The characteristics of enzyme kinetics of CTX-M-14 type extended-spectrum β-lactamase with Pro167 residue substitution

Objective To analyze and evaluate the characteristics of enzyme kinetics of CTX-M-14 type extended-spectrum β-lactamase(ESBL) with Pro167 residue substitution. Methods By molecular cloning and PCR techniques, CTX-M-14 gene was directionally cloned into plasmid pET28a( + ) from a clinical E. coli isolate and formed an expression vector to transform competent E. coli BL21 (DE3 ). Prol67 residue substitutions of P167G, P167Q, P167S and P167T were introduced to CTX-M-14 by site-directed muta-genesis based on overlap extension PCR with the former recombinant plasmid as PCR template, respectively.The wild-type CTX-M-14, recombinant CTX-M-14 protein and its variants were expressed and purified, then their steady-state kinetic parameters (Kcat, Km and Kcat/Km ) against β-lactam antibiotics were determined.Results The kinetic parameters of wild-type and recombinant CTX-M-14 had no statistically significant differences (P>0.1). The 1/Km, Kcat and Kcat/Km values of P167S variant against ceftazidime were 16-fold, 2.87-fold and 43.6-fold higher than those of recombinant CTX-M-14, respectively, and the Kcat/Km value of P167S variant against penicillin, ampicillin, cefazolin, cefuroxime, ceftriaxone, cefotaxime decreased( < 0.05). Compared with the kinetic parameters of recombinant CTX-M-14, the kinetic parameters of P167T variant against ceftazidime had no significant change, but the Kcat values of P167Q and P167G variants decreased dramatically(P<0.01). Conclusion There was no difference between the enzyme activities of wild-type and recombinant CTX-M-14. P167S variant could not only promote the enzyme affinity of CTX-M-14 to ceftazidime but also improve the conversion rate of enzyme-substrate complex in the ceftazidime hydrolysis. The comparison of the kinetic parameters of CTX-M-14 and its variants with Pro167 residue substitution showed that the increased activity of CTX-M ESBL variants against ceftazidime could not be simply explained with the enlarged cavity in active site that may be caused by the replacement of Pro167 residue by smaller amino acids.     

肉苁蓉花序挥发物的GC-MS成分分析

目的:研究肉苁蓉花序挥发物的种类和相对含量,为其综合利用和种子繁育提供依据。方法:利用动态顶空套袋吸附法和气相色谱-质谱联用分析方法,研究近自然状态下肉苁蓉花期花序挥发物成分。结果:现蕾期到盛花期共从肉苁蓉花序中鉴定出40种挥发性化合物。现蕾期主要为烃类与绿叶挥发物,随着肉苁蓉花序上花朵开放,部分挥发物相对含量消失或减少,部分化合物相对含量增加,并出现一些新化合物。初花期和盛花期肉苁蓉花序主要挥发性成分为芳香性酯类与苯环类化合物,其相对含量较现蕾期显著增加。结论:肉苁蓉花序的挥发性成分种类多,且随开花进程出现种类和相对含量的变化,构成了肉苁蓉不同花期的香韵。     

一起疟疾暴发疫情后蚊虫防制的调查

目的：2008年象山县大徐镇发生疟疾暴发流行后,根据疟疾流行的原因,在疫区及周边地区实施以灭蚊为主的综合性防制措施,迅速扑灭疫情。方法：制定疟疾防制与监测方案,用6％灭得优乳油、10％奋斗呐悬浮剂和5%飞彪颗粒缓释剂等杀灭蚊虫,采用疫点村现场调查和诱蚊灯法、人工小时法对灭蚊效果评价。结果：灭蚊前,在大一村、甲田弄村、海口村和沙地村调查缸、罐、瓶等蚊幼孳生场所393处,阳性94处,平均阳性率23．98％,灭蚊后在以上4个村调查蚊幼孳生场所256处,阳性6处,平均阳性率下降为2．56％。快速灭蚊后灯诱法和人工小时法灭效分别为65．28％和74．12％,疫情得到了控制。结论：在政府的组织下,根据标本兼治,治本为主的原则,采取清除与管理孳生场所,快速灭蚊与防蚊等相结合的综合性防制措施,可迅速有效地遏阻疟疾的发生或流行。     

变应原吸入激发试验应用概况

支气管哮喘(简称哮喘)是最常见的慢性气道疾病之一.近年来其患病率在全球范围内有逐年增加的趋势.变应性哮喘为哮喘的常见类型,通常于暴露变应原后诱发.环境中的吸入性变应原如尘螨、花粉等为变应性哮喘最主要的致敏物质.通过吸入特定类型及剂量的变应原,对敏感患者进行变应原吸入激发试验,可诱发其产生可控性的哮喘反应,对探讨变应性哮喘的发病机制及新治疗靶点有重要作用.本文就其发展史、原理和操作方法等方面进行阐述.     

