补肾方辅助骨髓干细胞移植治疗DMD的实验研究

目的:观察补肾方辅助骨髓干细胞移植治疗mdx小鼠的效果。方法:体外培养正常C57BL/6小鼠骨髓细胞对放疗后mdx小鼠尾静脉移植,用补肾方水提液灌胃实验鼠,观察实验小鼠存活率和移植物抗宿主病(GVHD)症状;移植后4个月/8个月取小鼠骨骼肌以HE染色观察病理状况,以免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白(DYS蛋白)表达。结果:补肾方能不同程度降低mdx鼠核中心移位比例和提高DYS蛋白表达量;同时能明显减轻GVHD症状。结论:补肾方能提高骨髓干细胞移植治疗mdx小鼠的效果。     

血管紧张素转换酶基因多态性和酗酒与缺血性脑卒中的关联

目的探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性和酗酒与缺血性脑卒中(IS)发病风险的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)和变性高效液相色谱(DHPLC)技术筛查了454例IS患者(病例组)和334例非IS患者(对照组)的ACE基因的多态分布,采用非条件Logistic回归模型分析基因型、酗酒情况与缺血性脑卒中患病的关系。结果与对照组相比,酗酒群体的DD基因型和D等位基因的频率显著性升高(P<0.05),患缺血性脑卒中的相对危险度分别为8.130和2.488;而携带有Ⅱ基因型的酗酒群体患缺血性脑卒中的相对危险度则为0.389。相反,非酗酒IS患者的ACE基因的各基因型和等位基因频率的分布与对照组相比,均无显著性差异(P>0.10)。结论携带有D等位基因的酗酒群体容易患缺血性脑卒中,但携带有Ⅰ等位基因的酗酒群体不容易患缺血性脑卒中,ACE基因与酗酒在缺血性脑卒中的发病过程中存在协同作用。     

骨髓干细胞移植后mdx鼠腓肠肌病理及Dystrophin的表达变化

【目的】研究骨髓干细胞移植后mdx鼠腓肠肌组织病理变化及dystrophin的动态表达变化。【方法】7～9周mdx鼠20只平均分为4组,放疗后移植1.2×107个/只同种异基因全骨髓干细胞,于移植后4周、8周、12周及16周应用HE染色观察细胞形态及核中心移位(CNF),免疫组化及Westernblot方法检测dystrophin表达变化,C57鼠和未治疗mdx鼠各5只作阳性和阴性对照。【结果】C57鼠腓肠肌横切面可见肌细胞大小形态基本一致,无核中移现象。各细胞移植治疗组和对照组mdx鼠均有大量的炎细胞浸润,核中心移位明显。未治疗mdx鼠CNF最高,可达70%左右,移植后4周、12周和16周,CNF比例分别为55%、50%和44%。免疫荧光结果C57鼠肌膜呈完整的网状绿色荧光,mdx鼠肌膜基本未见绿色荧光;移植后4周肌膜dystrophin阳性纤维数大约占细胞总数的1%,随时间延长表达渐渐增多,8周、12周和16周时阳性细胞数分别占细胞总数的5%、10%和15%。Westernblot结果mdx鼠无dystrophin的表达,野生型C57鼠表达量最多,移植后4周mdx鼠仅见微弱表达,随时间延长表达量渐增,移植后16周表达量较移植8周明显增加。【结论】骨髓干细胞移植后mdx鼠腓肠肌CNF随移植时间延长逐渐减少,dystrophin的表达随时间延长增多,提示骨髓干细胞移植后长久持续参与受损骨骼肌的修复与再生。     

第20届国际肌萎缩侧索硬化-运动神经元病会议纪要

第20届国际肌萎缩侧索硬化-运动神经元病(ALS/MND)会议于2009年12月8-10日在德国柏林召开,注册代表702人.会议分18个专题,交流论文l00篇,壁报交流291篇.中国内地参会代表19人,壁报21篇,尤其可喜的是中国医学科学院北京协和医院神经内科崔丽英主任和华西医院神经内科商慧芳教授2位中国ALS协作组的专家首次代表各自单位在大会发言,充分展示了中国学者ALS/MND研究水平.     

康复锻炼对假肥大型进行性肌营养不良患者肺功能的影响

过去,对于假肥大型进行性肌营养不良（duchenne muscular dystrophy,DMD）患者的康复锻炼方案,主要是适量的体育锻炼和按摩、牵拉肌腱,及至该病发展到丧失行走能力后,康复方法就只有肌肉按摩,至于呼吸肌肉的训练,一直都未注意到和倡议过,而呼吸衰竭又恰恰是该病致死的主要原因。在医学技术飞速发展的今天,康复锻炼的目的不仅仅是改善DMD患者的机体功能和生活质量,更要尽可能延长其寿命。干细胞移植术的出现,为治愈DMD带来了曙光。作为临床医务工作者如何指导DMD患者有效的进行康复锻炼,以维持尽可能好的机体功能,尤其是尽可能良好的呼吸肌肉功能和肺功能,以使患者有足够长的时间等待新治疗技术的成熟和推广得以接受治疗。本文拟对我们掌握的1例通过长期康复锻炼而肺功能维持相对较好的典型DMD患者和几乎不进行康复锻炼的DMD患者进行比较报道,就康复锻炼对DMD患者肺功能的影响及DMD患者如何进行康复锻炼做一探讨。     

