去氢表雄酮及其代谢产物对人肿瘤细胞系的抗增殖作用

目的: 研究去氢表雄酮（DHEA）及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）对HepG2和HT-29细胞增殖的抑制作用及其机制。方法: HepG2和HT-29细胞分别分为对照组、不同浓度（1、 10、 50、 100及200 μmol•L^-1）DHEA组和DHEAs组，孵育8、24、48及72　h后，分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和BrdU 测定法检测DHEA对肿瘤细胞的生长抑制率，同时测定3-羟基-3-甲基戊二酸单酰A还原酶（HMGR）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）及乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果： ①MTT法结果显示，与对照组比较，不同浓度DHEA组HepG2和HT-29细胞增殖抑制率均显著增加（P<0.05）。作用24 h时，100 μmol•L^-1DHEA组细胞增殖抑制率降低最显著（P<0.05），而DHEAs组差异无显著性（P>0.05）。②BrdU法结果显示，当DHEA浓度在50、100和200 μmol•L^-1时细胞的生长均显著受到抑制，尤其以HepG2细胞的生长抑制率最高（P<0.05）。③DHEA对HepG2细胞HMGR活性抑制率为62%，对HT-29细胞HMGR活性抑制率为51％，而 DHEAs则无明显作用。④100 μmol•L^-1DHEA抑制G6PD的效力为85%，而DHEAs的抑制效力仅为6%。⑤DHEA和DHEAs对细胞LDH的活性影响组间比较差异无显著性（P>0.05）。结论：DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用，能明显降低细胞的G6PD或HMGR活性，DHEAs则无明显作用。     

体外培养系统中IL-18诱导的快速肿瘤杀伤效应影响因素的研究

目的：应用rhIL-18在体外培养系统(Coculture system in vitro，CCs)中诱导快速肿瘤杀伤效应，并对这种快速杀伤效应的影响因素进行了探讨。方法：采用Stem Sep^TM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及树突状细胞(DCs)，流式细胞仪分析细胞表型，^125I-UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性。结果：rhIL-18在CCs中能够诱导快速肿瘤杀伤效应，这种杀伤效应与rhIL-18含量呈剂量依赖关系，DCs和T细胞的存在与否对这种杀伤效应无明显影响，同时这种快速杀伤效应无抗原特异性、不受MHC的限制。结论：在体外培养系统中只要有rhIL-18和NK细胞的存在，即能产生对肿瘤细胞的快速杀伤效应，即这种快速杀伤效应细胞为NK细胞。     

弓形虫病大鼠肝脏微量元素变化的观察

目的 :观察感染弓形虫对大鼠肝脏 5种微量元素 (Fe2 +、Cu2 +、Zn2 +、Ca2 +、Mg2 + )的影响。方法 :2 0只大鼠随机均分为正常组和感染组 ,每只大鼠腹腔注射 2 ml含 1.5× 10 6弓形虫速殖子的生理盐水悬液 ,6 4 d后将两组大鼠处死 ,取肝组织 ,用原子吸收分光光度仪测定其微量元素的变化。结果 :与正常组相比较 ,感染组肝组织 Fe2 +含量明显增加 (P<0 .0 1) ,Cu2 +含量明显减少 (P<0 .0 5 ) ,而 Zn2 +、Ca2 + 、Mg2 + 的含量变化均不显著。结论 :弓形虫感染能引起大鼠肝组织 Fe2 + 、Cu2 + 元素明显变化     

胃癌病人围手术期可溶性白细胞介素2受体的变化

目的 :观察胃癌病人围手术期血清可溶性白细胞介素 2受体 ( s IL - 2 R)的变化及其临床意义。方法 :全部病人于围术期检测 s IL - 2 R、皮质醇、免疫球蛋白及补体 ,按胃癌分期不同分成两组 ( A组即胃癌 、 期 ;B组即胃癌 、 期 ) ,观察分析胃癌病人 s IL - 2 R水平变化及其相关性。结果 :A组病人围手术期 s IL - 2 R水平均低于 B组病人 ,两组病人 s IL - 2 R水平于术后 1周有明显升高。结论 :s IL - 2 R水平变化可在一定程度上反映病人的病情轻重。胃癌病人血清 s IL - 2 R水平术后 1周明显升高 ,可能是手术应激反应导致病人术后免疫功能受到抑制。     

