神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠海马神经细胞自噬现象

目的 利用神经鞘磷脂合成酶2（SMS2）基因敲除小鼠探讨神经酰胺对海马神经细胞自噬现象的影响。方法 将SMS2杂合子（SMS2^+/- ）小鼠采用杂交、回交、互交的方法进行繁殖,用酚-氯仿提取法提取小鼠基因组DNA,PCR扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型作出鉴定,建立纯合子（SMS2^-/- ）小鼠模型;采用透射电子显微镜、免疫荧光染色及Western blotting技术观察生后第7天（P7）、P14和P30 SMS2^-/-小鼠海马CA1区神经细胞自噬的发生（每种方法每个时间点8只小鼠）。结果 1.SMS2^-/-小鼠海马CA1区神经细胞自噬现象：电子显微镜下,模型组海马神经元内出现较多自噬体或自噬溶酶体样结构。光镜下,模型组P7、P14和 P30 CA1区神经元自噬细胞数较对照组高(P ＜0.01）;2.自噬相关蛋白Beclin-1对于自噬的调节作用：Beclin-1在模型组与对照组间的表达规律与微管相关蛋白1轻链3（MAPLC3）基本一致,P7、P14、P30模型组Beclin-1阳性细胞数明显多于对照组(P ＜0.01）。Beclin-1与 MAPLC3两者在同一细胞中基本呈重叠表达; 3.Western blotting检测各组海马CA1区神经细胞MAPLC3蛋白的相对表达量与上述结果一致。结论SMS2-/-小鼠海马神经细胞内神经酰胺增高,神经酰胺不仅促进细胞凋亡,同时促进自噬,造成小鼠海马神经细胞自噬现象增强。     

多西紫杉醇与吉非替尼对SPC-Al生长及细胞周期作用的影响

目的:观察多西紫杉醇和吉非替尼联合应用对人肺腺癌细胞SPC-Al生长及细胞周期的影响,探索二者不同用药次序是否比单药更有效及其可能的细胞学机制.方法:反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测SPC-Al细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA的表达情况;Western blotting法检测SPC-Al细胞EGFR蛋白表达;四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]法检测细胞生长;流式细胞术检测细胞周期.结果:SPC-Al细胞中EGFR mRNA及蛋白均呈过表达;在10-14～10-6 mol/L浓度范围内,多西紫杉醇和吉非替尼均明显抑制SPC-Al细胞生长,二者在IC50浓度下作用呈时间依赖性.二者联合作用对细胞生长的影响与给药的次序有关:与单药组相比,先用多西紫杉醇,后用吉非替尼组对抑制细胞生长有明显增强作用(P<0.05);同时给药或先用吉非替尼,后用多西紫杉醇组对抑制细胞生长无显著增强作用(P>0.05).细胞周期研究显示:多西紫杉醇和吉非替尼分别将SPC-Al细胞阻滞于G2期(G2/M)和G1期(G0/G1,先用多西紫杉醇后用吉非替尼组G2期(G2/M)细胞显著增多,而G1期(G0/G1细胞显著减少(P<0.05).同时用药组或先用吉非替尼后用多西紫杉醇组(G1期(G0/G1)细胞显著增多(P<0.05),而G2期(G2/M)细胞显著减少(P<0.05).结论:多西紫杉醇和吉非替尼都能抑制SPC-Al细胞生长,二者联合作用对细胞生长的影响与给药次序有关,先用多西紫杉醇后用吉非替尼对抑制细胞生长有明显增强作用;同时给药或先用吉非替尼后用多西紫杉醇对抑制细胞生长无显著增强作用.     

高压氧联合温控射频热凝术治疗原发性三叉神经痛49例疗效观察

目的探讨高压氧联合温控射频热凝术治疗原发性三叉神经痛的临床疗效及其作用机制。方法选择2020年1月至2021年1月河南大学淮河医院神经内科住院治疗的原发性三叉神经痛患者98例作为研究对象。采用随机数字表法将患者分为对照组和联合组, 每组49例。对照组采用温控射频热凝术治疗, 联合组采用高压氧联合温控射频热凝术治疗。在术后7、14、90、180 d对患者进行住院或门诊随访。采用视觉疼痛模拟评分(VAS)对患者疼痛程度进行评定, 并计算临床优良率。采用简化马克吉尔疼痛问卷(SF-MPQ)评估患者不适程度。应用酶联免疫吸附法检测患者血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-10的表达水平。应用全自动电化学发光仪检测血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达水平。记录2组患者术后咀嚼肌无力、面部感觉减退等并发症的发生情况。结果与治疗前比较, 2组患者治疗后VAS、SF-MPQ评分均明显降低(P<0.01);联合组治疗后7 d和180 d VAS、SF-MPQ评分均明显低于对照组(P<0.05)。联合组治疗后14 d和180 d临床优良率明显高于对照组(P<0....     

