研究(英文)

本研究应用流式荧光原位杂交(Flow-FISH)方法检测白血病细胞端粒长度,并同时检测表面分化抗原,寻找一个可广泛应用的监测白血病微小残留病的新方法。提取白血病患者骨髓及健康对照者外周血单个核细胞进行Flow-FISH;比较白血病患者与对照者端粒长度的差异;初步分析端粒长度与白血病临床特征、预后的关系;追踪部分患者,观察不同病程中端粒长度与表面分化抗原的变化。结果表明:在34例初发白血病患者中,除CML-CP患者之外,其余端粒长度均较对照组显著缩短。在20例对照者中,端粒长度随年龄增长而缩短,女性较男性端粒长,而初发白血病患者的端粒长度与年龄、性别不相关。在18例AML患者中,可观察到M1患者端粒较长,M5患者端粒较短以及染色体核型高危组患者端粒较低危组患者端粒短的趋势。在可随访的23例急性白血病患者中,端粒长度大于中位数者初治缓解率较高。在5例CML-CP患者中,端粒长度较短者易早期发生急变。14例同时检测表面分化抗原的初发急性白血病患者,缓解后相关抗原表达率均下降,同时端粒延长,其中5例动态追踪的患者中,2例长期缓解者端粒长度在缓解期始终处于正常水平,且无特异抗原表达增高。3例复发者复发后端粒再次缩短,同时特异抗原表达增高,其中2例患者复发时相关抗原阳性细胞群端粒的缩短先于整个细胞群端粒长度的变化,先于骨髓细胞形态学改变。结论:Flow-FISH检测的细胞端粒长度是监测各类白血病疾病状态、评估预后的具有较普遍意义的指标。Flow-FISH同时检测细胞端粒长度和表面分化抗原有利于更早发现异常克隆预测复发,可能可作为监测白血病微小残留病的可广泛应用的新方法。     

STI571体外对急性非淋巴细胞白血病患者骨髓细胞c-kit表达的影响

为了探讨STI571体外对急性非淋巴细胞白血病患骨髓细胞c—kit表达的影响，采用逆转录—聚合酶使反应及流式细胞术分别测定不同浓度STI571处理前后骨髓细胞c—kit mRNA及CD117的表达。结果表明：c—kit mRNA及CD117的表达于STI571作用后呈浓度依赖性下降，培养后各药物浓度组与培养前及对照组之间都存在显性差异(P＜0．05)，且0．1μmol/L组的表达明显高于10μmol/L组，而空白对照组与培养前差异不显。结论：STI571在体外对急性非淋巴细胞白血病患骨髓细胞c—kit mRNA及CD117抗原的表达有明显的抑制作用，且具药物浓度依赖性。     

骨性材料复合绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞研究体系的建立与应用

背景：由于骨性生物材料和骨组织本身坚硬致密的物理特性,限制了对生长在其中的靶细胞的示踪研究。目的：针对骨性材料含钙、透光性差的特性,拟建立骨性材料复合绿色荧光蛋白基因标记的骨髓间充质干细胞的研究体系。设计、时间及地点：体外观察实验,于2008-06/2009-01在南方医科大学南方医院骨与软骨再生医学重点实验室完成。材料：β-磷酸三钙多孔骨性生物支架材料（1cm×1cm×0.8cm）购自上海贝奥路生物材料有限公司。3月龄新西兰大白兔用于获取并培养骨髓间充质干细胞。方法：①骨髓间充质干细胞以携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体标记后,接种于β-磷酸三钙骨性生物支架材料内部。②以荧光倒置显微镜观测材料中细胞的生长情况,并通过荧光定量聚合酶链反应等检测材料内部细胞的增殖情况。③以自创的半固体脱钙体系对复合细胞的材料脱钙后,制备连续冰冻切片观察;同时,采用不脱钙塑料包埋、扫描电镜等方法观察。主要观察指标：骨性材料中绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的分布、形态及增殖情况。结果：①荧光显微镜下观察到绿色荧光细胞在材料内部生长、增殖。②普通聚合酶链反应可对材料内的绿色荧光细胞进行定性分析,荧光定量聚合酶链反应检测的Ct值和接种的绿色荧光细胞数量呈指数相关,故可以对材料中的绿色荧光细胞进行定量分析。③半固体脱钙可使骨性材料内部坚硬的钙质成分消失,而细胞所在的位置、形态和荧光不变;不脱钙塑料包埋可以原位保留细胞形态和荧光,但仅适用于小块组织;而扫描电镜观察范围有限,细胞无法保留荧光。结论：建立了可在骨性材料内部方便、直观地追踪绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的体系,具有广泛的应用前景。     

