氟中毒大鼠血清和红细胞中脂质过氧化物水平及抗氧化物质含量变化

实验用 Wistar 大鼠72只,随机分为三组,即对照组、10ppm 氟水组和30ppm 氟水组各组动物于实验后5个月及8个月分两批处理进行检查。结果表明,10ppm 氟水组大鼠于实验后8个月、30ppm 氟水组大鼠于实验后5个月及8个月其血清和红细胞中脂质过氧化物含量升高、谷胱甘肽过氧化物酶活性降低,还原型谷胱甘肽含量减少,但超氧化物歧化酶活性无明显改变。提示自由基水平的增高可能是氟病发生机制中的一个重要的中间介导环节。     

甲基苯丙胺对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的自噬流及凋亡影响

目的 观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINKl/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响.方法 在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察线粒体自噬现...     

贵州省地方性氟中毒地区人群GSTP1基因Ile105Val位点多态性分析

Objective To investigate plasma glutathione S-transferase(GSTs) activity and GSTP1 gene Ile105Val polymorphism in Bijie City, Guizhou Province, a coal-burning fluorosis endemic area. Methods One hundred and sixty villagers from Yachi Twon using non-improved cooking stoves were selected as the non-intervened group in Bijie City, Guizhou Province where coal-burning fluorosis was prevailing; 153 villagers as the intervented group were chosen from Changchun Twon, where cooking stoves were improved; 151 villagers were served as the control group from Baiyunshan Twon, Changshun County without endemic fluorosis. The activity of GSTs was tested by colorimetric analysis with spectrophotometer. The genotype of the GSTP1 gene Ile105Val polymorphism, presenting as either homozygous wild-type (AA), or heterozygous mutation type (AG), or homozygous mutation type (GG), was detected through the PCR-RFLP procedure. Results The activity of GSTs in plasma of non-intervened group [(12.44±4.97) kU/L]was significantly lower than that of intervened group (P < 0.05), and that of intervened group[(20.78±6.20)kU/L]was significantly lower than that of control group[(24.30±6.27)kU/L, P< 0.05]. The difference of the enzyme activity of three groups were statistically significant (F = 51.71, P < 0.05), but this enzyme activity did not vary significantly in each sex of each grnup(P > 0.05). Compared intervened group [AA:67.3%(103/153), AG:29.4%(45/153),GG:3.3%(5/153)]and non-intervened group[AA:66.9%(107/160), AG:30%(48/160), GG:3.1%(5/160)]with control group[AA:74.8%(113/151), AG:25.2%(38/151), GG:0 (0/151)], the Ile105Val polymorphism site of GSTP1 gene had significant difference(χ2= 6.04,6.07, both P< 0.05), but not significant between intervened and non-intervened groups(χ2 = 0.02, P>0.05). Conclusions Fluorosis can decrease the activity of GSTs and introduce the GSTP1 gene Ile105Val polymorphism, intervention with the fluorine intake will improve the effect of fluoride on the body.     

慢性氟中毒对大鼠脑组织Phospho-Elk-1表达的影响

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号转导通路下游作用底物三元复合物因子Phospho-Elk-1的表达和分布,探讨慢性氟中毒所致学习记忆损害的发生机制.方法 SD 大鼠72只,体质量100～120 g,按体质量随机分为3组,每组24只,雌雄各半.对照组饮用自来水(含氟量<0.5 mg/L),低氟组和高氟组饮用加入氟化钠的自来水(P质量浓度分别为5.0、50.0 mg/L).6个月后,称取大鼠体质量,观察氟斑牙发生情况,用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟及骨氟;用Morris水迷宫方法的定向航行实验检测大鼠学习能力,空间探索实验检测大鼠记忆能力;用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织中Phospho-Elk-1在蛋白水平的表达和分布.结果 低氟组和高氟组大鼠体质量[(449.2±77.1)、(312.8 ±89.7)g]较对照组[(635.5±76.2)g]显著下降(P均<0.05),出现不同程度氟斑牙(x2=7.83,P<0.05),尿氟[(2.56±0.91)、(5.73±3.14)mg/L]及骨氟[(709.2±37.4)、(1306.3 ±102.4)mg/kg]较对照组[(0.92±0.30)mg/L、(348.5 ±89.2)mg/kg]明显升高(P均<0.05).低氟组和高氟组大鼠逃避潜伏期[(7.4±4.1)、(12.2±5.7)s]较对照组[(4.8±2.7)s]明显延长(P均<0.05),第1次穿越平台区时同[(4.18±1.10)、(5.89±0.56)s]较对照组[(1.17±0.75)s]显著延长(P均<0.05),均以高氟组尤为明显(P均<0.05).低氟组和高氟组大鼠海马CA1区(167.4±8.3、163.2±9.4)、CA2区(175.7±5.0、183.3±4.2)、CA3区(165.2±11.6、162.9±4.4)、CA4 区(168.7±6.9、169.5±5.3)、齿状回(185.2 ±4.0、193.1±6.1)及尾壳核(181.4±3.8、179.8±5.5)神经细胞Phospho-Elk-1表达水平较对照组(142.4±8.1、144.9±8.4、143.6±5.8、116.8±9.1、140.2±7.8、163.1±13.1)显著增加(P均<0.05).结论 慢性氟中毒可引起大鼠脑组织海马及尾壳核区域Pbospho-Elk-1表达水平升高,这种改变可能与大鼠学习记忆能力下降机制有一定关系.

