荧光定量PCR检测脑胶质瘤中miR-125b

背景与目的:从分子水平研究胶质瘤,为临床提供可能的诊断和治疗靶基因已十分必要。本实验拟建立检测荧光定量PCR的方法,了解脑胶质瘤中miR-125b的表达水平及其与肿瘤恶性程度的关系。方法:从18例不同恶性程度胶质瘤组织和6例正常脑组织标本提取总的microRNA,然后通过反转录的方法得到c-DNA,再用带荧光探针的miR-125b引物进行荧光定量PCR检测,测出其CT值,通过2-△△CT的相对定量的方法对荧光定量PCR检测的CT值进行标准化,从而比较miR-125b在正常脑组织和胶质瘤中的表达情况。结果:正常脑组织相对表达量为1.0732±0.1225,胶质瘤II、III、IV分别为0.7914±0.06 752、0.53 92±0.08180、0.2497±0.05065,并且之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:通过荧光定量PCR技术测定miR-125b在脑胶质瘤中表达下调,且与脑胶质瘤恶性程度成负相关,为研究miR-125b表达水平下调的机制、表达水平和肿瘤预后的关系,为利用miR-125b对胶质瘤的诊断和个性化治疗打下基础。     

胶质母细胞瘤手术切除程度与患者生存预后的相关性分析

目的探讨胶质母细胞瘤手术切除程度对患者生存预后的影响。方法回顾性分析南京医科大学第一附属医院自2012年07月至2017年07月收治的有长期跟踪随访及术前术后磁共振影像数据完整的48例胶质母细胞瘤患者,对比分析术前术后T1增强像及Flair像,计算并分析肿瘤切除程度与患者生存预后的相关性。结果 T1增强像全切的患者(切除程度100%)中位生存期(16. 2月)显著长于未全切患者(100%)的中位生存期(8. 6月)(P 0. 01)。进一步在T1增强像全切的患者中,基于Flair像切除率≥35%患者的中位生存期(19. 7月)显著长于切除率35%的切患者(12. 4月)(P 0. 05)。结论胶质母细胞瘤T1增强像全切基础上Flair像切除率≥35%能够明显延长患者的生存期,对胶质母细胞瘤手术策略制定有着重要的指导意义。     

IN VIVO GROWTH OF CEREBRAL C6 GLIOMA CELLS TRANSFECTED AND TREATED WITH CX43 GENE

Objective: To study the role of connexin gene (Cx43) on the development of glioma and the feasibility of using Cx43cDNA as a target of gene therapy of gliomas.Methods: Parental rat C6 cells and C6 cells transfected with Cx43cDNA were implanted into right caudate nucleus of SD rats as control and transfected group.Rats bearing cerebral C6 gliomas were treated with Cx43cDNA and empty vector as treated group and empty vector group. The general manifestation, survival time, MRI dynamic scanning and histopathological changes of all rats were observed. In situ hybridization and immunohisto- chemistry were used for examination of Cx43mRNA and its protein in gliomas. Average number of AgNOR staining was used for detection of cell proliferation activity, and TUNEL method for determination of cell apoptosis. Results: All rats in control and empty vector group died of cerebral gliomas within 3 weeks after implantation of C6 cells. Six out of nine rats in the transfected group and eight out of ten rats in treated group kept alive beyond 120 days with totally disappearing of the tumor foci, except one treated rat having a little residue of tumor. In gliomas of transfected and treated groups Cx43 gene expression was upregulated, proliferation activity was lowered,However, the apoptotic cells did not increase.Conclusion: The present study indicates that Cx43 gene is of crucial importance in the development of malignant glioma. It can be an effective target for gene therapy of gliomas.     

PIWI和肿瘤

PIWI家族成员包含保守的PAZ和PIWI区域,在干细胞自我更新、精子发生、RNA干扰和翻译调控中扮演重要角色。最近研究发现,一些PIWI在肿瘤中呈特异性表达,并与肿瘤的发生、发展相关。PIWI将有可能成为肿瘤诊断和预后判断的一个新的重要指标。研究PIWI表达调控机制,可探讨PIWI在肿瘤基因治疗方面的可行性。     

微RNAlet-7d抑制胶质瘤生长和侵袭

背景与目的：let-7d与胶质瘤的关系尚不清楚,本研究探讨let-7d在人脑胶质瘤组织中表达及其对人脑胶质瘤U87细胞生物学特征的影响。方法：原位杂交法检测let-7d在人脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达,利用脂质体将let-7d寡核苷酸转入U87细胞,观察各组细胞生长、凋亡、侵袭情况。结果：人脑胶质瘤组织中let-7d较正常人脑组织低表达,转入let-7d寡核苷酸的U87细胞,生长减缓,凋亡增加,侵袭力减低。结论：微RNAlet-7d在胶质瘤的发生发展中可能起抑制作用。     

