氟铝中毒病区成年和儿童患者血浆及红细胞 cAMP 含量的改变

3′,5′—环磷酸腺苷(cAMP)是激素作用中的第二信使,对细胞的代谢具有重要的调控作用。研究表明,氟可激活多种组织中腺苷酸环化酶而使 cAMP 生成增多。当前,多因素、多元素的相互作用在氟病的发病机制中具有重要地位这一观点逐渐为人们所接受。为了深入这一认识,我们选择氟铝中毒病区成年和儿童患者作为研究对象,观察高氟、高铝并存时对机体 cAMP 水平的影响。研究对象与方法一、成年患者:选择贵州省六盘水市氟铝中毒病区成年患者44人,其中男性28人,女性16人,年龄17—75岁,以17—40岁、41—55岁、>55岁为界线分为三个年龄组。每例患者经临床及骨 X线检查证实有明显的氟铝中毒性损害,同时以     

一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用

目的采用一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)探讨一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组和Na F(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1、2、4 mmol/L)单独染毒组及L-NIO(1、2、3、4、5、10μmol/L)单独染毒组,染毒48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性。将大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组、Na F(0.2、1 mmol/L)单独染毒组、Na F和L-NIO联合染毒组(0.2 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO和1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO),染毒48 h后,检测细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平及细胞凋亡情况以及细胞培养液中一氧化氮(NO)含量和NOS活力。结果与对照组相比,0.02~4 mmol/L Na F染毒组及4~10 mmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,仅0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平升高,除0.2 mmol/L Na F染毒组e NOS蛋白的表达水平外,差异均有统计学意义(P0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,仅1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率较低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较高。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论过量氟可致大鼠原代海马神经细胞NOS活力上升,NO合成增强,导致氧化损伤及细胞凋亡;L-NIO可以拮抗过量氟引起的原代海马神经细胞e NOS蛋白、m RNA表达及细胞凋亡率增高,起到一定的神经保护作用。     

贵州3个地域苗族人群mtDNA 9 bp序列缺失频率

目的分析贵州3个地域苗族人群线粒体DNA COⅡ/t RNALys基因间小非编码V区串联重复序列9bp缺失频率。方法采用聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶法(PCR-PAGE)及DNA序列分析法进行检测。结果从江岜沙、黔西沙井、威宁龙街等3个地域苗族人群缺失频率分别为19.15%(9/47)、42.5%(17/40)和29.55%(13/43);岜沙苗族人群与沙井苗族人群9bp缺失频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 3个地域苗族人群mtDNA 9bp缺失基因频率较高,不同地域苗族人群间缺失频率有一定差异。     

慢性氟中毒对大鼠神经细胞线粒体分裂蛋白Drp1表达的影响

目的 研究慢性氟中毒大鼠大脑皮质神经细胞线粒体分裂基因动态相关蛋白1(Drp1)表达的改变.方法 将120只SD大鼠(1月龄、体重100 ～ 120 9)以单纯随机法分为3组(对照组、低氟组和高氟组),每组40只,各组染毒剂量以饮水中加入氟剂量计算:分别为0、10和50 mg/L;染毒3个月和6个月时,每组分别处死20只.采用免疫组织化学方法和免疫蛋白印迹法(western-blotting)检测线粒体分裂蛋白Drp1表达.结果 3个月时,Drp1的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞个数发生了改变,与对照组[(36.3±5.8)个]相比较,低氟组[(34.7±4.1)个]的改变无统计学意义(t=1.5,P＞0.05),而高氟组[(45.0±4.7)个]表达增加(t=8.8,P＜0.05);westernblotting法蛋白印迹平均灰度值也具有相同的改变,与对照组(0.59±0.03)相比,低氟组(0.62±0.03)和高氟组(0.71±0.02)的水平升高(t值分别为0.02、0.11,P值均＜0.05).6个月时,Drp1的蛋白免疫组织化学强阳性表达神经细胞个数发生了改变,与对照组[(33.2±4.4)个]相比较,低氟组[(36.6±3.8)个]和高氟组[(39.4±4.2)个]升高(t值分别为3.5,6.3,P值均＜0.05);westernblotting法蛋白印迹平均值也有改变,与对照组(0.65±0.06)相比,低氟组(0.80±0.09)和高氟组(0.76±0.08)的水平升高(t值分别为0.1、0.1,P值均＜0.05).结论 高剂量染氟可造成分裂基因Drp1表达改变,慢性氟中毒神经细胞损伤可能与线粒体分裂亢进有关.     

HLA-DP基因2个单核苷酸多态性位点与贵州少数民族人群HBV感染的关联研究

目的 研究贵州省世居少数民族(布依族、苗族和水族等)人群人类白细胞抗原(HLA)-DP基因rs3077和rs9277535位点多态性与HBV感染的相关性。方法 采用病例-对照研究,募集布依族、苗族和水族等共计256例HBV感染者作为病例组,同时选取142例HBV自限性感染者和135例健康人群作为对照组。应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR单核苷酸多态性分型技术对HLA-DP基因rs3077和rs9277535位点进行分型。结果 HBV感染组、HBV自限性感染组和健康对照组相比:HLA-DP基因rs9277535位点的等位基因在HBV感染组和健康对照组之间分布差异有统计学意义(P<0.05),rs3077位点的等位基因和基因型在各组间的差异无统计学意义(P>0.05)。显性模型下各组之间基因型频率比较:HLA-DP基因rs9277535位点在HBV感染组和健康对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05),进一步校正年龄、性别因素后显示,AA+AG基因型与GG基因型相比为乙型肝炎(乙肝)易感的保护因素(OR=0.645,95%CI:0.421~0.988);rs3077位点在各组间比较均无统计学意义。性别分层后的显性模型下显示,男性携带rs3077位点CC+CT基因型与TT基因型相比为乙肝易感的保护因素(OR=0.493,95%CI:0.266~0.916);rs9277535位点在显性模型下各组比较基因型的分布差异无统计学意义。在布依族、苗族和水族人群中比较各组中等位基因和基因型分布,HLA-DP基因rs3077位点的基因型在布依族HBV感染组与健康对照组中的分布差异有统计学意义(χ²=6.726,P=0.036)。结论 HLA-DP基因rs9277535位点携带A等位基因可能是乙肝易感的保护因素,男性携带rs3077位点C等位基因可能是乙肝易感的一个保护因素,rs3077和rs9277535位点多态性与HBV的自限性感染可能无关。HBV感染者HLA-DP基因rs3077位点的基因型分布存在民族间的差异。     

