miR-1224-5p在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨miR-1224-5p在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞增殖的影响。方法分析中国脑胶质瘤基因组计划(CGGA)数据库中miR-1224-5p在不同级别的胶质瘤组织中的表达数据,并采用原位杂交技术进行组织验证,运用CGGA数据分析miR-1224-5p的表达水平与胶质母细胞瘤患者临床预后的相关性。采用miR-1229-5p寡聚核苷酸转染胶质瘤U251及U87细胞,通过CCK8实验观察上调miR-1224-5p表达后对胶质瘤细胞增殖的影响。结果 miR-1224-5p在人脑胶质瘤组织中的表达随着病理分级的升高而降低。胶质母细胞瘤患者中低表达miR-1224-5p提示预后不良。上调miR-1224-5p表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖。结论 miR-1224-5p与胶质瘤的级别和临床预后相关,miR-1224-5p可以抑制胶质瘤细胞的增殖能力。     

骨桥蛋白剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响及其作用机制.方法 采用荧光定量聚合酶链反应或逆转录-聚合酶链反应分别检测正常脑组织、WHO Ⅱ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及人胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44和TJ905骨桥蛋白各剪接变体表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默野生型骨桥蛋白,慢病毒质粒表达载体分别导入三种突变型剪接变体OPN-a、OPN-b和OPN-c;细胞体外侵袭实验检测U251和U87细胞体外侵袭力.整合素αvβ3受体抗体和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002抑制骨桥蛋白的作用,阻断PI3K/Akt信号转导通路.Western blotting法检测侵袭相关蛋白尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,以及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT磷酸化水平和核因子-κB(NF-κB)p65转录进入细胞核水平,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性.结果 WHOⅢ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及U251和U87细胞骨桥蛋白各剪接变体呈高表达,而正常脑组织、WHOⅡ级胶质瘤组织及SHG44和TJ905细胞呈低表达.OPN-a和OPN-c可升高U251和U87细胞AKT磷酸化水平,诱导NF-κB p65转录进入细胞核,提高uPA、MMP-2和MMP-9表达水平,增强MMP-2和MMP-9活性,从而增强胶质瘤细胞侵袭力;OPN-b对胶质瘤细胞侵袭力无明显作用.结论 OPN-a和OPN-c通过激活PI3K/Akt/NF-κB信号转导通路而增强胶质瘤细胞侵袭力.     

BMPs在脑肿瘤干细胞中的研究进展

骨形成蛋白（bone morphogenetic proteins，BMPs）在神经干细胞的增殖和分化过程中起重要的调节作用：脑肿瘤干细胞是从脑肿瘤中分离得到的干细胞样的肿瘤起源细胞，与神经干细胞有很大的相似性，它们之间存在很多共同的信号传导通路。在神经干细胞增殖分化中起重要调节作用的BMPs信号通路对脑肿瘤干细胞的增殖和分化也起重要的调节作用。     

miRNA在恶性肿瘤诊断与治疗中的进展

微小RNA(microRNA或miRNA)是指长度约21～25nt的某些特殊的小型非编码RNA组成的家族,miRNA在转录后水平通过促进靶mRNA的降解和/或抑制翻译过程而发挥负调控基因表达的过程,并与个体发育、干细胞分化和疾病发生密切相关,在包括胶质瘤在内的所有恶性肿瘤的发病机制、早期诊断以及寻找新的治疗策略的研究中意义重大。     

超微载体介导反义端粒酶RNA抑制胶质瘤细胞生长的研究

目的　研究用体内可降解的聚乳酸 (PLA)和o 梭甲基壳聚糖 (CMC)制成的超微载体介导端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸在体外对TJ90 5人脑胶质瘤细胞的作用。方法　用PLA和CMC制成超微载体 ,并用其介导hTR反义寡核苷酸在体外转染TJ90 5细胞 ,通过噻唑兰比色法(MTT)、改良端粒重复序列扩增法 (TRAP)、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)对细胞转染情况作检测。结果　超微载体在体外能有效转染hTR反义寡核苷酸 ,48h后细胞存活率为 46.84% ,hTR、端粒酶催化亚基mRNA和端粒酶的活性水平分别为 0 .3 16、0 .0 2 4、5 1.40 0 ,明显受到抑制。结论　hTR可作为胶质瘤基因治疗靶点 ,超微载体能有效转染基因药物 ,可替代病毒载体。     