骨性材料复合绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞研究体系的建立与应用术

背景:由于骨性生物材料和骨组织本身坚硬致密的物理特性,限制了对生长在其中的靶细胞的示踪研究.目的:针对骨性材料含钙、透光性差的特性,拟建立骨性材料复合绿色荧光蛋白基因标记的骨髓问充质干细胞的研究体系.设计、时间及地点:体外观察实验,于2008-06/2009-01在南方医科大学南方医院骨与软骨再生医学重点实验室完成.材料:β磷酸三钙多孔骨性生物支架材料(1 cm×1 cmx0.8cm)购自上海贝奥路生物材料有限公司.3月龄新西兰大白兔用于获取并培养骨髓间充质干细胞.方法:①骨髓间充质干细胞以携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体标记后,接种于β-磷酸三钙骨性生物支架材料内部.②以荧光倒置显微镜观测材料中细胞的生长情况,并通过荧光定量聚合酶链反应等检测材料内部细胞的增殖情况.③以自创的半固体脱钙体系对复合细胞的材料脱钙后.制备连续冰冻切片观察;同时,采用不脱钙塑料包埋、扫描电镜等方法观察.主要观察指标:骨性材料中绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的分布、形态及增殖情况.结果:①荧光显微镜下观察到绿色荧光细胞在材料内部生长、增殖.②普通聚合酶链反应可对材料内的绿色荧光细胞进行定性分析,荧光定量聚台酶链反应检测的Ct值和接种的绿色荧光细胞数量呈指数相关,故可以对材料中的绿色荧光细胞进行定量分析.③半固体脱钙可使骨性材料内部坚硬的钙质成分消失,而细胞所在的位置,形态和荧光不变;不脱钙塑料包埋可以原位保留细胞形态和荧光,但仅适用于小块组织;而扫描电镜观察范围有限,细胞无法保留荧光.结论:建立了可在骨性材料内部疗便、直观地追踪绿色荧光蛋白标记骨髓闻充质干细胞的体系,具有广泛的应用前景.     

血清黏蛋白抗原4对胰腺癌的诊断价值研究

摘要：目的：研究血清黏蛋白抗原4(mucin antigen 4,MUC4)对胰腺癌诊断价值。 方法：用ELISA法测定胰腺癌患者血清中MUC4的含量,根据ROC曲线确定MUC4的cut off值并计算ROC曲线下面积（AUC^ROC）,根据诊断效能评估表评价MUC4、CA19-9和CA242对胰腺癌诊断价值。 结果:胰腺癌患者血清MUC4的浓度和阳性率与慢性胰腺炎组及健康对照组比较有显著性差异(P<0.01),而慢性胰腺炎组与健康对照组之间无明显差异(P>0.05);MUC4的cut off值为4.54 ng/mL,AUC^ROC为0.880;胰腺癌患者血清MUC4表达敏感性、特异性和准确性明显优于CA19-9和CA242（P<0.01）。 结论:MUC4可单独或与其他指标联合应用诊断胰腺癌,作为鉴别胰腺癌和慢性胰腺炎的重要参考指标。     

