人pre—mir181a腺病毒载体的构建与鉴定

目的探讨构建携带人pre—mir181a基因的重组腺病毒载体,为基因治疗研究提供一种新的方法,并观察其在神经胶质瘤细胞U251细胞中的表达。方法以从Genesil公司购买的含有mir181a的质粒为模板扩增pre—mir181a基因,将回收的PCR产物片段克隆入pGenesil载体,获得重组质粒pGenesil—pre—mir181a。从pGenesil—pre—mir181a上通过LR体外同源重组将mir181a microRNA表达框转移至pGSadeno腺病毒表达载体上。在体外用不同感染复数（M·O·I）值rAd5-mir181ab分别转染神经胶质瘤细胞U251细胞。采用流式细胞仪、RT—PCR方法检测目的基因的转染效率和表达。结果PCR、酶切鉴定以及序列测定与比对分析表明,重组腺病毒rAd5-mir181a构建正确。神经胶质瘤细胞U251细胞转染rAd5-mir181a的最高效率可达99％,转染后的神经胶质瘤细胞U251细胞表达相应的mir181a。结论本实验成功构建了含mir181a基因的重组腺病毒rAd5-mir181a载体,在体外能高效转染神经胶质瘤细胞U251细胞。     

循环肿瘤细胞在胶质母细胞瘤诊断和预后中的临床意义

目的：分析胶质瘤患者血液循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)计数与临床指标的关系,探索CTC计数在协助胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)诊断与预后评估中的临床应用价值。方法：收集2018年10月—2022年9月就诊于南京医科大学第一附属医院神经外科的胶质瘤患者共47例,分别于术前、术后应用CTCBIOPSY^® CTC分离装置对外周血中CTC进行分离和计数,比较CTC计数与血液学、影像学、预后等指标的关系。结果：术前在87.2%(41/47)的胶质瘤患者中可检测到CTC, GBM患者的术前CTC计数显著高于非GBM患者(P=0.020),术前CTC与中性粒细胞-淋巴细胞比值联用有助于GBM的术前诊断。与术前CTC相比,GBM患者术后CTC总体呈现下降趋势,差异具有统计学意义(P=0.004)。以术前每5 mL外周静脉血 CTC≥11个为阈值可将GBM患者分为高CTC组与低CTC组,两组间白细胞计数(P=0.017)、中性粒细胞计数(P=0.031)以及淋巴细胞计数(P=0.018)差异有统计学意义,而影像学指标未见差异。术前高 CTC 组的总生存期较低 CTC 组明显缩短(P= 0.017)。结论：术前CTC计数可较好地区分GBM患者与非GBM患者。高CTC组GBM患者预后最差,揭示CTC计数有望成为协助GBM诊断和预后评估的重要指标。     

wt-p53基因联合HSV-TK/GCV对C6鼠胶质瘤杀伤作用的实验研究

目的研究wtp53基因联合自杀基因治疗恶性胶质瘤的可行性。方法体外试验以腺病毒为载体转导wtp53和HSVTK入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的GCV,以MTT法检测细胞生存率。体内实验以C6鼠胶质瘤细胞和SD大鼠建立动物模型,原位注射腺病毒为载体的wtp53和HSVTK基因,腹腔给以GCV(15mg.kg-1day-1×14)。观察荷瘤鼠生存期;强化MRI动态监测荷瘤鼠肿瘤大小;TUNEL法检测凋亡。结果wtp53基因明显提高鼠胶质瘤细胞对HSVTK/GCV的敏感性,p53联合HSVTK基因转染C6的GCVID100=0.01μg.ml-1,而单独HSVTK转染C6的GCVID100=1μg.ml-1,约提高100倍;p53基因还可使C6细胞凋亡增加。体内p53基因联合HSVTK/GCV治疗使荷瘤鼠生存期明显延长,凋亡明显增加(P<0.001);强化MRI示4周肿瘤消失。结论p53基因和HSVTK基因的联合基因治疗可作为临床上优化自杀基因治疗方案的一种可能选择。     

p53基因优化恶性胶质瘤HSV—TK／GCV治疗的体外研究

目的：研究p53基因优化恶性胶质瘤自杀基因治疗效果的可行性。方法：以腺病毒载体转导p53和HSV－TK入C6鼠胶质瘤细胞，给以不同浓度的GCV，MTT法监测细胞生存率，TUNEL法检测凋亡。结果：p53基因明显提高胶质瘤细胞对HSV－TK／GCV的敏感性，增加细胞凋亡。结论：p53和HSV－TK的联合基因治疗有望成为一种较佳的优化自杀基因治疗方案。     

