TNFα、IL-6、IL-4、IL-2对IFNγ抗弓形虫感染作用的影响

目的 探讨ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－４、ＩＬ－２对ＩＦＮγ衣导的小鼠腹腔巨噬细胞（ｍｏｕｓｅ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍａｒｅｒｏｐｈａｇｅ,ＭＰＭ）抗弓形虫（ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ,ＴＧ）效应的机制。方法 应用＾Ｈ－Ｕ标记的ＴＧＨ在ＭＰＭ内的增殖实验及＾１２６Ｉ－ＵｄＲ标记的细胞毒实验。结果和结论（１）高浓度Ｔα只能诱导ＭＰＭ轻微的抗ＴＧ效应,而与亚刺激量ＩＮＦγ结合几科可以安全抑制Ｔ     

p21waf1基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的:构建人p21^waf1基因的原核表达载体并在大肠杆菌JM109中高效表达。方法:从人肝细胞中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到p21^waf1全基因。用原核细胞表达载体构建了pBV220/p21^waf1重组质粒,经DNA测序确认后,将其转化到大肠杆菌JM109进行表达、初步纯化。 结果:SDS-PAGE凝胶电泳分离显示在分子量21 000处有一诱导蛋白带,薄层扫描显示表达产物在诱导5 h时可达细菌总蛋白的38%,Western blotting证明表达产物与抗人P21^waf1单克隆抗体有特异性免疫反应。 结论:成功构建出p21^waf1表达载体,诱导产生蛋白经检测证实为P21^waf1蛋白。     

家兔后肢缺血模型制作

目的 建立家兔肢体缺血的模型.方法 40只家兔分为2组:A组结扎家兔的左后肢的髂动脉末端,并切除股总动脉和股浅动脉导致缺血;B组结扎股总动脉末端切除股浅动脉;定期评估家兔缺血程度,直至术后80天.结果 A组血管造影显示术后大腿的细微侧支血管计数率从0.7±0.29增加到2.0±0.02.B组血管造影显示术后大腿的细微侧支血管计数率从0.82±0.29增加到1.71±0.13.结论 方法A结扎家兔的左后肢的髂动脉末端,并切除股总动脉和股浅动脉导致缺血成功制备家兔持续后肢缺血模型.     

Annexin V/PI双标记检测高电压脉冲电场诱导K562细胞凋亡的研究

目的：探讨高电压脉冲电场诱导红白血病细胞K562和淋巴细胞凋亡的最佳参数。方法：调节电场强度和脉冲频率分别作用K562细胞和淋巴细胞后,用Annexin V/PIKit标记凋亡细胞,流式细胞术检测凋亡细胞的百分比;设计正交试验确定电场诱导K562细胞凋亡的最优参数组合;电场作用K562细胞与淋巴细胞（1∶1）混合悬液进行选择性诱导凋亡;MTT法检测电场作用后的K562细胞与淋巴细胞的增殖。结果：K562细胞的凋亡率随着脉冲频率的增加而升高,当脉冲频率为30Hz时,凋亡率高达79.13%;K562细胞和淋巴细胞的凋亡率均随着电场强度的增加而升高,在电场强度达到30kV/cm时,二者的凋亡率分别达82.40%、57.08%。诱导K562细胞凋亡的最优参数组合为脉冲宽度1μs、电场场强25kV/cm、脉冲个数为12个。K562细胞与淋巴细胞混合液在电场作用下发生凋亡的细胞百分比具有显著性差异（P〈0.05）;K562细胞与淋巴细胞经相同条件的电场作用后,二者生存率比较,差异显著（P〈0.05）。结论：利用高电压脉冲电场使癌细胞选择性失活是可行的。     

N K 细胞、 L A K 细胞抗弓形虫作用机理的研究

目的：观察 Ｉ Ｌ ２在小鼠抗弓形虫机理中的作用。方法：应用３ Ｈ 尿嘧啶（３ Ｈ Ｕ）特异性标记弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞（ Ｍ ｏｕｓｅ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍ ａｃｒｏｐｈａｇｅ, Ｍ Ｐ Ｍ ）内的增殖实验及１２５ Ⅰ 尿嘧啶核苷（１２５Ⅰ Ｕｄ Ｒ）标记的细胞毒实验,观察 Ｉ Ｌ ２的抗弓形虫作用。结果： Ｉ Ｌ ２对 Ｍ Ｐ Ｍ 的抗弓形虫作用及对 Ｉ Ｆ Ｎ γ诱导的 Ｍ Ｐ Ｍ 抗弓形虫作用无明显影响;正常小鼠 Ｎ Ｋ 细胞杀伤弓形虫感染靶细胞的能力,显著低于杀伤肿瘤细胞的能力（ Ｐ＜ ０００１）;而经 Ｉ Ｌ ２诱导的 Ｌ Ａ Ｋ 细胞杀伤自身感染弓形虫靶细 胞的能力, 明显高于 Ｎ Ｋ 细胞（ Ｐ＜ ０００１）, 并与 Ｌ Ａ Ｋ 杀伤肿瘤细胞的能力无明显差别（ Ｐ＞ ００５）。结论：提示 Ｉ Ｌ ２体内应用提高弓形虫小鼠的生存能力的机理可能与提高体内 Ｌ Ａ Ｋ 细胞杀伤自身感染弓形虫细胞的能力有关。     