面肌痉挛与有关血管关系的显微外科解剖

目的：了解面听神经和有关血管的解剖关系;正确理解面肌痉挛的原因;为手术治疗提供解剖学参数。方法：手术显微镜下对１５例成人尸体头部标本进行面听神经和有关血管的观察,并测量有关数据。结果：面听神经和小脑前下动脉关系密切,８９．７％的小脑前下动脉在面听神经的不同部位穿过;１３．３％的面听神经起始部被血管压迫。结论：血管压迫可能是面肌痉挛的主要原因;显微血管减压术是面肌痉挛的首选治疗方法。     

超微载体介导反义端粒酶RNA抑制胶质瘤细胞生长的研究

目的　研究用体内可降解的聚乳酸 (PLA)和o 梭甲基壳聚糖 (CMC)制成的超微载体介导端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸在体外对TJ90 5人脑胶质瘤细胞的作用。方法　用PLA和CMC制成超微载体 ,并用其介导hTR反义寡核苷酸在体外转染TJ90 5细胞 ,通过噻唑兰比色法(MTT)、改良端粒重复序列扩增法 (TRAP)、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)对细胞转染情况作检测。结果　超微载体在体外能有效转染hTR反义寡核苷酸 ,48h后细胞存活率为 46.84% ,hTR、端粒酶催化亚基mRNA和端粒酶的活性水平分别为 0 .3 16、0 .0 2 4、5 1.40 0 ,明显受到抑制。结论　hTR可作为胶质瘤基因治疗靶点 ,超微载体能有效转染基因药物 ,可替代病毒载体。     

纳米载体在胶质瘤基因治疗中的应用

胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,由于它具有无限制增生,缺乏凋亡等特性,使得手术及放化疗等方法难以取得令人满意的疗效,近年来,在基因水平积极研究胶质瘤的治疗方法是当前神经外科领域前沿课题.随着纳米技术的发展和分子生物学水平的提高,利用具有特别跨膜传递功能、在人体内可生物降解的、可控制释放的复合功能性的纳米载体对脑肿瘤进行基因治疗已成为国内外研究的热点.     

miR-1224-5p在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响

目的探讨miR-1224-5p在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞增殖的影响。方法分析中国脑胶质瘤基因组计划(CGGA)数据库中miR-1224-5p在不同级别的胶质瘤组织中的表达数据,并采用原位杂交技术进行组织验证,运用CGGA数据分析miR-1224-5p的表达水平与胶质母细胞瘤患者临床预后的相关性。采用miR-1229-5p寡聚核苷酸转染胶质瘤U251及U87细胞,通过CCK8实验观察上调miR-1224-5p表达后对胶质瘤细胞增殖的影响。结果 miR-1224-5p在人脑胶质瘤组织中的表达随着病理分级的升高而降低。胶质母细胞瘤患者中低表达miR-1224-5p提示预后不良。上调miR-1224-5p表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖。结论 miR-1224-5p与胶质瘤的级别和临床预后相关,miR-1224-5p可以抑制胶质瘤细胞的增殖能力。     

骨桥蛋白剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)剪接变体对胶质瘤细胞侵袭性的影响及其作用机制.方法 采用荧光定量聚合酶链反应或逆转录-聚合酶链反应分别检测正常脑组织、WHO Ⅱ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及人胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44和TJ905骨桥蛋白各剪接变体表达水平;小干扰RNA(siRNA)技术沉默野生型骨桥蛋白,慢病毒质粒表达载体分别导入三种突变型剪接变体OPN-a、OPN-b和OPN-c;细胞体外侵袭实验检测U251和U87细胞体外侵袭力.整合素αvβ3受体抗体和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002抑制骨桥蛋白的作用,阻断PI3K/Akt信号转导通路.Western blotting法检测侵袭相关蛋白尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,以及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT磷酸化水平和核因子-κB(NF-κB)p65转录进入细胞核水平,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性.结果 WHOⅢ～Ⅳ级胶质瘤组织,以及U251和U87细胞骨桥蛋白各剪接变体呈高表达,而正常脑组织、WHOⅡ级胶质瘤组织及SHG44和TJ905细胞呈低表达.OPN-a和OPN-c可升高U251和U87细胞AKT磷酸化水平,诱导NF-κB p65转录进入细胞核,提高uPA、MMP-2和MMP-9表达水平,增强MMP-2和MMP-9活性,从而增强胶质瘤细胞侵袭力;OPN-b对胶质瘤细胞侵袭力无明显作用.结论 OPN-a和OPN-c通过激活PI3K/Akt/NF-κB信号转导通路而增强胶质瘤细胞侵袭力.