FasL基因治疗移植于裸鼠的人脑胶质母细胞瘤的实验研究

目的 :探讨FasL基因在体内诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法 :在裸鼠皮下种植Fas表达阳性的人脑胶质母细胞瘤细胞系TJ90 5 ,成瘤后 ,利用脂质体介导FasL基因瘤内治疗 ,在 3 9d观察期间 ,用千分尺测量肿瘤生长 ,最终取出肿瘤 ,用原位杂交 ,免疫组化鉴定FasL基因和蛋白的表达 ,应用TUNEL法检测细胞凋亡 ,Ki 67免疫组化检测细胞增殖。结果 :FasL基因瘤内注射观察 3 9d后 ,治疗组瘤体积明显小于对照组 (P <0 0 1) ,肿瘤组织细胞内FasL基因表达增加 ,凋亡细胞数增多 ,细胞增殖率降低。结论 :FasL基因对Fas表达阳性胶质瘤有治疗作用。     

反义miR-21抑制异种移植U87人脑胶质瘤生长的体内研究

目的 探讨敲低miR-21表达抑制裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤生长的疗效和机制.方法 原位注射miR-21反义寡聚核苷酸(AS-miR-21)治疗裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤.定时测量肿瘤大小评估原位注射AS-miR-21的治疗效果.使用RT-PCR和原位杂交方法 鉴定治疗后miR-21表达水平,采用HE染色和免疫组织化学染色(增殖细胞核抗原、细胞周期抑制因子-21、基质金属蛋白酶-9和隔蛋白-7)评价治疗后肿瘤生物学性状的变化,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡. 结果 肿瘤生长曲线显示AS-miR-21治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列治疗组,差异有统计学意义(F=6.056,P=0.007);RT-PCR检测显示AS-miR-21治疗组miR-21表达下调为对照组的(0.031±0.008)%;原位杂交显示AS-miR-21治疗组miR-21表达水平较对照组与无义序列治疗组下调:组织病理学检测表明AS-miR-21治疗后肿瘤恶性度降低;TUNEL法检测可见AS-miR-21治疗组细胞凋亡数明显高于对照组与无义序列治疗组,差异有统计学意义(F=141.021,P=0.000). 结论 以miR-21作为靶点治疗异种移植U87人脑胶质瘤效果令人满意,miR-21可作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点.     

核因子p65蛋白对胶质瘤细胞增殖和糖代谢的影响

目的 探讨小分子RN A干扰(siRN A )沉默p65基因的表达对胶质瘤细胞生长和糖代谢的影响.方法 应用RNA干扰技术降低p65表达后 ,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖和周期 ,Western blot检测p65下游功能蛋白的变化.结果 抑制p65的表达后 ,U87和U251细胞生长受抑制 ,细胞生长阻滞在G1 期且细胞糖代谢水平下降 ,下游的功能蛋白周期素D1和丙酮酸激酶M 2 (PK M 2 )表达水平降低.结论 干扰 p65的表达可以抑制胶质瘤细胞的生长和糖代谢水平.     

人脑胶质瘤中miR-221和p27的表达及临床意义

目的 探讨miR-221在胶质瘤中的表达及其与p27 的关系.方法 收集不同病理级别胶质瘤标本,以荧光定量PCR法和免疫印迹法检测其中miR-221及p27的表达,分析其与胶质瘤病理级别的关系.结果 miR-221的表达强度与肿瘤恶性程度呈正相关,与p27的表达呈负相关.结论 miR-221的过农达和p27的表达下降或缺失与胶质瘤,尤其是恶性胶质瘤的发生、发展密切相关.     

骨桥蛋白与胶质瘤关系的研究进展

骨桥蛋白(OPN)是一种分泌型、黏附性的磷酸化糖蛋白,广泛分布于体内多种组织和细胞内。OPN在多种恶性肿瘤组织的表达明显上调。脑胶质瘤是一种低分化瘤,恶性度高,外科手术和其他辅助治疗都无法达到生物学切除或杀灭,残余的肿瘤细胞极易复发。近年来,随着分子生物学的发展及对胶质瘤研究的深入,发现OPN与胶质瘤的发生发展有着十分密切的关系。     

