人脑胶质瘤表皮生长因子受体表达及与增殖和侵袭相关性的研究

目的 探讨胶质瘤细胞EGFR基因表达以及和肿瘤细胞增殖及侵袭性生长的相互关系。方法 应用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR、Ki67、MMP2和MMP9表达。结果 EGFR、Ki67、MMP2和MMP9在胶质瘤中的表达不同,正常脑组织和WHOⅡ级与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤和体外细胞系之间的表达差异显著,且四者间的表达水平两两相关。结论 EGFR过表达可以引起Ki67、MMP2和MMP9的过表达,从而促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。     

先天性总胆管囊肿自发穿孔外引流术后致小肠内瘘1例

病历摘要患者,男性,16岁,主因先天性总胆管囊肿自发穿孔引流术后三个月入院诊治。缘於三个月前,患者发现右上腹有肿物,并有间断性腹痛,曾在我院诊为“先天性总胆管囊肿”,嘱其住院治疗,患者因故未住院。后因突然剧烈腹痛在当地诊为急性腹膜炎行剖腹探查术,术中发现右上腹有一囊性肿物约10×15厘米大小,下极穿孔,腹腔有大量黄绿色液体,并行囊肿引流,腹腔引流术,囊肿放入蕈状尿管,腹腔放入香烟引流两根,结束手术。最初引流管有黄绿色胆汁流出,一个月后自行夹管,夹     

腺病毒介导的靶向P85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的 构建靶向P85和蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)的短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果.方法 构建腺病毒载体rAd5-P+A,体外转染SGC-7901细胞后,以实时定量PCR和Western blot分别检测P85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达.以噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性.构建裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-P+A对SGC-7901细胞生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 成功构建的rAd5-P+A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Akt1的mRNA表达,而P85和Aktl蛋白表达量在转染48 h、72 h后分别下调57.5%、63.7%和67.8%、75.6%,与空白对照组和通用腺病毒对照(rAd5-HK)组相比,差异具有统计学意义(P=0.005,P=0.003).与空白对照组和rAd5-HK组相比,SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-P+A转染后第2天明显下降(P<0.001),且rAd5-P+A转染组进入S期的细胞数减少了5.9%～7.1%,而进入G0/G1期的细胞增加了12.1%～13.7%.裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示,rAd5-P+A可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的靶向P85和Akt1的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长,这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略.     

树状高聚物介导寡聚核苷酸转染人脑胶质瘤细胞的体外研究

目的评价聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-dendrimer,PAMAM-D)作为靶向表皮生长因子受体(EGFR)的荧光标记反义寡核苷酸(ASODN)转染人脑恶性胶质瘤体外细胞系U251的可行性及优化方案。方法应用电泳结合实验筛选PAMAM-D与反义EGFR寡核苷酸最佳结合N/P比值,通过荧光显微镜动态观察、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)评价PAMAM-D转染相同剂量ASODN至人脑恶性胶质瘤体外细胞系U251的效果,噻唑蓝(MTT)染色法间接反映各转染试剂的细胞毒性。结果(1)电泳结合实验显示电荷比(N/P)大于16:1时ODN才能与PAMAM完全结合。(2)动态荧光显微镜观察发现PAMAM-D-ASODN呈颗粒状分布在细胞质内,而oligo- fectamin—ASODN形态均匀。(3)RT-PCR结果显示PAMAM-D和oligofectamin介导的靶向EGFR的ASODN转染的U251细胞的EGFR表达明显下调;MTT法分析证明PAMAM的细胞毒性与oligo- fectamin的基本相当(P>0.05),PAMAM-D-ODN的毒性随电荷比的增大而增大。结论PAMAM- D可以作为寡聚核苷酸的投递载体成功转染人脑胶质瘤细胞。     

表皮生长因子受体反义RNA联合伽玛刀治疗对胶质瘤细胞生长抑制作用的研究

人表皮生长因子受体(vascularendothelial growth factor,EGFR)的扩增、过表达和突变在胶质瘤的发生、发展中起重要作用,是恶性胶质瘤的重要责任基因之一。针对EGFR传导通路的干预治疗及其与放疗联     

尿道综合征的病理表现和病因探讨(附20例报告)

