猫骨髓基质细胞诱导为神经干细胞的实验研究

目的观察猫骨髓基质细胞体外培养及诱导分化情况。方法从猫的骨髓中分离得到骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal cells．BMSC），在体外给予神经干细胞培养基培养，增殖后用分化诱导因子(维甲酸，Retinoic acid，RA)进行诱导分化．倒置相差显微镜下观察活细胞及免疫细胞化学染色情况。结果猫骨髓基质细胞在体外培养中胞体增大，镜下可见丰富的胞浆颗粒，继之出芽，贴壁生长，可形成克隆团，同时可传代培养。这些具有克隆能力的骨髓基质细胞能表达神经干细胞特异性抗原nestin，而且能分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞。结论猫骨髓基质细胞具有干细胞特征，在合适的条件下可扩增、形成克隆并诱导分化出神经胶质细胞和神经元特征细胞，它们可考虑作为神经系统功能缺失细胞移植治疗的种子细胞来源。     

羧肽酶B消除C4副带后对湖北地区C4基因频率及家系C4单体型与补体型的检测

人的补体第四成份(C4)具有高度多态性,其别型的经典检测法仅用神经氨酸酶预处理血浆,这样电泳后每一C4别型表现3条区带,一主两副,定型困难。最新发现,加用羧肽酶B预处理血浆,可以消除副带,使定型变易,且更准确。我们用新的方法重新对湖北地区汉族人的C4基因频率、C4单体型与补体型进行了测定,发现两法结果基本类似,略有区别。鉴于新法优越,建议今后作为检测C4多态性的常规方法。     

湖北汉人全身性红斑狼疮患者补体第4成分基因限制性片段长度多态性的研究

用Ｃ４５末端探针和限制性内切酶ＴａｑⅠ对７５例湖北汉人ＳＬＥ患者和５８例正常人进行了ＲＦＬＰ检测，同时用琼脂糖凝胶电泳免疫固定方法测定了其中５１例患者和５７例正常对照的Ｃ４蛋白质表达情况，结果发现，患者中２４例（３２．０％）的ＲＦＬＰ带型为７．０－５．４ｋｂ（Ａ型），１０例（１３．３％）为７．０－６．０ｋｂ（Ｂ型），４０例（５３．３％）患者ＲＦＬＰ带型为７．０－６．０－５．４ｋｂ（Ｃ型），仅一例（１．３％）带型为７．０－６．４－５．４ｋｂ（Ｄ型），即带有表示Ｃ４Ａ基因缺失的６．４ｋｂ片段。正常对照组中ＲＦＬＰ带型仅检出Ａ、Ｂ、Ｃ三型，与患者组在分布上无统计学差异。Ｃ４表型分析结果发现，患者中Ｃ４ＡＱ０者为２２例（４３％），正常对照中Ｃ４ＡＱ０者为１０例（１７．５％），计算ＲＲ值＝３．５６，χ２＝８．４６，Ｐ＜０．０１。上述结果表明，Ｃ４Ａ蛋白质缺失与ＳＬＥ易感性密切相关，但在湖北人群中Ｃ４Ａ蛋白质缺失的主要原因可能不是由于Ｃ４Ａ基因的缺失所致。     

干细胞移植治疗缺血性脑损伤的策略

缺血性脑损伤在临床上占有重要的地位，干细胞移植是目前有可能实现对缺血坏死区结构与功能重建的方法之一。当前干细胞治疗缺血性脑损伤的主要策略有：激活脑内成体神经干细胞自身修复机制；外源干细胞脑内移植；基因修饰的干细胞脑内移植。作用机制上，重建神经环路并不总是功能恢复的首要条件。     

