靶向性蛋白激酶B1和环氧合酶-2 shRNA腺病毒载体的构建和在人胃癌细胞的表达

Objective To construct a short hairpin RNA (shRNA) adenovirus vector targeting protein kinase BI (PKB1/Akt1) and cyclooxygenase-2 (COX-2) and observe their expression in human gastric carcinoma cell line SGC-7901. Methods Akt1 and COX-2 shRNA expression frames were sub-cloned to pGSadeno adenovirus vector by homologous recombination technology to construct pGSadeno-Aktl + COX-2 ( pGSadeno-A + C) vector. Furthermore after screening and amplification,recombinant ade-novirus vector was digested with Pacl and transfected into HEK293 cells. The replication adenovirus rAd5-A + C was packed and amplified in the HEK293 cells, and its titer was detected. After human SGC-7901 cells in vitro were transfected by rAd5-A + C,Akt1 and COX-2 mRNA and protein expression levels were detected by real-time PCR and Western blot respectively. Compared with rAdS-A + C,SGC-7901 and gen-eral rAd5-HK were selected as the negative controls. Results The recombinant adenovirus rAd5-A + C was constructed successfully and its titer reached 1.0 ×1010 pfu/ml. Aktl and COX-2 mRNA expression was downregulated significantly, and their ACt values ( 12.26±0.05 and 5.41±0.09 respectively ) were higher than rAd5-HK group (10.63±0.02 and 3.75 +0.08 respectively) and control group (10.57± 0.02 and 3.73±0.08 respectively) (P <0.01 ). There was no significant difference between rAd5-HK and control groups (P >0.05). Aktl and COX-2 protein expression was downregulated by 70.5% and 63.7% respectively ( P < 0.01 ) in rAd5-HK group as compared with control group ( P > 0.05 ). Conclu-sion The shRNA aclenovirus vector targeting Akt1 and COX-2 can specifically inhibit Akt1 and COX-2 expression,and this may be a new strategy in gastric carcinoma gene therapy targeting Akt1 and COX-2.     

"十四五"胶质瘤基础与转化研究目标与共识

国家"十四五"发展规划和2035年远景目标纲要提出,把保障人民健康放在优先发展的战略位置,全面推进健康中国建设.目前,我国神经系统肿瘤的发病人数和死亡人数均居世界首位,严重威胁我国人民身体健康.在此大背景下,中国医师协会脑胶质瘤专业委员会基础研究与转化学组整理总结目前胶质瘤研究进展,着眼于全新诊断治疗的策略突破、发病和...     

尿道下裂合并阴茎阴囊转位的外科治疗

作者１９７８年至１９９２年采用分期手术尿道下裂合并阴茎阴囊转位３４例。其中阴茎阴囊型尿道下裂２３例，会阴型尿道下裂１１例；不完全型阴茎阴囊转位２４例，完全型阴茎阴囊转位１０例。３４例中３２例阴茎阴囊转位复位满意。本后并发尿道瘘３例，尿道口狭窄２例。文中对阴茎阴囊转位的分型、手术适应证及其手术方法进行了讨论。     

Wnt2信号通路重要成员在胶质瘤中的表达及其意义

近来发现Wnt信号通路对个体发育和肿瘤生成具有重要作用[1-2].为进一步探讨Wnt通路在胶质瘤中是否存在表达异常及其在胶质瘤生成中的作用,我们采用RT-PcR、组织芯片免疫组织化学染色以及蛋白印迹法,对人脑胶质瘤Wnt2通路相关因子的表达变化及其意义进行了分析.     