Abstract：

Objective To investigate the expression and distribution of the downstream substrate of extracellular regulated protein kinase(ERK1/2) pathway, ternary complex factor phospho-Elk-1, in rat brains with chronic fluorosis, and reveal the mechanism of the impaired learning and memory ability caused by chronic fluorosis. Methods Seventy-two SD rats, weighing 100 - 120 g, were randomly divided into 3 groups, 24 in each group (half male and half female). The rats in control group were fed with tap water (fluoride < 0.5 mg/L); low- and high-dose fluoride groups were fed with tap water with different concentrations of NaF(5.0,50.0 mg/L F-, respectively). After 6 months, body weight was weighed, dental fluorosis was determined by observation and urinary fluoride and bone fluoride were detected by fluorine ion-selective electrode; the learning ability of rats was measured by navigation test of Morris water maze, and memory ability by spatial probe test in Morris water maze; the expression and distribution of phospho-Elk-1 in different brain regions were detected by immunohistochemistry method. Results In low- and high-fluoride groups, the body weight of rat[(449.2 ± 77.1), (312.8 ± 89.7)g] was significantly decreased than that of control [(635.5 ± 76.2 )g, all P< 0.05], the varying degrees of dental fluorosis were observed(x2 = 7.83, P<0.05), urinary fluoride[(2.56 ±0.91),(5.73 ±3.14)mg/L] and bone fluoride[(709.2 ± 37.4) ,(1306.3 ± 102.4) mg/kg] were significantly higher than those in controls[(0.92 ± 0.30)mg/L,(348.5 ± 89.2)mg/kg, all P< 0.05]. The escape latency of low- and high-fluoride groups[ (7.4 ± 4.1), (12.2 ± 5.7)s] was longer than that of control [(4.8 ± 2.7 )s, all P < 0.05] and the escape latency in high-fluoride group was significantly longer than that in other groups (all P < 0.05); in spatial probe test, the time of first crossing platform was longer in rats with fluorosis [(4.18 ± 1.10),(5.89 ± 0.56)s] as compared to control[(1.17 ± 0.75)s, all P< 0.05]. Expressions of phospho-Elk-1 in the hippocampus CA1(167.4 ± 8.3,163.2 ± 9.4), CA2(175.7 ± 5.0,183.3 ± 4.2), CA3(165.2 ± 11.6,162.9 ± 4.4), CA4(168.7± 6.9,169.5 ±5.3), fascia dentate (185.2 ±4.0,193.1 ±6.1) and caudate putamen( 181.4 ± 3.8, 179.8 ± 5.5) in low- and high-fluoride groups were higher than those of controls(142.4 ± 8.1,144.9 ± 8.4,143.6 ± 5.8, 116.8 ± 9.1,140.2 ± 7.8,163.1 ± 13.1, all P< 0.05). Conclusion Chronic fluorosis can cause increased expression of phospho-Elk-1 in the hippocampus and caudate putamen region of rat brains, which might be related to the mechanisms of decreased learning and memory ability of rats overexposed to fluoride.     

