应力环境组织培养法保存的人骨软骨移植物中胶原和基质金属蛋白酶组织抑制剂3

背景:应力可以对体内外软骨组织或软骨细胞产生多种影响。目的:观察应力环境对普通组织培养基体外保存的骨软骨移植物保存质量的影响。方法:将正常人的骨软骨移植物分成3组:对照组即新鲜移植物,普通组移植物采用普通组织培养法保存,应力组用摇床作为动态加载装置对普通组织培养法保存的骨软骨移植物进行持续周期性应力加载。结果与结论:储存移植物2周时,Western blot法和透射电镜观察显示,与静态环境下保存相比,动态加载环境使关节软骨细胞外基质中基质金属蛋白酶组织抑制剂3的表达明显提高(P<0.01),能更好地保护基质中胶原成分的超微结构。结果证实,应力环境有利于保存人同种异体移植物软骨细胞和胶原的超微结构,动态非接触加载可提供一种更好的库存人同种异体骨软骨移植物的方法。     

应力环境组织培养法保存的人骨软骨移植物中胶原和基质金属蛋白酶组织抑制剂3

背景：应力可以对体内外软骨组织或软骨细胞产生多种影响。目的：观察应力环境对普通组织培养基体外保存的骨软骨移植物保存质量的影响。方法：将正常人的骨软骨移植物分成3组：对照组即新鲜移植物,普通组移植物采用普通组织培养法保存,应力组用摇床作为动态加载装置对普通组织培养法保存的骨软骨移植物进行持续周期性应力加载。结果与结论：储存移植物2周时,Western blot法和透射电镜观察显示,与静态环境下保存相比,动态加载环境使关节软骨细胞外基质中基质金属蛋白酶组织抑制剂3的表达明显提高（P〈0.01）,能更好地保护基质中胶原成分的超微结构。结果证实,应力环境有利于保存人同种异体移植物软骨细胞和胶原的超微结构,动态非接触加载可提供一种更好的库存人同种异体骨软骨移植物的方法。     

应力环境对组织培养法保存的人骨软骨移植物的影响

目的 研究应力环境对普通组织培养基体外保存的骨软骨移植物的保存质量的影响,从而改进组织培养法保存软骨的效果.方法用摇床作为动态加载装置对体外保存的骨软骨移植物进行持续周期性应力加载,以模拟体内关节软骨的应力环境.摇床在37℃的孵箱中工作,频率设置为1 Hz.在储存2周时,用Western bloting的方法对关节软骨中的肌动蛋白β-actin进行半定量分析,用透射电镜观察胶原的超微结构,并与对照组比较.结果与静态环境下保存相比,动态加载环境使关节软骨细胞外基质中β-actin的表达水平明显提高,并能更好地保护基质中胶原成分的超微结构.结论应力环境有利于保存人同种异体移植物软骨细胞和胶原的超微结构.动态力学加载可提供一种更好的库存人同种异体骨软骨移植物的方法.

Abstract：

Objective To study the effect of the loading environment on the chondrocytes and the collagen ultrastructure at articular cartilage of the osteochondral allograft graft preserved by tissue culture method so as to improve the preservation effect. Methods A kind of shaking table was used as a dynamic loading device for storage of the osteochondral allograft to simulate the mechanical environment of normal articular cartilage in vivo. The device worked in an incubator at 3711 and the frequency was 1Hz. Western blotting was used for analysis of β-actin at the articular cartilage of the graft for investigating the effects of stress condition on the chondrocyte function. Transmission electron microscopy was used to observe the collagen ultrastructure at the articular cartilage of the graft two weeks after storage and compared with the control group. Results The dynamic loading condition could significantly increase the expression of β-actin and keep the ultrastructure of the collagen fibril in articular cartilage compared with the static condition. Conclusions The loading condition benefits the chondrocyte function and collagen ultrastructure of the articular cartilage in human osteochondral allograft. The dynamic mechanical loading may provide a better method in preservation of the human osteochondral allograft.     