面肌痉挛与有关血管关系的显微外科解剖

目的：了解面听神经和有关血管的解剖关系;正确理解面肌痉挛的原因;为手术治疗提供解剖学参数。方法：手术显微镜下对１５例成人尸体头部标本进行面听神经和有关血管的观察,并测量有关数据。结果：面听神经和小脑前下动脉关系密切,８９．７％的小脑前下动脉在面听神经的不同部位穿过;１３．３％的面听神经起始部被血管压迫。结论：血管压迫可能是面肌痉挛的主要原因;显微血管减压术是面肌痉挛的首选治疗方法。     

PIWI和肿瘤

PIWI家族成员包含保守的PAZ和PIWI区域,在干细胞自我更新、精子发生、RNA干扰和翻译调控中扮演重要角色。最近研究发现,一些PIWI在肿瘤中呈特异性表达,并与肿瘤的发生、发展相关。PIWI将有可能成为肿瘤诊断和预后判断的一个新的重要指标。研究PIWI表达调控机制,可探讨PIWI在肿瘤基因治疗方面的可行性。     

转染连接蛋白基因对胶质瘤细胞细胞间隙连接通讯及其生长变化的研究

目的　研究连接蛋白 (Cx)基因对C6胶质瘤细胞的增殖抑制及细胞间隙连接通讯(GJIC)的作用 ,探讨以Cx43基因治疗胶质瘤的可行性。方法　将含Cx43cDNA的质粒以Lipofec tamine介导转染Cx43表达缺失的C6胶质瘤细胞 ,通过Northern印迹杂交、原位杂交及免疫组织化学染色检测Cx43mRNA及蛋白表达 ,划痕标记荧光染料示踪技术 (SLDT)检测GJIC ,MTT法测定细胞增殖率 ,核仁组成区嗜银蛋白 (AgNOR)染色检测细胞增殖活性 ,TUNEL法检测细胞凋亡。结果　转染后C6细胞有不同程度的Cx43mRNA及蛋白表达和GJIC恢复。表达Cx43的克隆细胞增殖明显下降 ,培养 2～ 6d时 ,每天除C6组与空载组差异无显著性外 ,其余各组差异均有非常显著性 (P <0 .0 1) ,但细胞凋亡并未增加。结论　Cx43基因及GJIC在恶性胶质瘤的发生发展过程中起重要作用 ,可能成为恶性胶质瘤基因治疗的优选靶的之一。     

前循环动脉瘤显微外科手术治疗

目的 探讨前循环动脉瘤患者的手术时机,总结临床经验.方法 回顾分析210例前循环动脉瘤患者显微外科手术资料,其中183例伴蛛网膜下隙出血患者Hunt-Hess分级为I ～Ⅱ级82例、Ⅲ级77例、Ⅳ级21例和V级3例.结果 共199例行动脉瘤瘤颈夹闭术,11例行动脉瘤切除包裹术.Glasgow预后分级恢复良好者97例(46.19%)、轻残80例(38.09%)、重残24例(11.43%)、死亡9例(4.29%).结论 前循环动脉瘤的显微外科手术需根据患者具体情况选择手术时机,对不同类型前循环动脉瘤术中的判断及处理措施,是手术获得成功的重要因素.     

超微载体介导反义端粒酶RNA抑制胶质瘤细胞生长的研究

目的　研究用体内可降解的聚乳酸 (PLA)和o 梭甲基壳聚糖 (CMC)制成的超微载体介导端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸在体外对TJ90 5人脑胶质瘤细胞的作用。方法　用PLA和CMC制成超微载体 ,并用其介导hTR反义寡核苷酸在体外转染TJ90 5细胞 ,通过噻唑兰比色法(MTT)、改良端粒重复序列扩增法 (TRAP)、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)对细胞转染情况作检测。结果　超微载体在体外能有效转染hTR反义寡核苷酸 ,48h后细胞存活率为 46.84% ,hTR、端粒酶催化亚基mRNA和端粒酶的活性水平分别为 0 .3 16、0 .0 2 4、5 1.40 0 ,明显受到抑制。结论　hTR可作为胶质瘤基因治疗靶点 ,超微载体能有效转染基因药物 ,可替代病毒载体。