骨髓基质干细胞培养、鉴定及标记的初步研究

目的：对骨髓基质干细胞的培养方法、鉴定及标记技术进行初步研究。方法：采用贴壁法培养大鼠骨髓细胞，经反复传代细胞逐渐纯化，以流式细胞术检测细胞表面抗原。以BrdU标记骨髓基质干细胞，将骨髓基质干细胞注入大鼠脑内，2周后取脑作石蜡切片，进行免疫荧光染色。结果：通过贴壁法培养大鼠骨髓细胞可获得较纯化的细胞，并能在体外长期培养，流式细胞术检测显示CD34、CD31、CD45阴性，CD90、CD44、CDT1阳性。BrdU可掺入DNA合成期的骨髓基质干细胞。结论：贴壁法可获得高纯度的骨髓基质干细胞，BrdU可作为骨髓基质干细胞体内示踪的理想标记物。     

反义表皮生长因子受体与p53基因联合治疗脑胶质瘤

基于前期研究我们发现不论是表皮生长因子受体(EGFR)扩增/过表达或p53基因突变率均随星形细胞瘤的恶性程度增高而增高[1],体外实验也表明联合应用反义EGFR RNA及p53基因转染胶质母细胞瘤细胞株对抑制细胞增殖和诱导凋亡的作用显著,较单独应用其中之一为强[2],为此,我们进行了体内实验.     

脑膜瘤伽玛刀治疗的影像学变化

目的：分析脑膜瘤伽玛刀治疗后的影像学变化规律。方法：回顾分析５８例单发脑膜瘤伽玛刀单次治疗后的影像学资料。治疗前肿瘤容积为０．８８～３５．９０ｍｌ，平均１０．５７ｍｌ；治疗中心剂量为２２．５～４０Ｇｙ，平均２９．０４Ｇｙ；边缘剂量为１０～２０Ｇｙ，平均１４．２７Ｇｙ。等剂量线为４０％～６０％，平均４９．４３％。等中心数目２～１６个，平均９．２４。结果：治疗后随访６～３４个月，平均１４．３１个月，其     

β-catenin/Tcf-4转录调控AKT2基因表达促进人脑胶质瘤细胞恶性转化的研究

目的 探究胶质瘤中β- catenin/Tcf -4转录调控AKT2基因以促进其恶性表型转化的机制.方法 CHIP - PCR及荧光素酶实验确立AKT2启动子区的Tcf -4结合位点及活性.阿司匹林( ASA)阻断β- catenin/Tcf -4转录复合物活性及恢复AKT2基因的表达后,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V检测凋亡及Transwell实验检测侵袭能力.结果 CHIP - PCR表明,AKT2基因启动子区存在两个Tcf -4结合位点- 349/- 343 bp(位点1)和- 3491/- 3497 bp(位点2).荧光素酶实验结果显示位点2的活性比位点1的强.抑制β - catenin/Tcf -4转录活性后,细胞周期阻滞于G0/G1期,侵袭能力下降;恢复AKT2的表达后,细胞S期比例增加,侵袭能力增强.结论 β- catenin/Tcf -4可以直接转录调控AKT2来促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭.     

不同AKT1与AKT2表达状态的胶质瘤的生存分析

目的 探讨AKT1与AKT2在脑胶质瘤中的表达及与患者生存期的相关性.方法 免疫荧光法检测手术切除的50例胶质瘤组织标本中AKT1及AKT2的表达水平,确定两者表达的相关性并与生存期进行相关性分析.结果 Log - rank单因素检验,年龄≥50岁、KPS评分＜ 80分和WHO Ⅲ～Ⅳ级患者的生存期显著缩短.胶质瘤组织中AKT1及AKT2在WHOⅢ～Ⅳ级的表达率显著高于WHO Ⅰ～Ⅱ级,两者表达存在正相关,且与患者的生存期呈负相关.结论 AKT1与AKT2的表达状态对预测患者的生存期具有一定的临床价值.     

抑癌基因PTEN与胶质瘤细胞侵袭和迁移的体外实验研究

目的:研究抑癌基因PTEN对脑胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法:用PTEN表达型质粒转染大鼠C6胶质瘤细胞,利用Matrigel体外侵袭实验和细胞迁移运动实验进行细胞侵袭和迁移的研究。结果:转染PTEN的大鼠C6胶质瘤细胞侵袭与迁移能力均明显下降。结论:PTEN在体外可以有效的抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移过程,其具体机制还有待进一步探讨。