衰老1型星形胶质细胞的Aβ1-40及相关分子表达变化

目的:通过体外建立1型星形胶质细胞(T1A)衰老模型,研究衰老T1A中β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)及相关蛋白的表达变化。方法:采用振荡培养与差速贴壁法分离纯化新生SD(Sprague-Dawley)大鼠的T1A,免疫细胞化学标记检测体外培养21d(21DIV)及90d(90DIV)的T1A中β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)的表达;以WesternBlot检测微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)、caspase-3及Bcl-2的表达水平。结果:体外长程培养的T1A中Aβ1-40蛋白表达增加,同时90DIV组细胞中LC3II及活化的caspase-3表达水平提高,Bcl-2表达水平降低。结论:研究结果提示衰老的T1A表达Aβ,细胞内自噬及凋亡活性增强,在年龄相关的神经变性过程中,T1A的衰老可促进神经元的损伤,衰老T1A表达的Aβ很可能是Alzheimer病老年斑的重要来源。     

巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在O-2A谱系细胞中的表达

目的 观察O-2A（oligodentrocyte-type-2 astrocytes）谱系细胞是否是表达神经干细胞的标志物。方法 取新生大鼠脑皮质体外培养纯化的O-2A祖细胞、少突胶质细胞和2型星形胶质细胞,应用激光共聚焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白（nestin）和阶段特异性胚胎抗原-1（SSEA-1）的表达。结果 nestin在O-2A祖细胞和2型星形胶质细胞中表达,在少突胶质细胞中不表达;SSEA-1仅在2型星形胶质细胞中表达。结论 nestin和SSEA-1在O-2A谱系细胞中的表达存在差异,可能具有神经干细胞的特征。     

富集自体骨髓间质干细胞复合羟基磷灰石／磷酸三钙植骨材料在脊柱融合中的应用

目的:探索通过自体骨髓富集的间质干细胞复合羟基磷灰石/磷酸三钙作为植骨材料进行脊柱融合的新方法。方法:①观察对象:选择2005-01/2006-02建湖县人民医院骨科收治的胸腰椎骨折均采用后路椎弓根钉系统复位及固定患者48例。②实验分组:根据植骨融合材料不同随机分为2组,干细胞 复合材料组24例,男13例,女11例;年龄25～49岁。自体髂骨移植组24例,男15例,女9例;年龄26～50岁。③实验干预:采自体骨髓通过密度梯度离心得到富集的间质干细胞悬液与羟基磷灰石磷酸三钙复合2h后作为植骨材料。干细胞 复合材料组采用骨髓间质干细胞复合羟基磷灰石磷酸三钙移植;自体髂骨移植组采用自体髂骨移植。④实验评估:对所有患者脊柱融合情况、临床疗效、伤椎复位后高度丢失等进行比较分析,评定脊柱融合效果。结果:术后随访12个月,48例患者全部进入结果分析。①骨髓富集的有效性:富集前后骨髓间质细胞浓度达到8倍。②临床疗效:干细胞 复合材料组所有病例取髓处疼痛术后1周消失,均未发生感染。自体髂骨移植组术后3个月取骨处仍有疼痛。所有病例无感染和内固定松动断裂等并发症。两组术后12个月LBOS评分优良率干细胞 复合材料组71%(17/24),自体髂骨移植组79%(19/24)。③脊柱融合情况:术后随访6个月以上的患者X射线、检查均示有良好的脊柱融合,两组在术后3个CT月移植物密度降低并可见双侧薄层融合块,术后6个月双侧可见整块新生骨或单侧大块新生骨。按Lenke字母分级法融合分级,两组均无C、级融合。④Cobb角测量结果:伤椎复位后高度丢失干细胞 复合材料组平均为2.38°D,自体髂骨移植组平均为2.42°。结论:通过自体骨髓富集的间质干细胞复合羟基磷灰石磷酸三钙应用于胸腰椎骨折后外侧融合可取得与自体髂骨移植同等的临床疗效,是一种安全可靠,简便有效的植骨替代材料。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂对大鼠脑缺血模型DNA损伤的实验研究