自体骨髓源神经干细胞移植加矫形手术治疗脑性瘫痪上肢重度痉挛性畸形1例:2年随访

目的:观察应用矫形手术,自体骨髓源神经干细胞移植并正中神经部分切断方法治疗重型脑性瘫痪上肢痉挛患儿,探讨其在降低肌张力的同时,提高肌力和手指功能的修复作用。方法:选择广东省第二人民医院2002-02确诊为重型脑性瘫痪后遗右上肢肘、腕关节严重痉挛和屈曲挛缩畸形的患者1例。男,12岁,病程12年。采用韦氏儿童智力量表评定患儿智商为55分(90～109分为平常;80～89分为低于平常;70～79分为边界;<69分为智力缺陷),应用巴氏指数(共10项,每项10分,评分越高,日常生活自理能力越强)评估患儿残疾自理能力45分,左上肢可支撑协助爬行。右上肢肌张力Ⅲ级,肘关节屈曲挛缩45°,腕关节屈曲挛缩105°,右腕骨质轻度畸形,右手不能持匙和分指。双下肢肌张力Ⅲ级,髋、膝、距小腿(踝)关节均有屈曲挛缩。对此患儿的治疗方案监护人知情同意。采用矫形手术:①上肢矫形手术:行屈腕屈指肌起点下移和尺侧屈腕肌腱背移;②术后2个月行右上肢正中神经部分切断和自体骨髓源神经干细胞移植。自患儿右髂后上棘取骨髓12mL,用梯度密度离心法获取骨髓基质细胞,接种于含维甲酸和碱性成纤维细胞生长因子的神经干细胞培养基中,连续培养11d后移植。取右腋窝纵切口,显露正中神经后切开神经外膜,将正中神经在神经外膜内切断一半,缝合外膜将培养好的干细胞注入外膜内,周围用凝胶海绵包埋,滴2mL神经节苷脂于凝胶海绵上,逐层缝合切口。治疗后采用改良Ashworth评定标准评定肌张力(0级:无肌张力增加;Ⅰ级:肌张力轻度增加;Ⅱ级:肌张力较明显增加;Ⅲ级:肌张力严重增高;Ⅳ级:强直)。结果:①上肢矫形手术2个月后复查右上肢,屈肘屈腕挛缩好转,但屈肘屈腕肌痉挛状态无改善,右手指随意伸屈功能无好转。②由于屈肘屈腕挛缩有复发趋向,因此决定行右上肢正中神经部分切断和自体骨髓源神经干细胞移植。③移植术后1周、2周、1个月时检查右上肢屈肘、屈腕、屈指肌张力低于正常,右手腕屈曲和手指屈曲肌力下降到Ⅱ级,正中神经支配区域感觉迟钝。但肘关节屈曲挛缩和腕关节屈曲挛缩均消失,右手也不能持匙,不能分指,手指不能夹纸。3个月后右上肢屈肘、屈腕、屈指肌张力,以及右手腕的屈曲和抓握肌力开始恢复。18个月后右手腕和手指屈曲肌力达到Ⅳ级,可持匙进食,可夹纸,肌张力和感觉基本正常,患儿可扶单拐行走,右上肢屈肌痉挛状态未见复发,2年后复查右手腕指屈伸功能仍在改善中。结论:本例脑性瘫痪患者所致肘、腕关节严重痉挛和屈曲挛缩,行正中神经部分切断和自体骨髓源神经干细胞移植后,不但降低了屈肌痉挛的状态,而且改善了正中神经部分切断后腕手指屈曲无力和感觉异常。说明此方法不仅有利于周围神经横断缺损感觉运动功能的修复,而且对肌痉挛状态具有较好的作用。     

神经元细胞膜脂筏结构原子力显微镜研究

目的测定小鼠神经元细胞膜脂筏纳米尺度三维结构。方法应用原子力显微镜(AFM)测定纯化的小鼠神经元膜脂筏。结果可见神经细胞单个脂筏的凹陷盘状圆形三维结构，周围高。边缘不完整，中间凹陷，直径在117～120nm左右。结论神经细胞膜脂筏结构为直径100nm左右的扁圆形中间凹陷结构。AFM可以在纳米水平对细胞器进行三维结构测定。     

不同年龄大鼠组织端粒酶活性变化的研究

目的 了解不同组织端粒酶活性随年龄变化的规律，为治疗性克隆核供体细胞的选择提供依据。方法 采用PCR-ELISA法检测不同年龄SD大鼠皮肤、肌肉、骨髓、脑和睾丸组织的端粒酶活性。结果 (1)随着年龄的增长，各组织端粒酶活性均呈下降趋势；(2)新生皮肤、肌肉和脑组织表达端粒酶活性，一月后则不再表达端粒酶活性；(3)一月至二年骨髓和睾丸组织均保持较高端粒酶活性。结论 端粒酶活性表达程度与不同组织有关，骨髓和睾丸组织能维持较高端粒酶活性；骨髓组织中持续表达端粒酶活性的细胞可能足一种较好的核供体细胞。     

犬脑火器伤病理切片的原子力显微镜研究

目的探讨高温高湿环境下犬火器伤脑组织在纳米水平病理改变，建立原子力显微镜(AFM)组织切片测定实验技术方法。方法应用AFM测定犬脑组织火器伤切片。结果可见神经细胞轴突断裂，神经细胞膜完整性丧失，周边锯齿状改变，神经胶质细胞肿胀或崩解明显。结论AFM可以在纳米尺度对病理切片进行量化观测，是临床病理诊断的新方法。     

胚脑来源与骨髓来源神经干细胞的比较:应用原子力显微镜的观察

目的:应用原子力显微镜(atomicforcemicroscopy,AFM)观测胚鼠前脑来源的神经干细胞及成鼠骨髓诱导来源的神经干细胞表面的形貌结构,并比较两者的异同。方法:实验于2003-09/2004-09在南方医科大学珠江医院全军神经医学研究所完成。分别取怀孕10.5～14.5d胚鼠行前脑来源神经干细胞和成鼠骨髓来源神经干细胞培养,神经干细胞培养基、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF,20μg/L)维甲酸(300μg/L)持续诱导培养10d,以平板克隆法测定两种来源干细胞的克隆形成率,光学显微镜和原子力显微镜分别进行观测。结果:光学显微镜下两种来源的神经干细胞均表现为大圆形细胞,直径6～12μm,细胞形貌相似;但神经来源神经干细胞显示更强的增殖能力,其细胞克隆形成率显著大于骨髓来源神经干细胞(χ2=4.444,P<0.05);原子力显微镜下可观测到神经来源干细胞表面有较多颗粒样隆起,其表面粗糙,平均粗糙度为(18.5±2.0)nm,均方根粗糙度为(20.7±2.5)nm,而骨髓来源神经干细胞表面相对光滑,其表面平均粗糙度为(10.2±1.2)nm,均方根粗糙度为(12.9±1.3)nm,两者经t检验统计分析差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:神经来源神经干细胞较骨髓来源神经干细胞表面有更多颗粒样隆起,表面更粗糙,可能与其有更强的增殖能力有关。