急性髓细胞白血病患者CD56抗原表达与MDR1基因表达量的关系研究

目的 研究初治急性髓细胞白血病(AML)患者CD56抗原表达与多药耐药(MDR)1基因表达量的关系,探讨CD56抗原表达与MDR1基因表达量在AML耐药中的作用及相互关系.方法 采用流式细胞术(FCM)和建立实时荧光定量PCR技术分别检测79例AML患者CD56抗原表达及MDR1基因表达水平并分析两者之间的关系及临床意义.结果 24.1%AML患者表达CD56抗原,FAB亚型中M5 AML患者表达阳性率高于其他亚型.遗传学危险度分级高危组患者CD56抗原表达阳性率显著高于中危组(P<0.01),伴t(8:21)AML患者CD56抗原表达阳性率(57.1%)显著高于其他低危组AML(P<0.05).CD56抗原表达阳性初治AML患者MDR1基因表达水平显著高于表达阴性患者(P<0.001).MDR1基因高表达且CD56抗原阳性AML组的CR率(58.8%)显著低于MDR1基因低表达且CD56表达阴性组(89.2%,P<0.01).结论 AML患者CD56抗原表达与MDR1基因表达水平存在相关性;同时定量检测MDR1基因表达及CD56抗原表达更有助于判断预后.     

系统性红斑狼疮患者CD62P、CD63表达与SLEDAI相关性分析

目的:观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血血小板膜蛋白CD62P、CD63的表达,并探讨CD62P、CD63与SLE疾病活动指数(SLEDAI)之间的相关性。方法:采用流式细胞术对10例SLE患者外周血CD62P、CD63进行检测分析,以20例正常人作为对照。同时对该10例SLE患者进行SLEDAI评分。结果:SLE患者CD62P、CD63表达较对照组显著增高(P<0.01),CD62P表达与SLEDAI之间具有显著相关性(r=0.840,P=0.002)。结论:CD62P、CD63在SLE患者外周血中表达显著增高,CD62P可作为评估SLE疾病活动程度指标。     

自分泌血管内皮细胞生长因子对HL-60细胞生物学活性的影响

目的研究自分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)对髓系白血病细胞株HL-60的增殖及凋亡影响。方法采用脂质体转染VEGF165 cDNA入HL-60细胞,通过RT-PCR及ELISA方法鉴定转染克隆HL-60/VEGF165细胞中VEGF mRNA及蛋白的表达,MTT、集落形成实验比较HL-60/VEGF165及带有pcDNA3.1-- neo空载体的HL-60/neo细胞增殖活性,流式细胞仪观察转染细胞凋亡。结果HL-60/ VEGF165细胞的VEGF mRNA表达量增加,细胞培养上清中VEGF蛋白浓度为(399.07±12.45)ng/L,高于HL-60/neo 细胞的(184.45±10.53)ng/L(P<0.01);HL-60/VEGF165细胞与其对照组HL-60/neo 细胞相比较,生长速度明显加快,集落形成能力明显增加,集落数分别为(157.00±17.00)/500细胞和(110.00±12.90)/500细胞(P<0.05),而细胞凋亡率减少,分别为(3.18±0.33)%和(6.61±0.50)%。结论自分泌VGEF在白血病细胞的增殖与凋亡中起重要作用。     

全自动sta-compact凝血仪与半自动Coachrome-Ⅳ型凝血仪测定凝血因子Ⅷ促凝活性的比较

凝血因子Ⅷ活性测定是血友病A诊治过程中极为关键的检查项目,过去采用传统的手工操作、自配试剂等方法,FⅧ∶C测定结果波动较大.近年,随着半自动及全自动凝血仪的日渐普及,大大提高了FⅧ∶C检测的准确度及检测效率.本研究通过在全自动Sta-compact凝血仪和半自动Coachrome凝血仪上测定FⅧ∶C的比较,以探讨不同类型仪器测定FⅧ∶C的准确性,现报道如下.     

Bcr-abl融合基因阳性急性淋巴细胞白血病24例治疗结果分析

目的:分析bcr/abl融合基因阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的临床特征、治疗及其转归。方法:24例患者经骨髓细胞形态学、细胞化学、免疫分型、G显带技术核型分析、I-FISH技术检测bcr-abl融合基因检查确诊为bcr-abl阳性ALL。均予标准剂量联合化疗,其中7例行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)。结果:经过1～2个疗程DOLP方案诱导化疗完全缓解率为59%,进行allo-HSCT患者和仅用化疗患者的中位缓解期分别为13.8和4.7个月(P<0.05),中位生存期分别为21.2和11.8个月(P<0.05)。结论:bcr/abl融合基因阳性ALL患者预后差。与单纯化疗相比,allo-HSCT患者生存期明显延长。