ATP介导的嘌呤能信号在阿尔茨海默病相关结肠运动障碍中的作用

目的:探讨ATP介导的嘌呤能信号在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)相关结肠运动障碍中的作用及其相关的分子机制。方法:(1)临床试验:收集我院20例AD患者进行研究,放射免疫法测定血浆中胃动素(motilin,MTL)、胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)和一氧化氮(nitric oxide,NO)水平;高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)检测血浆三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平,同时对患者进行神经心理学检查并积分。(2)动物实验:利用AD小鼠进行Morris水迷宫实验,评估空间学习记忆功能;放射免疫法测定血浆中MTL、CCK、VIP和NO水平,HPLC法检测血浆ATP水平;免疫组织化学法检测乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)、VIP、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和ATP合酶的变化;Western blot和免疫组化法检测P2Y受体表达水平的变化。(3)离体实验:离体器官浴槽系统观察P2Y受体激动剂α,β-亚甲基ATP(α,β-methylene ATP,α,β-MeATP)对自发性及电刺激诱导的结肠平滑肌收缩的影响,细胞内微电极技术观察α,β-MeATP对结肠平滑肌细胞膜电位的影响。结果:与对照组比较,AD患者血浆的MTL和CCK水平明显降低(P0.01),NO和ATP水平显著升高(P0.05或P0.01),VIP无明显变化。患者简明精神状态检查积分(MMSE)降低(P0.05),AD评定量表-认知分量表(ADAS-Cog)积分、神经精神问卷(NPI)积分和AD协作研究日常能力量表(ADCS-ADL)积分均明显高于对照组(P0.01)。AD小鼠4~6 d逃逸潜伏期明显延长(P0.05),空间探索能力明显降低(P0.05),AD小鼠血浆中MTL和CCK水平明显降低(P0.01),NO和ATP水平显著升高(P0.05或P0.01),VIP无明显变化,AD小鼠结肠表达ATP合酶的水平明显上调(P0.05),但ChAT、VIP和NOS无明显改变,同时P2Y受体表达水平升高(P0.01)。体外实验表明,α,β-MeATP呈浓度依赖性抑制对照组和AD组小鼠结肠平滑肌自发性收缩(P0.05或P0.01),且这种抑制作用可被Na+通道阻断剂河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)逆转(P0.05或P0.01),α,β-MeATP在100μmol/L时对AD小鼠自发性收缩的抑制作用更明显(P0.05),AD小鼠与正常小鼠比较,TTX对100μmol/L的α,β-MeATP的拮抗作用差异也有统计学显著性(P0.05)。在10 Hz电刺激诱导的结肠平滑肌收缩中,α,β-MeATP抑制正常小鼠和AD组小鼠的收缩(P0.05或P0.01),且40μmol/L和100μmol/L时对AD小鼠的抑制作用比正常小鼠明显(P0.05或P0.01)。平滑肌细胞膜电位实验显示,α,β-MeATP不影响结肠平滑肌膜电位(P0.05)。结论:AD患者和AD小鼠血浆中促进胃肠运动的激素MTL和CCK水平降低,抑制胃肠运动的激素NO水平升高,胃肠总体运动功能被抑制;AD小鼠血浆ATP水平升高,同时ATP嘌呤能神经元增加,P2Y受体表达上调;在AD发病中,ATP介导的嘌呤能信号可能通过抑制结肠平滑肌收缩,从而导致结肠运动功能障碍。     

妊娠酒精暴露致仔鼠畸形眼球病理学研究

目的:探讨妊娠酒精暴露对仔鼠眼球和视皮质发育的影响。方法:妊娠母鼠经酒精灌胃法制作胎儿酒精综合征模型,检查新生仔鼠发育情况,并对1例双侧畸形眼球行HE和Nissl染色,观察眼球的组织学改变,同时用DiI散射标记视皮质锥体细胞,分析椎体细胞侧树突表面的树突棘改变。结果:畸形眼球变小,眼裂消失,角膜、晶状体和玻璃体完全缺失;视网膜片层状构筑紊乱,细胞增殖,增殖的细胞侵入眼球内腔,几乎占据整个眼球腔位置;视皮质锥体细胞树突棘变短,变稀疏。结论:妊娠酒精暴露可致眼球畸形,其原因可能是酒精毒性造成的基因突变引发的。由于发育缺陷的眼球对光反应减弱,造成视皮质锥体细胞树突棘的萎缩。     

胎儿酒精综合征及其中枢神经系统损害的研究进展

20世纪40年代,科学家调查后发现,由于孕期饮酒造成的婴幼儿生长发育缺陷占到后天所有原因中的第2位.     

神经管的衍变及其发育缺陷

神经管的产生是动物个体发育的一件大事,它与后来的中枢及周围神经系统的产生密切相关,脊椎动物脑和脊髓就是在此基础上形成的。头化（cephalization）后的神经管分别形成脑和脊髓,即中枢神经系统;在此基础上周围神经也相继发生。神经管不仅与正常的神经系统发育关系重大,特别是在其衍变过程中可以出现多种缺陷,     

单中心阿扎胞苷联合维奈克拉和联合HAG方案诱导治疗老年急性髓系白血病的疗效比较

急性髓系白血病(AML)是异质性的血液系统恶性肿瘤, 除疾病本身因素外, 年龄是影响预后的重要因素[1,2], 研究显示, 60岁以上AML患者4年总生存(OS)率显著低于60岁以下患者(16%对37%)[3]。本研究我们对本中心采用阿扎胞苷(AZA)+维奈克拉(VEN)方案与AZA+ HAG方案诱导治疗老年AML患者的疗效、安全性及治疗费用进行比较, 从而为我国老年初诊AML患者诱导治疗的选择提供经验。