老年上皮性卵巢癌组织中磷酸化AKT和P-gP表达与化疗反应及预后的关系

目的 探讨老年上皮性卵巢癌组织中磷酸化-AKT(p-AKT)和P-糖蛋白(P-gp)表达与卵巢癌化疗反应及预后的关系.方法 采用免疫组化SP法检测63例上皮性卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中p-AKT和P-gp表达,分析其与化疗反应的关系,同时对预后进行多因素的Cox生存分析.结果 p-AKT和P-gp在上皮性卵巢癌组织中阳性表达率分别为52.4%和31.7%,显著高于正常卵巢组织(P＜0.01),且p-AKT和P-gp表达存在相关性.p-AKT和P-gp表达阳性组的化疗反应率显著高于p-AKT和P-gp表达阴性组(P＜0.001).多因素生存分析显示,年龄≥60岁、手术病理分期、术后残留灶直径≥2 cm是影响患者预后的独立危险因素.结论 p-AKT和P-gp阳性表达与上皮性卵巢癌组织化疗耐药有关,p-AKT过表达对P-gp阳性表达可能具有促进作用,在卵巢癌化疗耐药中起重要作用,对合理制定化疗方案、预测化疗反应性及估计预后具有积极的指导意义.     

普瑞巴林在老年晚期胰腺癌患者中应用及安全性

目的探讨普瑞巴林在老年晚期胰腺癌患者中的应用及安全性。方法选取30例老年胰腺癌患者为观察组,接受普瑞巴林联合盐酸羟考酮(奥施康定)止痛治疗,同期临床特点相同的对照组26例,予单纯奥施康定止痛治疗,两组出现爆发痛,均应用盐酸吗啡片进行滴定,之后转为奥施康定治疗。比较两组疼痛数字分级法(NRS)评分,吗啡使用量,不良反应发生率及生活质量。结果与对照组相比,观察组在治疗后14 d的NRS评分、日均吗啡用量、不良反应均显著下降(P0.05)。在生活质量及药物起效时间方面,与对照组无统计学差异(P0.05)。结论普瑞巴林在老年晚期胰腺癌中应用安全,疼痛控制迅速有效,且可减少阿片类药物应用剂量。     

hβ2GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达

目的：构建hβ₂GPⅠ(hβ₂GPⅠ)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β₂GPⅠ-DI和PQE30-β₂GPⅠ-DI₂,并在大肠杆菌M15中进行高效表达。方法：应用PCR技术扩增hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体β₂GPⅠ-DI,并根据同尾酶特性构建hβ₂GPⅠ第一功能区基因二串联体β₂GPⅠ-DI₂,将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序,测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中,构建成重组表达载体PQE30-β₂GPⅠ-DI和PQE30-β₂GPⅠ-DI₂,在大肠杆菌M15中以l mmol·L^-1 IPTG诱导蛋白表达,经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性。结果：表达了hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白,相对分子质量约为9 000和17 000,其表达量均可达菌体总蛋白的25％,并具有hβ₂GPⅠ的抗原性。结论：成功构建了hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体,并诱导了蛋白的高效表达。     

微囊化CEA转基因细胞疫苗对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨微囊化癌胚抗原(CEA)转基因细胞疫苗免疫小鼠后,对小鼠免疫功能的影响。方法：采用³H-TdR掺入法,测定ConA诱导荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;采用³H-TdR后标记法,测定荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK细胞毒;以ELISA法测定小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFNγ细胞因子水平;利用流式细胞术检测CEA疫苗免疫对小鼠脾T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8百分率,CD4/CD8比值和NK细胞的影响;采用RT-PCR方法检测IL-2、IFNγ mRNA的表达水平。 结果：微囊化CEA疫苗免疫可以有效增强ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力,促进IL-2、IFNγ的产生以及增强NK细胞的细胞毒活性（P<0.05,P<0.01,P<0.05）;微囊化CEA疫苗能提高荷瘤小鼠CD4/CD8比值及NK细胞数（P<0.05,P<0.05）;促进脾细胞中细胞因子IL-2、INFγ mRNA的表达。 结论：微囊化CEA转基因细胞疫苗具有增强荷瘤小鼠免疫功能的作用,提示该疫苗可作为有效的抗CEA阳性肿瘤的治疗性疫苗。     

CA125联合中性粒细胞与淋巴细胞比值对卵巢癌诊断及预后判断的意义

目的:探讨CA125联合中性粒细胞和淋巴细胞比值对卵巢癌诊断及预后判断的临床意义。方法:检测152例卵巢癌患者外周血CA125及血细胞计数,对比CA125水平及中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)与健康体检者及卵巢良性疾病患者间的差异,评估二者及二者联合(联合标志物)在诊断卵巢癌方面的敏感性和特异性,并分析检测指标与卵巢癌患者临床特征的相关性。结果:卵巢癌患者的CA125水平及NLR值明显升高,与对照组及良性肿瘤组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);在敏感性上CA125最为显著,但在特异性上NLR及联合标记物要比CA125高;联合标志物与疾病的疗效及预后密切相关(r=0.683,P<0.01)。结论:CA125联合中性粒细胞和淋巴细胞比值测定是卵巢癌诊断的敏感指标,且具有更高的特异性,在对卵巢癌的诊断、病情评估及预后判断方面具有指导意义。