燃煤型氟中毒对雄性大鼠生殖内分泌激素的影响

 摘要 目的：研究燃煤型氟中毒对雄性大鼠生殖内分泌的影响。方法：将105只雄性SD大鼠随机分为7组：对照组、低氟组、中氟组、高氟组、低氟加营养组、中氟加营养组、高氟加营养组。各染毒组喂饲含不同比例的燃煤型氟中毒病区煤烘玉米的饲料,复制燃煤型氟中毒动物模型。分别于染毒90d、120d和180d三阶段以股动脉放血法处死动物,查看氟斑牙,测尿氟,用RIA法测定大鼠睾丸内T,血清T、E2、LH、FSH 、GnRH、PRL。结果：建成氟中毒动物模型。与对照组相比,各染毒组大鼠血清T、E2、PRL水平随染毒时间延长和染氟剂量增加逐渐降低（p<0.05或p<0.01）; LH、FSH均水平随染毒时间延长和染毒剂量增加逐渐增高（p<0.05或p<0.01）;与对照组相比,而各染毒组GnRH水平随染毒时间延长逐渐降低（p<0.05或p<0.01）,而不同剂量的染毒组之间,随染氟剂量增加逐渐升高（p<0.05或p<0.01）。相同染氟剂量加营养组性激素水平均有所改善（p<0.05或p<0.01）。结论：燃煤型氟中毒对雄性大鼠生殖内分泌有明显的影响作用,染氟剂量越多、染毒时间越长,影响越重,降低摄氟量及提高饮食营养可改善其影响。     

SH-SY5Y神经细胞中α3尼古丁受体基因表达沉默对β分泌酶蛋白表达的影响

目的 研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因沉默对β分泌酶(BACE)蛋白表达的影响.方法 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒及空质粒的SH-SY5Y神经细胞与正常对照组细胞用Real time-PCR和Western印迹法检测α3 nAChR mRNA表达和蛋白水平表达,以评价RNA的干扰效率;用蛋白质印迹方法 分别检测细胞中β分泌酶两个亚型(BACE1和BACE2)蛋白表达水平的变化.结果 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒的细胞克隆株,与空质粒和正常对照组相比BACE1蛋白表达水平增加,BACE2蛋白表达水平减少.结论 α3 nAChR可以通过增加BACE2蛋白表达水平及减少BACE1蛋白表达水平,影响Aβ生成从而减少Aβ的神经毒性作用,发挥神经保护作用.     

β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞突触素、发动蛋白Ⅰ及衔接蛋白180表达的影响

目的 探讨β-淀粉样肽(Aβ)对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞突触素(Syn)、发动蛋白Ⅰ (Dyn Ⅰ)及衔接蛋白180(AP180)表达的影响。 方法 分别应用0.01、0.1、1、2及5μmol/LAβ1-42处理SH-SY5Y细胞,对照组细胞不加任何处理。MTT法检测细胞增殖情况,Western blotting 检测0.5、1μmol/L Aβ1-42处理组及对照组细胞Syn、DynⅠ和AP180蛋白表达,RT-PCR检测1 μmol/L Aβ1-42处理组及对照组细胞Syn、DynⅠ和AP180 mRNA表达。 结果 0.1 μmol/L Aβ1-42处理细胞即可出现细胞增殖率下降,并呈剂量依赖性负性相关关系,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05); 0.5 μmol/L Aβ1-42处理细胞可见DynⅠ蛋白表达降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);1 μmol/L Aβ1-42处理细胞可见Syn、DynⅠ蛋白及mRNA表达均降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);但未见AP180蛋白及mRNA表达水平发生改变。 结论 Aβ1-42可引起人SH-SY5Y细胞Syn和DynⅠ表达降低,该改变可能与AD发病中学习记忆能力减退有关。     

贵州省从江县侗族八项血液学指标分析

目的:对贵州省从江县侗族进行血液学指标抽样调查分析,了解该地区侗族人群的健康状况。方法:随机抽取当地侗族241人,年龄(37±24)岁,采集受检者空腹静脉血,采用自动血细胞分析仪进行白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞比容(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血小板(PLT)等8项血液学指标检查;结果:RBC计数低于3.5×1012/L者占6.2%,Hb低于110g/L者占39.8%,HCT低于37%者占17.4%,WBC异常达14%。结论:贫血、感染等情况在从江县侗族人群中较多见。     

医学生物技术本科生基因工程实验教学改革与实践

为了培养高素质医学生物技术本科人才,完善基因工程实验教学方法,对实验教学课程安排、实验内容、教学形式等进行了改革,建立合理的实验成绩评估体系,提高学生实验动手能力,调动学生实验学习兴趣,提高实验教学质量,以取得良好实验教学效果。