女性尿道综合征是泌尿科常见疾病。患者有尿频、尿急、尿疼和尿道烧灼感反复发作,但尿常规正常,中段尿培养阴性,统称为尿道综合征。近年研究表明,本征并非一种单独疾病,而是不同原因所引起的多种疾病所共同的症状群。其病因复杂,至今尚未彻底阐明。我院自1982年以来对20例因尿道综合征作了尿道前庭移植术的患者进行了尿道口组织病理检查,现报告如下。试图从     

miR-200a通过β-catenin/TCF-4信号通路抑制胃癌细胞系生长侵袭能力的体外研究

  目的  研究miR-200a通过β-catenin/TCF-4信号通路对SGC7901胃癌细胞增殖活性及侵袭迁移能力的影响。  方法  化学合成miR-200a mimics, 采用脂质体Lipofectamine 2000转染胃腺癌细胞SGC7901, qRT-PCR检测转染效果, 细胞免疫荧光、Western blot检测转染后目的蛋白的表达, TOP/FOP荧光素酶检测β-catenin/TCF-4活性, Transwell、划痕实验检测细胞迁移侵袭能力、MTT法检测细胞的增殖活性, 流式细胞术检测细胞周期分布的改变。  结果  脂质体介导的miR-200amimics转染SGC7901后, β-catenin/TCF-4蛋白的表达均降低, β-catenin的表达出现了细胞核向胞浆的转移。TOP荧光素酶活性下降2.27倍, 而FOP荧光素酶活性基本不变。转染miR-200amimics组细胞的增殖活性、迁移、侵袭能力比空白组和阴性对照组明显下降, 细胞周期出现G₀/G₁期阻滞。  结论  提高miR-200a表达可以降低β-catenin/TCF-4信号通路的活性, 抑制SGC7901的生长侵袭迁移能力。      

人脑胶质瘤MMP2、MMP9和Ki-67的表达及其相关性的探讨

目的:探讨人脑胶质瘤基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和Ki-67的表达及其相关性.方法:应用MMP2、MMP9表达水平代表胶质瘤的侵袭活性,应用Ki-67标记指数代表胶质瘤的增殖活性;用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2例恶性胶质瘤体外细胞系的MMP2、MMP9和Ki-67表达,并分析其相关性.结果:在胶质瘤中MMP2、MMP9的阳性表达率和Ki-67 LI均随肿瘤恶性程度增加而增加并与胶质瘤分级呈正相关;相关分析发现,MMP2、MMP9和Ki-67LI的表达两两相关.结论:增殖和侵袭在恶性胶质瘤的分子生物学演进过程中相互协同、共同促进肿瘤细胞的恶性进展.     

RNA干扰联合抑制PI3KP85和AKT1表达对U251胶质瘤细胞侵袭的影响

目的 探讨应用RNA干涉(RNAi)技术抑制U251恶性胶质瘤细胞丝/苏氨酸蛋向激酶1(AKT1)和3-羧基磷脂酰肌醇激酶的85000催化亚基(P13KP85)表达后对U251胶质瘤细胞侵袭的抑制作用.方法 实验设正常对照组(未做任何处理);阴性对照组(rAd-HK组):用无义序列重组腺病毒感染U251胶质瘤细胞;基凶治疗组(rAd-A+P组):用靶向AKT1和P13KP85的重组腺病毒感染U251胶质瘤细胞.应用实时PCR检测AKT1和P13KP85 mRNA水平的变化;应用Western blot方法 检测AKT1和P13KP85蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;应用酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞外基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)浓度的变化;应用划痕和Transwell实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化.结果tAd-A+P 可显著抑制U251胶质瘤细胞AKT1和P13KP85的表达.与正常对照组和rAd-HK组比较.rAd-A+P组MMP2、MMP9表达下降,而基质金属蛋白酶抑制因子(TMP2)表达上调,差异有统计学意义(P<0.05).划痕和Transwell实验显示rAd-A+P组细胞体外侵袭能力明显减弱.结论 靶向AKT1和P13KP85的RNAi技术可以显著抑制U251胶质瘤细胞AKT1和PDKP85表达,对U251胶质瘤细胞的侵袭能力产生明显抑制作用.     

Ku蛋白的晶体结构功能与肿瘤放射治疗

Ku蛋白是一种DNA双链断裂修复结合蛋白,可以与多种DNA末端相结合。Ku蛋白由于其对DNA末端的识别保护作用和对整个非同源末端连接修复复合体的成核作用而成为NHEJ有效性的主要决定因素,决定着细胞的损伤修复能力。此外在包括端粒区的维持、抗凋亡、肿瘤抑制以及基因转录的调控等方面都发挥着重要作用。抑制肿瘤细胞中Ku蛋白的表达,可以有效减少其放疗后DNA双链断裂的修复,从而达到提高其放射敏感性的目的。