DHEA抑制大鼠转移性Morris肝癌的实验研究

目的：探讨去氢表雄酮（DHEA）的体内抗癌作用及其机制。 方法：Buffalo大鼠21只随机分为空白对照组(n=5);肿瘤对照组（把Morris肝细胞瘤移植到大鼠的两肋皮下,建立Morris 肝细胞瘤移植的Buffalo大鼠的体内模型）,喂养基础饲料(n=6)、DHEA肿瘤组（建立Morris肝细胞瘤移植模型后,在喂养的基础饲料中添加DHEA）(n=6)和去氢表雄酮硫酸酯（DHEA-s）肿瘤组（建立Morris肝细胞瘤移植模型后,在喂养的基础饲料中添加DHEA-s）(n=4)。分别喂养4周后,应用流式细胞术检测大鼠的免疫功能,应用磁场型高分解能质量分析仪（GC/MS）方法测定大鼠体内类固醇的含量,采用免疫组化方法染色检测磷酸化的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）蛋白表达,同时测定其对大鼠的毒副作用。 结果：DHEA肿瘤组的瘤重量［(8.31±0.61)g］较肿瘤对照组［(14.57±0.56)g］显著减小,抑制率达到43%。免疫组织化学染色显示DHEA肿瘤组的磷酸化PTEN蛋白表达量增加,同时提高了CD3、CD4阳性细胞百分率及CD4+/CD8+比值,与肿瘤对照组相比差异有显著性（P<0.05）。DHEA肿瘤组的胆固醇、甘油三脂及高密度脂蛋白的含量与空白对照组相比差异无显著性,未见其有毒副作用。 结论：DHEA对肿瘤具有明显的抑制作用,此作用是通过提高PTEN的蛋白表达和免疫功能来完成的。     

SARS患者肾上腺糖皮质激素治疗前后临床表现及胸部X线影像变化

目的：探讨严重急性呼吸系统综合征（SARS）患者激素治疗前后胸部X线影像的变化。 方法：分析7例SARS患者的临床特点及胸部X线影像的变化。 结果：7例患者给予甲基强的松龙治疗,3～5 d后临床症状消失,停用激素后5例患者临床症状并未恶化,但4～7 d后肺部阴影有所进展,未再加用激素,继续观察7～14 d肺部阴影逐渐吸收。2例患者因开始应用的激素量较小,停用激素后体温有所反复,肺部阴影有所进展,增加激素剂量后体温逐渐正常,肺部阴影逐渐吸收。结论：对于非重症SARS患者,如果停用激素后临床症状消失,尽管肺部影像有进展,此时仍可以继续观察病情变化,不需要再给予激素治疗,肺部阴影会逐渐吸收好转。     

Ki-67、P53、LAT1在食管癌及癌前病变组织中的表达及其临床意义

目的:观察Ki-67、P53、LAT1在食管鳞癌及癌前病变组织中的表达情况并探讨其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测食管正常黏膜组织20例、癌前病变组织68例(轻度非典型增生21例,中度非典型增生22例,重度非典型增生25例)以及癌组织34例中Ki-67、P53及LAT1的阳性表达情况,分析三者在食管癌组织中表达的相关性。结果:食管正常黏膜组织、轻度非典型增生、中度非典型增生、重度非典型增生以及癌组织中,Ki-67阳性表达率分别为0%(0/20)、23.8%(5/21)、40.9%(9/22)、76.0%(19/25)、82.4%(28/34),P53阳性表达率分别为0%(0/20)、14.3%(3/21)、31.8%(7/22)、48.0%(12/25)、67.6%(23/34),LAT1阳性表达率分别为0%(0/20)、19.0%(4/21)、36.4%(8/22)、52.0%(13/25)、76.5%(26/34)。等级相关分析结果显示,Ki-67、P53、LAT1的阳性表达均与组织学分级显著相关(r=0.626,0.427,0.586,P<0.01);Ki-67与P53、LAT1在食管癌组织中的表达呈正相关(r=0.428,0.596,P<0.01)。结论:Ki-67、P53、LAT1蛋白的异常表达与食管癌的癌变过程显著相关,三者联合检测具有重要的临床意义。     

HIF-1а与VEGF在动脉粥样硬化闭塞症患者缺血下肢血管及肌组织中的表达及意义

目的：研究缺氧诱导因子1（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）在动脉粥样硬化闭塞症(ASO)患者缺血下肢的表达及分布规律,为应用HIF-1α基因治疗缺血性疾病提供实验依据。方法：应用免疫组织化学SP法对15例ASO截肢患者肢体的血管、肌组织及3例正常人肌组织中的HIF-1α、VEGF蛋白进行检测;同时应用CD34标记血管,根据CD34阳性的血管内皮细胞数测定微血管密度（MVD）。结果：ASO患者缺血肢体主干血管及缺血肌组织内HIF-1α、VEGF表达灰度值较正常人均明显增加,MVD计数增加。增加最高的是胫后动脉（HIF-1α为932.5±545.2,VEGF为354.5±75.8,MVD为38.4±8.4）,股浅动脉、胫前动脉、小腿缺血肌肌间动脉、小腿缺血肌以及足坏死肌中HIF-1α和VEGF表达量均明显低于胫后动脉;在缺血血管壁内,HIF-1α、VEGF表达量及MVD计数均随着缺血程度的加重而增加;而在缺血肌组织内,HIF-1α、VEGF表达量及MVD计数增加均与缺血程度无关联;HIF-1α、VEGF在缺血肌组织内的表达量均明显低于缺血大血管。结论：HIF-1α、VEGF在ASO患者缺血肢体主干血管和缺血肌组织中均有较高水平表达,但在缺血肌组织内的表达均明显低于缺血大血管。     

羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记肿瘤细胞及其在细胞毒检测中的价值

目的探讨化学染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA-SE）标记肿瘤细胞的最佳条件及其在细胞毒检测中的价值。方法用不同浓度的CFDA-SE标记K562（人红白血病细胞）、YAC-1（小鼠淋巴瘤细胞）、A375（人乳腺癌细胞）、MCF-7（人黑色素瘤细胞）不同肿瘤细胞系，并检测其0—24h的荧光强度，观察荧光强度变化的时间动力学，选择CFDA-SE标记细胞的最佳浓度；CFDA-SE标记细胞后孵育时间为1—6h，再用DNA染料碘化丙啶（PI）标记，流式细胞仪分析CFDA-SE和PI双标记细胞，并计算细胞死亡率，研究CFDA-SE对细胞的毒性。CFDA-SE标记时间分别为5、6、7、8、10、15min，测定标记不同时间的荧光强度和细胞的死亡率，选择最佳标记时间；用CFSE在最佳条件下标记靶细胞进行细胞毒检测实验。结果对于不同肿瘤细胞系，CFDA-SE标记的最佳浓度不同；CFDA-SE对细胞没有毒性，死亡率低于5％；最佳标记时间为8min。人外周血单个核细胞和BALB／c鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞K562、YAC-1均表现出杀伤活性，杀伤百分率随效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为50：1—25：1，共孵育时间为2—4h。结论CFDA-SE具有标记细胞稳定，能用于细胞培养时间较长的研究，不影响细胞功能，适用于流式细胞仪检测细胞毒实验的优点，是一种很好的标记细胞的荧光素染料。     

急性期Guillain-Barr(e)综合征患者人类肿瘤坏死因子样分子1A表达与T细胞分泌γ-干扰素水平的关系

目的 探讨人类肿瘤坏死因子样分子1A(hTL1A)在急性期Guillain-Barre综合征(GBS)中表达及其与T细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)水平的关系.方法 ①重组人可溶性hTL1A(rhsTL1A)免疫6周龄雌性Bal b/c小鼠,用人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)以免疫荧光染色法鉴定rhsTL1A抗血清.②鉴定rhsTL1A的生物学活性:健康捐赠者外周血单个核细胞(PBMCs)接种于96孔板,设2 μg/ml植物血凝素(PHA)、2 μg/ml PHA+25 ng/ml rhsTL1A、2 μg/ml PHA+100 ng/mlrhsTL1A、2 μg/ml PHA+400 ng/ml rhsTL1A组,~3H-TdR掺入法检测T细胞增殖.③酶联免疫吸附(ELISA)法检测急性期GBS患儿血清中IFN-γ水平.④流式细胞术检测急性期GBS患儿外周血中CD_3~+ hTL1A~+ T/CD_3~+ T细胞的百分比.⑤分离急性期GBS患儿PBMCs,给予2 μg/ml PHA和400ng/ml rhsTL1 A,培养72 h后ELISA法检测IFN-γ水平.结果 ① rhsTL1A抗血清能够识别真核细胞HUVECs表达hTL1A.②T细胞增殖实验结果显示各组刺激指数(SI)均较对照组升高,400 ng/mlrhsTL1A组的SI最大(2.65).③急性期GBS患儿血清IFN9-γ水平[(102.25±22.17)pg/ml]较对照组[(28.75±1.31)pg/ml]显著升高(t=3.309,P<0.05).④急性期GBS患儿外周血中CD_3~+TL1A~+T/CD_3~+ T细胞比例(18.22%±1.83%)较健康对照组(5.17%±0.48%)显著增高(t=6.884,P<0.01).⑤健康对照组和急性期GBS组PBMCs经2 μmg/ml PHA和400 ng/ml rhsTL1A孵育后,IFN-γ分泌量[(43.56±4.41)pg/ml、(180.64±38.39)pg/ml]均显著增高(t=4.523、2.600,P<0.01、0.05),并且急性期GBS组的IFN-γ水平显著高于健康对照组(t=3.545,P<0.05).结论 ①400 ng/ml rhsTL1A能有效促进2μg/ml PHA活化的T细胞增殖,rhsTL1A具有生物学活性.②急性期GBS患儿外周血中活化T细胞表达hTL1A增加,可通过与其受体DR_3相互结合,促进IFN-γ的分泌.