前列腺素E2对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2活性的影响及其信号通路研究

目的:观察前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)活性的影响及其信号通路的研究,从而探讨PGE2对前交叉韧带(Anterior cruciate ligament,ACL)的损伤或修复可能的影响.方法:用不同浓度的PGE2处理体外培养的滑膜细胞,处理后12、24、48 h和72 h明胶酶谱法检测培养液中MMP-2的活性;再用合适浓度的PGE2单独或分别与7种信号通路特异性抑制剂同时处理滑膜细胞,明胶酶谱法检测MMP-2的活性,并对其进行相对定量.结果:PGE2呈浓度和时间依赖性地增     

应力环境组织培养法保存的人骨软骨移植物中胶原和基质金属蛋白酶组织抑制剂3*○

背景：应力可以对体内外软骨组织或软骨细胞产生多种影响。目的：观察应力环境对普通组织培养基体外保存的骨软骨移植物保存质量的影响。 方法：将正常人的骨软骨移植物分成3组：对照组即新鲜移植物,普通组移植物采用普通组织培养法保存,应力组用摇床作为动态加载装置对普通组织培养法保存的骨软骨移植物进行持续周期性应力加载。 结果与结论：储存移植物2周时,Western blot法和透射电镜观察显示,与静态环境下保存相比,动态加载环境使关节软骨细胞外基质中基质金属蛋白酶组织抑制剂3的表达明显提高(P < 0.01),能更好地保护基质中胶原成分的超微结构。结果证实,应力环境有利于保存人同种异体移植物软骨细胞和胶原的超微结构,动态非接触加载可提供一种更好的库存人同种异体骨软骨移植物的方法。     

碱性氨基酸对丙交酯/乙交酯共聚物体外降解时集酸程度的调节

背景：丙交酯／乙交酯共聚物在降解中会产生酸性单体乳酸和乙醇酸而使局部集酸，从而引起机体局部产生炎症反应。目的：采用赖氨酸、组氨酸、精氨酸分别与丙交酯／乙交酯共聚物进行复合，考察它们对丙交酯，乙交酯共聚物降解时集酸程度的调节功效。设计：重复测量实验。时间及地点：实验于2006-07／2007—08在重庆大学生物工程学院完成。材料：丙交酯／乙交酯共聚物（80：20）为美国Sigma公司产品，赖氨酸、组氨酸、精氨酸（纯度〉99％）为美国Sigma公司产品；壳聚糖（脱乙酰度85％）为成都科龙化工试剂广产品；海藻酸钠（黏度1．05～1．15）为天津大茂化学试剂厂产品。方法：将赖氨酸、组氨酸、精氨酸分别各按5％和10％的比例与丙交酯／乙交酯共聚物制成复合物，于体外在37℃下在三蒸水中进行降解2个月。用pH计检测降解液pH的变化：在检测点将试件从人工降解液中取出滤干后再真空干燥12h后进行称重以计算失重率。取相同种类的3份试样的平均pH值作为该监测点下此试样的pH值；取相同种类的3份试样的平均初始质量的平均值作为该此试样的初始质量，取该试样的终质量的平均值作为此试样的终质量。以上述实验结果为依据，将碱性氨基酸的调节效果与海藻酸钠、壳聚糖、碳酸氢钠的调节效果进行比较。主要观察指标：降解液pH的变化；复合物的失重率。结果：各种碱性添加剂都有一定的缓解酸度的能力，NaHCO3的缓解能力最强，海藻酸钠和壳聚糖的缓解能力较低，而碱性氨基酸的缓解能力适中；赖氨酸的添加量为5％时能够得到较佳的综合调节效果。结论：碱性氨基酸能有效地缓解丙交酯／乙交酯共聚物降解后的集酸程度。其中，赖氨酸的添加量为5％时能够得到较佳的综合调节效果。     

