血友病甲患者血浆中修饰型组织因子途径抑制物的研究

目的：探测血友病甲患血浆修饰型组织因子途径抑制物（TFPI）水平的变化及其与活化部份凝血酶时间（APTT）时间的相关性，方法：以ELISA法测定修饰型TFPI含量，以凝血一期法在半自动凝血仪上测定APTT与FⅧ：C。结果：28例血友病患血浆修饰型TFPI含量与正常组相比差异无显性，与APTT呈正相关，与FⅧ：C不相关。结论：血友病甲患修饰型TFPI含量与正常无差异，完全可能通过低调TFPI水平而达到止血治疗的目的。     

重组腺相关病毒载体介导的绿色荧光蛋白在急性髓性白血病患者骨髓间充质干细胞中的表达

目的 探讨重组腺相关病毒载体(rAAV-2-eGFP)是否可高效转导入骨髓间充质干细胞(BMSCs)。方法 从初发的急性髓性白血病(AML)患者骨髓中分离培养出BMSCs,在不同的感染复数(MOI =102, 103, 104, 105, 106,107)下用包含增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的rAAV-2-eGFP感染BMSCs,寻找最佳的感染条件,并在转染后的不同时间点用倒置荧光显微镜以及流式细胞仪观察其表达情况。结果 转染后10~14 d, eGFP在BMSCs中表达,转染效率为0.3%~2%,增加MOI亦不能明显增加转染效率。在MOI=105的条件下转染后观察了61 d, eGFP保持低水平长期稳定表达,在转染后的12~ 33 d,eGFP阳性的BMSCs从起始时的1.16%下降到(0.5~0.6)%,33~61 d一直维持在这一水平。结论 rAAV-2-eGFP和BMSCs可用于体外基因治疗,但极低的转染效率可能是其进一步应用的障碍。     

HLA-G在异基因造血干细胞移植中诱导免疫耐受

目的 研究供者粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员前后外周血和骨髓中单个核细胞人白细胞分化抗原G(HLA-G)膜表达以及血浆和骨髓液中HLA-G水平,揭示G-CSF动员骨髓移植优于外周血干细胞移植与骨髓中HLA-G有关的机制.方法 流式细胞术检测外周血和骨髓中单个核细胞HLA-G膜表达以及酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆和骨髓液中HLA-G水平.结果 动员后膜结合型HLA-G(m HLA-G)在外周血和骨髓中均显著高于动员前(P=0.001,P=0.000),且动员后骨髓m HLA-G含量较外周血中高(P=0.001).动员后外周血中分泌型HLA-G(s HLA-G)较动员前无明显差异(P=0.279),动员后骨髓中s HLA-G较动员前明显增高(P=0.002),且动员后骨髓s HLA-G较动员后外周血中含量明显增高(P=0.004).结论 HLA-G在G-CSF动员后造血干细胞移植(HSCT)诱导免疫耐受中具有重要作用.     

急性白血病患者病情与D—二聚体含量的相关性分析

目的：探讨急性白血病患者骨髓原始细胞加幼稚细胞数与同时期的凝血指示PT/INR、APTT、D-二聚体含量等的相关性及其临床意义。方法：骨髓涂片在显微镜下常规计数500个有核细胞，用凝血一期法测定PT/TNR，APTT，用乳胶凝集法测定D-二聚体含量。结果 ANLL组与ALL组的骨髓原始细胞 细稚细胞数与同时期的凝血指标PT/INR、D-二聚体含量呈显著正相关，但PT/TNR大都处于正常范围，异常率低，而D-二聚体异常率较高，与骨髓原始 幼稚细胞数异常率有较好的一致性。结论：可认为D-二聚体含量的变化可作为判断病情变化的参考指标之一。     

人纤溶酶原的分离纯化与抗血清的制备

人纤溶酶原的分离纯化与抗血清的制备易正山（广州南方医院血液科，广州５１０５１５）凌光鑫，周克元，黄进明，龚道元（广东医学院生化教研室）随着溶栓疗法在临床的普遍开展，单用纤溶酶原激活剂如尿激酶（Ｕｒｏｋｉｎａｓｅ，ＵＫ）、链激酶（Ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａ...     

骨性材料复合绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞研究体系的建立与应用

背景：由于骨性生物材料和骨组织本身坚硬致密的物理特性,限制了对生长在其中的靶细胞的示踪研究。 目的：针对骨性材料含钙、透光性差的特性,拟建立骨性材料复合绿色荧光蛋白基因标记的骨髓间充质干细胞的研究体系。 设计、时间及地点：体外观察实验,于2008-06/2009-01在南方医科大学南方医院骨与软骨再生医学重点实验室完成。 材料：β-磷酸三钙多孔骨性生物支架材料(1 cm×1 cm×0.8 cm)购自上海贝奥路生物材料有限公司。3月龄新西兰大白兔用于获取并培养骨髓间充质干细胞。 方法：①骨髓间充质干细胞以携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体标记后,接种于β-磷酸三钙骨性生物支架材料内部。②以荧光倒置显微镜观测材料中细胞的生长情况,并通过荧光定量聚合酶链反应等检测材料内部细胞的增殖情况。③以自创的半固体脱钙体系对复合细胞的材料脱钙后,制备连续冰冻切片观察;同时,采用不脱钙塑料包埋、扫描电镜等方法观察。 主要观察指标：骨性材料中绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的分布、形态及增殖情况。 结果：①荧光显微镜下观察到绿色荧光细胞在材料内部生长、增殖。②普通聚合酶链反应可对材料内的绿色荧光细胞进行定性分析,荧光定量聚合酶链反应检测的Ct值和接种的绿色荧光细胞数量呈指数相关,故可以对材料中的绿色荧光细胞进行定量分析。③半固体脱钙可使骨性材料内部坚硬的钙质成分消失,而细胞所在的位置、形态和荧光不变;不脱钙塑料包埋可以原位保留细胞形态和荧光,但仅适用于小块组织;而扫描电镜观察范围有限,细胞无法保留荧光。 结论：建立了可在骨性材料内部方便、直观地追踪绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的体系,具有广泛的应用前景。     