家族性肌萎缩侧索硬化症转基因鼠的繁殖和鉴定

目的 建立家族性肌萎缩侧索硬化症（FALS）转基因模型鼠的繁育方法,并对其子代鼠进行基因鉴定。方法 （1）以6只B6SJLSOD1G93～＋半合子雄鼠与6只B6SJLFIJ＋／＋雌鼠（1：1）交配;（2）由鼠尾血提取基因组DNA,PCR扩增hmSOD1基因的片段,电泳后观察结果;（3）对PCR产物进行纯化测序,并通过BLAST验证。结果 6对种鼠交配产鼠仔53只,存活率为98％（52／53）;G93AhmSODl阳性鼠约占44．2％（23／52）;PCR扩增产物分别为内对照（IL-2）：324bp;Tg（hmSOD1）：236bp;测序证实PCR产物的基因序列和hmSODl基因片段中的序列一致．并存在G93A突变。结论 B6SJL-Tg（SOD1-G93A）1Gur／J雄鼠与B6SJLFI／J雌鼠配种能成功繁育出Tg（hmSOD1）阳性的ALS半合子子代鼠：本实验的PCR法能准确鉴定hmSOD1基因阳性鼠,并证实该转人的基因按近似孟德尔方式遗传,为ALS实验研究奠定了基础。     

骨髓间充质干细胞在mdx鼠体内分化为骨骼肌细胞及其dystrophin/utrophin蛋白的表达

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植入放疗的mdx鼠后dystrophin/utrophin的表达变化.方法 将BrdU标记的大鼠P5代MSCs移植入放疗处理的mdx鼠,分别于移植后4、8、12和16周断头处死取其腓肠肌,冰冻切片应用免疫荧光、RT-PCR及Western blotting检测BrdU/dystrophin及utrophin的表达变化.另分别取5只正常C57BL/6鼠和mdx鼠作阳性和阴性对照.结果 经γ射线放疗预处理的mdx鼠,在尾静脉移植MSCs后4周时肌纤维抗肌萎缩蛋白的表达少于1%,随移植时间延长增加,16周时为15%,dystrophin/BrdU激光共聚焦免疫荧光显示肌细胞核中移现象较同龄mdx鼠对照组减少,边居增多.RT-PCR及Western blotting检测到dystrophin表达也随移植时间延长增多.移植后mdx鼠肌细胞膜utrophin表达较对照组mdx鼠减少,RT-PCR结果显示mRNA在移植前后没有明显改变.结论 MSCs移植后mdx鼠的肌细胞膜有dystrophin表达,激光共聚焦技术表明dystrophin阳性肌纤维部分来自于移植的MSCs.utrophin在mdx鼠肌膜上表达上调,MSCs移植后dystrophin表达对utrophin有一定的抑制作用,两者存在互补关系.     

右侧眶上裂综合征1例报告

眶上裂综合征(superior orbital fissure syndrome,SOFS),又称为Rochon-Duvigneaud综合征,他是1组以动眼神经、滑车神经、外展神经及三叉神经眼支受损症状为特征的临床症状群.Hirschfeld于1858年首先描述了该症状群,但是直到1896年Rochon-Duvigneaud[1]才把4例梅毒患者身上相似的症状群作为一个综合征正式进行报道,1921年Collier[2]报道该综合征可自行缓解,亚急性起病,并将该综合征归因于眶上裂炎症, Lakke[3]于1962年对该综合征进行了完整定义.     

脑源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成神经元样细胞的作用及其对诱导后的神经元样细胞保护作用,为治疗神经系统疾病提供更优良的细胞。方法 体外培养MSCs至第5代后,分别用BDNF、β-巯基乙醇(β-ME)诱导MSCs,诱导后的第1、3和6小时计算两组神经元样细胞数,对各时间点两组神经元样细胞阳性率进行了比较;诱导后行神经细胞标记抗体的免疫细胞化学、RT-PCR及蛋白质印迹鉴定。结果 两组诱导剂诱导后的细胞均呈神经元样细胞的形态;BDNF组诱导分化后细胞的存活时间远较β-ME组长;BDNF组在诱导后6h近于诱导高峰,而β-ME在诱导2h即达高峰,但随后神经元样细胞渐死亡。免疫细胞化学结果显示在两组诱导后细胞的巢蛋白(Nestin)、神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经丝蛋白(NF)表达均呈阳性,而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达呈阴性;RT-PCR显示NSE、NFL,MAP-2的mRNA表达阳性,GFAP有较弱的表达;蛋白质印迹可见两组诱导剂诱导的细胞均表达神经元的特异性标记抗体NSE。结论 BDNF能单独诱导MSCs分化形成神经元样细胞,而且分化后细胞的存活时间长,有望用于治疗脑缺血、神经变性等疾病。     

重症肌无力患者淋巴细胞糖皮质激素受体与激素疗效依赖性的关系

目的　探讨重症肌无力患者外周血淋巴细胞糖皮质激素受体（ Ｇ Ｒ） 水平与糖皮质激素治疗敏感性的依赖关系。方法　采用放射配基受体结合分析法检测淋巴细胞糖皮质激素受体含量,同时应用相对临床记分法观察激素治疗反应,相对临床记分＞ ５０ ％ 为有效。结果　重症肌无力患者的淋巴细胞糖皮质激素受体较正常人显著增高,经激素治疗后下降至正常或正常以下,且激素治疗的近期疗效与 Ｇ Ｒ含量呈正相关, Ｇ Ｒ含量高者治疗敏感的百分率高,近期疗效好,反之则差。结论　 Ｇ Ｒ 含量的变化与淋巴细胞亚群异常分布有关。 Ｇ Ｒ 含量的不同可能是临床上激素疗效不尽相同的原因之一,所以,保持一定水平的 Ｇ Ｒ 含量对治疗有益。