贵州省毕节市燃煤型氟中毒地区人群血常规分析

目的 通过贵州省毕节市燃煤型地方性氟中毒地区汉族人群血常规调查,了解其健康状况及所存在问题.方法 在贵州省毕节市燃煤污染型地氟病病区,对已改良炉灶的长春镇长春村的全体居民(干预组)和未改良炉灶的鸭池镇十八村的全体居民(非干预组)进行血常规检查,检查指标包括白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均压积体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积分布宽度(RDW-CV)、血小板(PLT).结果 在男性中,干预组RBC、Hb、HCT、MCHC、PLT分别为(4.95±1.18)×1012/,L、(138.46±15.90)g/L、(50.19±11.48)%、(284.90±48.73)g/L、(334.92±119.34)× 109/L,非干预组分别为(4.02±0.47)x 1012/L、(131.00±15.90)g/L、(40.90±7.60)%、(323.14±41.95)g/L、(280.79±100.34)×109/L,组间比较差异均有统计学意义(U值分别为7.72、3.50、7.12、6.28、3.66.P＜0.01.);在女性中,干预组RBC、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV、PLT分别为(4.75±1.20)×1012/L、(46.91±11.20)%、(99.30±6.88)f1、(28.10±8.66)pg、(275.61±54.49)g/L、(16.95±1.63)%、(351.23±150.37)×109/L,非干预组分别为(3.85±0.65)×1012/L、(38.80±6.60)%、(100.80±7.00)f1、(33.10±5.40)pg、(327.14±44.52)g/L、(16.60±1.58)%、(279.40±98.07)×109/L,组间比较差异有均统计学意义(U值分别为8.92、10.72、2.04、6.61、9.82、2.06、5.39,P＜0.01或＜0.05).非干预组的RBC和Hb异常率[32.62%(92/282)、16.67%(47/282)]高于干预组[9.73%(29/298)、6.71%(20/298)],组问比较差异均有统计学意义(x2值分别为45.992、14.054,P＜0.01).结论 氟中毒病区干预组人群血常规检查情况优于非干预组,尤其是干预组的贫血情况改善较好.     

慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞线粒体融合分裂基因转录水平观察

目的 观察慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞线粒体融合分裂基因mRNA含量和活性氧(ROS)水平,探讨其在氟中毒线粒体损伤中的作用.方法 选取SD大鼠120只,按体重随机分为3组:对照组、低氟组、高氟组,每组40只.在饮水中加入不同剂量的氟化钠,含氟量分别为＜0.5、10、50 mg/L,饲养3、6个月.采用线粒体ROS荧光探针法检测大鼠大脑皮质神经细胞线粒体ROS水平,实时荧光定量PCR法检测线粒体融合基因Mfn1及分裂基因Fis1、Drp1转录水平.结果 3个月时,与对照组[10.43±5.98、(3.4±0.6)×103、(8.8±1.4)×10、(1.2±0.2)×102]比较,低氟组大鼠大脑皮质神经细胞线粒体ROS水平(11.67±3.49)未见明显改变(P＞ 0.05),线粒体融合分裂基因Mfn1、Drp1、Fis1 mRNA表达水平未见明显改变[(3.1±0.3)×104、(6.7±2.7)×10、(5.0±0.9)×10,P均＞0.05];而高氟组大鼠大脑皮质神经细胞线粒体ROS水平(25.48±6.09)显著升高(P＜0.05),线粒体融合分裂基因Mfn1、Drp1、Fis1 mRNA表达水平[(1.0±0.2)×1011、(3.0±1.6)×103、(8.9±3.6)×102]明显升高(P均＜ 0.05).6个月时,与对照组[25.26±6.41、(3.0±0.8)×109、(5.1±0.8)×103、(2.8±0.7)×102]比较,低、高氟组大鼠大脑皮质神经细胞线粒体ROS水平(63.02±8.15、65.60±7.40)明显升高,线粒体融合基因Mfn1mRNA表达水平[(3.0±0.4)×106、(4.0±0.9)×104]显著降低,分裂基因Fis1、Drp1 mRNA表达水平[(2.0±0.8)×106、(4.0±0.6)×105,(3.8±1.3)×103、(1.3±0.2)×103]明显升高(P均＜0.05).结论 摄入过量的氟导致大鼠大脑皮质神经细胞ROS水平升高,线粒体融合基因转录降低、分裂基因转录升高,这种改变与染氟时间和剂量呈正相关.线粒体融合分裂基因转录水平改变可能与慢性氟中毒引起的线粒体氧化应激升高有关.     