慢病毒介导的RNAi敲低hTERT表达对人胶质瘤细胞系U87抑瘤作用的研究

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)敲低人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达水平对人胶质瘤细胞系U87的影响.方法 以慢病毒为载体的靶向hTERT小干扰RNA(siRNA)构建体Lt-I直接感染U87细胞,分别以无义序列Lt-non及体外常规培养的U87细胞作为载体对照和空白对照.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和端粒重复序列扩增(TRAP)法检测肿瘤细胞内源性hTERT表达水平和端粒酶活性,四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测细胞增殖活性和增殖周期,荧光原位杂交法检测端粒长度,Transwell法检测细胞体外侵袭力;同时观察注射慢病毒后裸小鼠皮下移植瘤生长情况.结果 体内外实验结果显示,Lt-I可明显降低肿瘤细胞内源性hTERT表达水平(均P=0.000)和端粒酶活性(均P=0.000);对细胞增殖活性和增殖周期无明显抑制作用(均P>0.05);感染后肿瘤细胞端粒长度无明显变化(均P>0.05);但对肿瘤细胞体外侵袭力(均P=0.000)和裸小鼠皮下移植瘤的生长具有较强抑制作用(均P<0.05).结论 RNAi技术通过抑制肿瘤细胞内源性hTERT表达水平、端粒酶活性和侵袭力而逆转人胶质瘤细胞系U87恶性表型,hTERT可望成为胶质瘤基因治疗的靶点.     

Notch-1在人胶质瘤细胞系U251细胞中的邻分泌机制探讨

目的 探讨Notch-1在人胶质瘤细胞系U251细胞中的邻分泌机制.方法 用免疫荧光组织化学方法检测单个孤一和聚集相邻的两个U251细胞的Notch-1及配体delta-like-1的表达水平.封闭U251细胞的Notch-1受体,采用SYBR荧光实时定量PCR法检测Notch-1配体delta-like-1mRNA在不同封闭时间组的表达水平.结果 聚集相邻的U251细胞Notch-1及delta-like-1的平均荧光强度高于单个孤一的细胞.封闭后delta-like-1 mRNA的表达水平明显呈时间依赖性降低.结论 在U251胶质瘤细胞中,Notch-1可能通过邻分泌机制促进相邻细胞Notch-1的表达,并影响其配体delta-like-1的表达.     

E2F1蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响

目的探讨E2F1蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响。方法用实时荧光定量PCR法检测E2F1mRNA在各级别胶质瘤组织中的表达水平。应用RNA干扰技术降低E2F1表达后,采用Western印迹法验证E2F1蛋白的变化。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法和糖检测分析试剂盒检测干扰E2F1表达后胶质瘤细胞的增殖和糖代谢的变化。结果胶质瘤组织中E2F1的表达高于正常脑组织,其表达随着级别的增高而升高;抑制E2F1的表达后,U87细胞生长受抑制,细胞的葡萄糖消耗量明显降低。结论 E2F1在胶质瘤中的表达随着肿瘤恶性程度的增高而升高;抑制E2F1表达可以明显抑制胶质瘤细胞增殖及代谢能力。     

神经上皮肿瘤端粒酶活性及其相关基因的表达

目的研究神经上皮肿瘤的端粒酶活性及其相关基因TRF1、TRF2、TP1、hTERT的表达。方法改良TRAP法检测65例神经上皮肿瘤的端粒酶活性,免疫组化法检测TRF1、TRF2、TP1、hTERT的表达。结果神经上皮肿瘤端粒酶阳性率为61．54％,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ级肿瘤的端粒酶活性分别为39．0TPG、74．0TPG、171．1TPG和255．2TPG。TP1、hTERT和肿瘤恶性度呈正相关;TRF1、TRF2和肿瘤恶性度呈负相关。结论端粒酶活性及hTERT和神经上皮肿瘤恶性度密切相关;hTERT是端粒酶活性水平调节的关键。