一种新型纳米基因载体的制备及体外实验

本实验以聚乳酸和O-羧甲基壳聚糖为基质材料，采用超声波法制备了聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球，并用环境扫描电镜和XPS对其进行了表征，将聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球携带寡核苷酸转染TJ905人脑胶质瘤细胞，并通过RT-PCR方法对细胞的转染情况作了一系列的体外检测，结果表明，携带寡核苷酸的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米微球能有效地转染TJ905人脑胶质瘤细胞，同时也能有效地抑制胶质瘤细胞中端粒酶RNA，端粒酶催化亚基RNA的表达和端粒酶的活性，从而抑制人脑胶质瘤细胞生长，达到基因治疗的目的。     

探讨人胶质瘤细胞系U87细胞中反义miR-21诱导凋亡机制

目的 探讨下调miR-21诱导人胶质瘤细胞系U87细胞凋亡机制.方法 应用化学方法合成的反义miR-21寡聚核苷酸(anti-miR-21),通过瞬转法转染U87细胞,检测U87细胞凋亡、增殖、侵袭等变化,并结合生物信息学分析、Western印迹验证在U87细胞中miR-21和PTEN基因及caspase间关系.结果 体外转染反义miR-21寡聚核苷酸能明显抑制U87细胞生长,诱导其凋亡,降低侵袭能力;增加caspase-3表达活性,活化caspase-9表达,但不影响PTEN和caspase-8表达.结论 miR-21可能是人胶质瘤U87细胞的抗凋亡微RNA(microRNA,miRNA),反义miR-21可能通过easpase-9、3而不是PTEN诱导肿瘤细胞凋亡.     

RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响

目的 探讨RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞生长的影响.方法 用免疫组化染色法检测RAS蛋白在正常脑组织及各级别胶质瘤组织中的表达水平,并采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和流式细胞技术检测降低RAS活性后U251细胞的增殖和凋亡情况;用Western印迹法检测ERK和AKT信号通路.结果 胶质瘤组织中RAS的表达随胶质瘤恶性程度增高而增强.抑制RAS 蛋白活性后,RAS信号通路的下游分子ERK和AKT蛋白磷酸化水平降低;U251胶质瘤细胞生长受抑制,细胞生长阻滞在G1期且凋亡增加.结论 RAS蛋白在胶质瘤中高表达,抑制其活性可下调ERK和AKT 信号通路,进而调控细胞的生长.     

基底核损伤与额叶损伤对注意力和短时记忆的影响

目的：探讨基底核损伤与额叶损伤对注意力和短时记忆的影响，为不同脑区损伤患者记忆康复策略的制定提供理论依据。方法：收集2007年3—8月在南京医科大学第一附属医院住院患者共28例，其中额叶损伤组12例，左侧基底核损伤组8例．右侧基底核损伤组8例。同期住院的非脑部疾病的患者或无任何疾病的健康者10例。结果：①额叶损伤组在MMSE中的计算力、回忆能力．WMS中所有的注意力和短时记忆力．连线A和B测验等得分均显著低于对照组（P〈0．05）。②左侧基底核损伤组在MMSE中的计算力和回忆能力，在WMS—R中的注意力和与短时记忆相关的逻辑记忆和视觉成对联想．以及连线测验A和B等得分也显著低于对照组（P〈0．05）。③右侧基底核损伤组在MMSE中的回忆能力．WMS中的注意力和与短时记忆相关的逻辑记忆和视觉成对联想．以及连线测验B等得分与对照组相比有显著差异（P〈0．05）；而数字记忆广度测验项目的得分低于对照组，显著高于额叶损伤组和左侧基底核损伤组（P〈0．05）。结论：额叶损伤所导致的注意障碍与短时记忆障碍较基底核损伤更为严重而广泛；左右侧基底核损伤在瞬时记忆方面有其相应特征：该研究提示计算力、回忆能力以及数字记忆广度等测验项目可以用于为基底核或额叶损伤患者的记忆障碍检查。     

反义hTERT抑制恶性胶质瘤生长的体内外研究

目的 探讨腺病毒介导的反义hTERT在体内外对恶性胶质瘤细胞生长的影响.方法 构建含有hTERT反义序列的腺病毒载体在体内外转染恶性胶质瘤细胞系U251,检测肿瘤细胞生长情况、细胞周期变化、端粒酶活性、hTERT蛋白表达等.结果 腺病毒介导的hTERT反义治疗在体外明显抑制肫瘤细胞生长,增殖减慢,凋亡增多,细胞较多聚集在G1/G0期,转染后第6天细胞生存率为46.9%,端粒酶活性和hTERT蛋白表达都明显下降,在体内实验中肿瘤生长明显减慢.结论 腺病毒介导的反义hTERT在体内外能明显抑制恶性胶质瘤细胞的生长.