燃煤型氟中毒病区铁炉使用情况及其满意度影响因素分析

目的调查贵州省毕节市地氟病病区铁炉的使用情况,分析使用铁炉满意度的影响因素,为地氟病改炉改灶措施的后期管理和可持续发展提供依据。方法采取分层随机抽样的方法,按病区改炉改灶实施年限进行分层,每层抽取1个乡镇进行集中和入户调查。分析当地农民铁炉使用及维护情况,以及对炉灶使用的满意度,采用Logistic回归分析使用铁炉满意度的影响因素。结果当地铁炉使用率为80.0%,改良铁炉拥有率为65.0%。铁炉正确使用率为51.3%,改良铁炉正确使用率大于一般铁炉(χ2=8.32,P=0.004)。病区改良铁炉完好率(69.5%)高于一般铁炉(39.1%)(χ2=20.94,P<0.001),铁炉损坏部件中,以烟道损坏最严重;改良铁炉的完好率随使用时间的延长逐渐降低(χ2趋势=15.15,P<0.001)。Logistic回归分析显示铁炉完好和有技术支持能提高使用铁炉满意度,铁炉使用时室内有煤烟会降低铁炉使用满意度。结论随着地氟病改炉改灶措施的实施,调查地区农民改良铁炉使用率不断提高,初步形成了良好的生活方式。保证铁炉使用满意度和持续提供技术支持有助于加强改炉改灶的后期管理,促进燃煤型氟中...     

骨髓间充质干细胞移植至血管性痴呆大鼠模型的初步研究

目的：建立体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,体外诱导BMSCs向神经元样细胞方向分化、鉴定并移植至血管性痴呆大鼠模型的方法.方法：体外分离培养SD大鼠BMSCs,采用贴壁筛选法分离纯化BMSCs,显微镜下观察不同时期BMSCs的细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物表达鉴定BMSCs,用含10 μg/L bFGF的L-DMEM及含200μmoVLBHA、2％ DMSO的无血清L-DMEM诱导BMSCs向神经元样细胞分化;免疫细胞化学检测分化细胞的巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达,以确定其分化特性;用尿嘧啶脱氧核苷（BrdU）标记分化好的细胞,移植到改良Pulsinelli＇s四血管复制的血管性痴呆（VaD）模型大鼠侧脑室内,免疫组织化学检测BrdU表达以反映移植BMSCs在大鼠脑内的生长情况,Moms水迷宫检测大鼠学习记忆能力.结果：大鼠BMSCs可通过贴壁筛选法成功分离并在体外大量扩增,流式细胞仪检测显示BMSCs第5代表面标志可达90％以上,细胞表型CD90、CD29、CD44表达阳性,CD45表达阴性;bFGF/BHA诱导BMSCs分化后有Nestin和NSE表达,分化细胞具有神经细胞的形态;与对照组相比,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,第1次穿越平台时间延长,穿越平台次数减少,差异有统计学意义（P ＜0.05）;BrdU成功标记诱导后的BMSCs,并可在移植大鼠脑内检测到BrdU标记阳性细胞.结论：体外成功分离、培养大鼠BMSCs,生长稳定、可多次传代,bFGF/BHA可诱导BMSCs分化为神经元细胞,BMSCs成功移植到VaD大鼠,BMSCs有望为神经疾病细胞移植治疗提供丰富、易得的细胞来源.     

不同聚集形式β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞发动蛋白Ⅰ和突触素表达的影响

目的探讨不同聚集形式的β-淀粉样肽(Aβ)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)发动蛋白Ⅰ(DynⅠ)和突触素(Syn)表达的影响。方法制备不同聚集形式的Aβ1～42处理SH-SY5Y细胞,采用蛋白质印迹法检测细胞中DynⅠ及Syn蛋白表达水平;采用免疫组织化学染色方法检测10例阿尔茨海默病(AD)患者及8例老年同龄对照者尸解后脑海马结构中β-淀粉样肽寡聚体(AβOs)表达水平。结果 Aβ单体或Aβ纤丝体处理SH-SY5Y细胞未见DynⅠ及Syn蛋白表达水平显著变化,AβOs处理细胞可见DynⅠ及Syn蛋白表达水平降低(P<0.05);AD患者海马及内嗅区皮质神经元内AβOs的表达显著高于老龄对照者(P<0.05)。结论细胞内表达的AβOs可能是引起AD患者脑中网格蛋白内吞调节蛋白———DynⅠ表达下降及突触丧失的主要Aβ神经毒性形式,该改变可能与AD发病机制中学习记忆能力减退有关。     

灯盏细辛活性部位对抗β-淀粉样蛋白引起的细胞凋亡

目的：研究灯盏细辛醇提物不同活性部位对β-淀粉样蛋白（Aβ）引起的神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）凋亡的拮抗作用,探讨其是否在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）治疗中有神经保护作用。方法：选用灯盏细辛醇提物不同活性部位及Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,用比色法测定MTT还原率,Annexin V-FITC试剂盒测定细胞凋亡水平。结果：安全浓度的灯盏细辛醇提物不同活性部位能对抗Aβ引起的MTT还原率降低和细胞凋亡。结论：灯盏细辛醇提物不同活性部位可对抗Aβ的神经毒性作用。