宁夏枸杞主要害虫发生规律与防治策略

目的:明确枸杞主产区主要害虫为害特点、发生规律及防治关键点,指导枸杞害虫绿色防控。方法:结合作者2009、2013、2015年7~9月对我国宁夏、青海、甘肃、新疆、内蒙古枸杞主产区枸杞生产现状调研结果,以及2012—2015年连续4年4~10月份对宁夏中宁县枸杞害虫种群发生动态及田间不同防控措施的效果调查,对枸杞害虫发生规律及集成防控策略进行了分析探讨。结果与结论:枸杞不同产区各害虫的发生为害各有特点,不同害虫占据不同生态位,从时间和空间上各害虫避免了直接竞争。秋季和早春是防治越冬代害虫的关键期,生长季节根据害虫防治关键点实施相应防治措施可有效提高防控效果,降低农药使用量。不同产区之间同种害虫具有共性特点,该研究为指导生产实践提供了理论依据。     

银屑病性关节炎36例临床分析

目的:分析银屑病性关节炎的临床特征和疗效.方法: 对我院住院的36例银屑病性关节炎患者进行回顾性分析.结果:本组病例平均发病年龄36.5岁,男:女为3:1.以皮损为首发症状者22例(61.1％),皮损和关节炎同时发生者8例(22.2％),关节炎首发者3例(8.3％);各关节受累的频率依次为远端指/趾间关节、膝关节、踝关节、腕肘关节、肩关节和脊柱关节、髋关节.关节炎分类:仅远端指/趾间关节受累型10例(筋.8％);多关节炎型16例(44.4％);不对称少关节炎型5例(13.9％);脊椎炎型4例(11.1％);残毁性关节炎型1例(2.8％).所有患者依据病情给予阿维A、来氟米特、环孢素、甲氨蝶呤、雷公藤多苷等综合治疗,皮损和关节症状均获得一定缓解.结论:本病男性发病明显多于女性,非对称多关节炎和远端指(趾)关节易受累是本病的特点.合理联合用药可取得较好疗效.     

腹部条件下高频超声探头诊断阑尾炎的价值探讨

在人类的发育早期,阑尾作为一种淋巴器官,有助于B淋巴细胞的成熟。B淋巴细胞是一种白细胞,并产生一种称为免疫球蛋白(IgA)的抗体。研究人员还发现,阑尾还参与产生一种分子,这种分子能直接帮助淋巴细胞移动至身体的其他部位。阑尾的功能还包括使白细胞对各种抗原或存在于胃肠道的异物产生影响,这样阑尾就有可能抑制破坏血液和淋巴产生的体液抗体反应,促进了局部的免疫功能。阑尾炎时机体的免疫系统会发生一系列的变化,出现各种各样的临床症状,临床要求尽快做出诊断和鉴别诊断,以采取相应的     

贲门癌术中下腔静脉破裂大出血救治体会（附1例报告）

贲门癌术中下腔静脉破裂大出血临床罕见。近日我们遇1例要病患者,经采用弗雷氏管水囊封闭裂口,救治成功,现将体会介绍如下。     

胸锁乳突肌肌瓣修复腮腺术后缺损畸形的应用

目的：探讨腮腺肿瘤术后同期应用胸锁乳突肌肌瓣填充修复对面部凹陷畸形的预防作用。方法：对40例腮腺肿瘤病人行肿瘤及腮腺浅叶或浅叶部分切除同期行胸锁乳突肌肌瓣填充修复,观察治疗效果。结果：患者术后创面愈合良好,手术腮腺区及颈部外形良好,颈部功能正常。结论：胸锁乳突肌肌瓣修复腮腺切除术后缺损能改善术后凹陷畸形发生。     

前颅底硬膜外、硬膜下联合入路治疗外伤后迁延性脑脊液鼻漏临床分析

目的探讨外伤后迁延性脑脊液鼻漏手术方法。方法对10例外伤后迁延性脑脊液鼻漏病人采用额下硬膜外、硬膜下联合入路修补治疗。用CT脑池造影或MRI进行术前漏口定位。结果本组10例随访6~25个月,无严重并发症,无手术死亡。结论联合入路治疗迁延性脑脊液鼻漏安全、可靠,并发症少。