前列腺素E2干预后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移

背景:细胞迁移是组织损伤后修复过程中的重要环节之一,但是膝关节交叉韧带损伤后局部产生的细胞因子前列腺素E2对后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞迁移的影响尚未见报道。目的:在后交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞单培养和共培养的条件下,研究前列腺素E2对此2种细胞迁移的影响。方法:体外培养人后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞,分别进行2种细胞的单培养和Transwell共培养,并用质量浓度10μg/L的前列腺素E2干预。比较单培养和共培养下细胞生长状态;细胞划痕试验检测24h时细胞的迁移率。结果与结论:共培养使后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移率较单培养增高128%和48%。前列腺素E2分别使单培养下后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移率降低了28%和14%;使共培养下细胞的迁移率较相应的共培养组未处理细胞下降37%和24%。证实,在前列腺素E2的刺激下,后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞迁移率均明显降低,尤其对共培养下后交叉韧带成纤维细胞迁移率的抑制更显著。     

前列腺素E2对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2活性的影响及其信号通路研究

目的:观察前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)对滑膜细胞基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)活性的影响及其信号通路的研究,从而探讨PGE2对前交叉韧带(Anterior cruciate ligament,ACL)的损伤或修复可能的影响。方法:用不同浓度的PGE2处理体外培养的滑膜细胞,处理后12、24、48 h和72 h明胶酶谱法检测培养液中MMP-2的活性;再用合适浓度的PGE2单独或分别与7种信号通路特异性抑制剂同时处理滑膜细胞,明胶酶谱法检测MMP-2的活性,并对其进行相对定量。结果:PGE2呈浓度和时间依赖性地增高滑膜细胞MMP-2的活性。p38、ERK、PKA通路抑制剂SB203850、PD98059、KT5720对PGE2诱导滑膜细胞MMP-2活性的增高无明显抑制作用;而JNK、AP-1和核因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)通路抑制剂SP600125、姜黄素(Curcumin)和Bay11-7082/7085显著抑制了PGE2诱导MMP-2活性的增高,分别使72 h时MMP-2的活性降至43%、25%和16%、11%(P<0.01)。结论:PGE2诱导滑膜细胞MMP-2活性的增加可能是ACL损伤后难以自行修复的原因之一。JNK、AP-1和NF-κB通路可能参与调控PGE2对MMP-2活性的诱导;其中以NF-κB作用最显著,可能为ACL损伤的治疗提供一种新思路。     

共培养下后交叉韧带成纤维细胞中赖氨酰氧化酶的基因表达

背景：后交叉韧带对人膝关节结构的稳定以及功能的发挥起着重要作用。与内侧副韧带相比,损伤后的后交叉韧带难以很好的自我愈合,甚至会导致半月板撕裂和软骨损伤。为了提高后交叉韧带的愈合能力,这就需要寻找新的途径来再生和修复损伤的后交叉韧带。近年来的研究表明,赖氨酰氧化酶在组织损伤修复过程中起到非常重要的作用,但其在后交叉韧带修复过程中的分子机制研究尚未涉猎。 目的：观察与滑膜细胞共培养后交叉韧带成纤维细胞中赖氨酰氧化酶基因的表达。 方法：将第4代的后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞分别种植于6孔板和Tanswell中。实验分为2组,即后交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞共培养组和后交叉韧带成纤维细胞单层培养组。培养6 h后,提取总RNA,通过半定量PCR和实时定量PCR检测单层培养组和共培养组中后交叉韧带成纤维细胞中赖氨酰氧化酶基因表达。 结果与结论：与单层培养组相比,赖氨酰氧化酶、赖氨酰氧化酶样蛋白1、赖氨酰氧化酶样蛋白2、赖氨酰氧化酶样蛋白3和赖氨酰氧化酶样蛋白4的基因表达在共培养的后交叉韧带细胞中都明显升高,分别增加了1.1,1.4,1.1,1.3,1.1倍(P < 0.05)。单层培养组家族成员在单层培养和共培养中表达情况的差异性,说明细胞之间的相互作用会影响后交叉韧带组织的损伤修复,对后交叉韧带损伤修复的机制研究有极其重要的参考价值。