人肝癌组织中E-cadherin基因DNA单链构象多态性分析

目的　检测肝癌中 Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 的突变情况，探讨 Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 与肝癌发生和发展的关系。方法　采用 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ方法，分析了 １２ 例肝癌旁组织、５ 例肝癌栓组织和 ２２ 例肝癌组织 Ｄ Ｎ Ａ 样品中 Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 基因第 ６、９ 和 １０ 外显子 Ｄ Ｎ Ａ 单链构象多态性。结果　１２ 例肝癌旁组织和 ４ 例分化较好的肝癌组织中， Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 基因第 ６、９ 和 １０ 外显子均未见有异常。在 １８ 例恶性程度较高的肝癌组织中发现 ４ 例突变，其中 ２ 例突变发生在第 ９ 外显子，２ 例突变发生在第 ６外显子。５ 例肝癌栓组织中检出 ２ 例突变（占 ４０％ ），其中 １例突变在第 ９ 外显子，另１ 例突变发生在第 １０ 外显子。结论　 Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 基因随肝癌的恶化，特别随转移潜能的获得，而发生突变频率的增加，表明它可能与肝癌的发展和转移相关。     

流式细胞术测定血小板活化在先兆子痫孕妇中的临床应用

目的运用流式细胞术测定血小板的活化状态，探讨先兆子痫孕妇体内静息态与活化态血小板CD41a、CD62p、CD63等血小板膜糖蛋白表达量的变化及其临床意义。方法用免洗的全血免疫直标法，将血小板CD41a、CD62p、CD63荧光单抗分别标记25例正常人与20例正常孕妇及22例先兆子痫孕妇静息态及ADP活化后血小板，在流式细胞仪上测定其表达量。结果正常孕妇组与正常对照组比较，静息态间及活化态间血小板膜糖蛋白CD62p、CD63、CD41a表达量都没有显著性差异；而先兆子痫孕妇组静息态与活化态血小板膜糖蛋白CD62p、CD63表达量均较正常孕妇组显著增高，CD41a表达无显著性差异。结论先兆子痫产妇体内血小板膜糖蛋白CD62p、CD63表达处于较高水平，提示血小板处于活化状态。     

血缘关系供者外周血干细胞移植中移植物细胞组分对造血重建移植物抗宿主病的影响

目的 探讨HLA全相合血缘关系供者外周血干细胞移植(PBSCT)中移植物细胞组分对恶性血液病患者移植后造血重建、移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 回顾性分析我科107例接受HLA全相合血缘关系供者PBSCT的恶性血液病患者,其移植物细胞组分与移植后患者造血重建、GVHD的关系.结果 移植物各细胞组分与粒细胞重建时间无关;单个核细胞(MNC)、CD34+细胞数与血小板重建时间呈负相关(r值分别为-0.32和-0.21,P值均＜0.05).CD34+、CD34+CD38-细胞数与急性GVHD发生呈负相关(r分别为-0.24和-0.29,P值均＜0.05).淋巴细胞各亚群数量与急性GVHD发生均无明显关系.CD25+ CD4+、CD3+、CD4+ CD3+细胞数及CD4+/CD8+细胞比值与慢性GVHD发生均呈正相关(P值均＜0.05),且相关系数均大于0.4,其中CD25+ CD4+细胞数与慢性GVHD相关系数高达0.78.CD34+、CD34+ CD38-细胞数与慢性GVHD发生无明显关系.结论PBSCT中输入MNC、CD34+、CD34+ CD38-细胞数增加到一定阈值后,增加细胞数并不能进一步有效促进患者造血重建,反而有可能因输入淋巴细胞数增加而增加患者慢性GVHD、广泛慢性GVHD的发生率.     

黄芪多糖对粒单核系造血细胞的抗凋亡作用

本研究探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide,ASPS）体外对骨髓粒单核前体细胞的增殖作用和对HL-60细胞株凋亡的影响及其可能的作用机理.观察不同浓度（0,50,100,200 μg/ml）的黄芪多糖和TPO（100 ng/ml）对骨髓集落形成单位CFU-GM和HL-60集落生成的影响.用无胎牛血清（或1％）的改良型RPMI 1640培养液诱导HL-60细胞凋亡,加入或者不加入黄芪多糖共培养72 h后,进行细胞计数并用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测凋亡指标Caspase-3和JC-1的表达,并与正常组比较.结果表明,黄芪多糖（100,200 μg/ml）与TPO在体外能明显促进人骨髓细胞集落CFU-GM形成,同时黄芪多糖（50,100 μg/ml）也能促进HL-60细胞集落生成且其最大作用浓度为100 μg/ml,未发现其与TPO具有协同促进增殖的作用.无胎牛血清的RPMI 1640培养液能降低HL-60细胞的增殖,诱导细胞凋亡.HL-60细胞经黄芪多糖作用72 h后,与对照组相比细胞计数明显上升,由19×104个上升到34×104个（P＜0.05）,caspase-3表达相对于对照组明显下降,分别由10.5％,14.1％降至7.2％（P＜0.05）,7.8％（P＜0.05）.结论：黄芪多糖和TPO均能促进骨髓CFU-GM和HL-60细胞集落的生成;在无胎牛血清RPMI 1640培养液诱导细胞凋亡的情况下,黄芪多糖显著减少HL-60细胞的凋亡,保护HL-60细胞.