目的 研究caspase-3抑制剂Ac-DEVD—CMK及calpain抑制剂ALLN干预治疗对大鼠局灶性脑缺血／再灌注模型的神经保护作用。方法 经左侧侧脑室注射DEVD或／和ALLN溶剂二甲基亚田(DMS0)后，制作大鼠左侧MCA缺血再灌注模型；缺血2h再灌注24h进行TTC染色观察梗死灶的形成情况；并分别于缺血2h再灌注24h或48h检油鼠脑中单、双链DNA断裂情况。结果 溶剂DMS0预处理组的各项指标与MCAO模型组无明显差异；DEVD或ALLN治疗后缺血仍脑中Klenow及TUNEL阳性细胞数均明显减少，二合用作用最强。结论Caspase-3与calpain均在缺血性脑损伤中起重要作用，对此进行治疗干预具有潜在的临床应用价值。     

大鼠脊髓损伤模型中硫氧还蛋白还原酶的表达及其作用

目的：探讨大鼠脊髓损伤模型中硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TR）的动态表达及其作用。方法：成年Wister大鼠36只，随机分为6组，每组6只。建立大鼠脊髓压迫伤模型，以原位杂交法测定脊髓损伤后不同时间TR的动态变化。结果：脊髓压迫伤后2hTR mRNA表达开始增高，6—12h达到高峰，24h开始下降，48h降到正常水平。结论：脊髓损伤后TR合成增加，通过抗氧化、清除自由基及抑制细胞凋亡，对脊髓损伤有保护作用。     

少突胶质细胞与2型星形胶质细胞中S-100 β表达差异性的研究

目的研究少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)与2型星形胶质细胞(type-2astrocyte,T2A)中S-100的表达。方法根据各种胶质细胞的生长时间的差异及细胞的黏附性不同,通过机械振荡法和差速贴壁法获得纯化的O-2A祖细胞;免疫细胞化学染色法观察S-100β在O-2A谱系细胞中的表达情况。结果O-2A祖细胞在含有PDGF、bFGF的培养液中培养3d,分化成T2A,培养5d分化成OL;OL中S-100β免疫反应呈现阳性,T2A中不表达S-100β。结论O-2A谱系细胞中的S-100β的表达与O-2A祖细胞向OL分化有关。     

少突胶质细胞发生过程中S-100β表达的变化

目的:探讨少突胶质细胞发生过程中3个主要不同阶段S-100β的表达.方法:采用振荡法和差速贴壁法,获得纯化的O-2A祖细胞;双重免疫荧光细胞化学显色法观察S-100β在少突胶质细胞发生过程中的表达情况.结果:O-2A祖细胞在含有碱性成纤维细胞因子(10 ng/ml)和血小板源性生长因子(10 ng/ml)培养液中培养48 h,不表达S-100β;换成含有3'碘甲状腺原氨酸(30 ng/ml)培养液继续培养24 h,S-100β免疫反应呈现阳性.前少突胶质细胞、少突胶质细胞中表达S-100β.结论:少突胶质细胞发生过程中S-100β的表达始于O-2A祖细胞过渡到前少突胶质细胞之间,可能与其从多潜能分化阶段过渡到形态学上的分化阶段有关.     

白三烯受体拮抗剂对哮喘模型肺组织VEGF表达水平的影响

目的　探讨白三烯受体拮抗剂对哮喘模型肺组织血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响及其对哮喘模型气道重塑的预防和治疗作用 ,提供哮喘防治新途径的可靠实验依据。方法　 10 8只健康雄性豚鼠随机分为 3组 :哮喘发作组、治疗组、对照组 ,每组 36只。以卵蛋白 (OVA)致敏和激发建立豚鼠哮喘模型。肺组织病理切片以SP法免疫组化标记VEGF ,图像分析VEGF表达水平。结果　OVA激发后 4周 ,哮喘发作组肺组织VEGF表达水平显著高于治疗组及对照组 (P <0 0 5 ) ,白三烯受体拮抗剂治疗哮喘使肺组织VEGF的表达水平降低。结论　白三烯受体拮抗剂可以降低哮喘豚鼠肺组织VEGF表达水平 ,从而减少血管增生 ,延缓哮喘气道重塑的发生。     

Tet-off/Tet-on基因工程鼠中脑肿瘤干细胞的克隆与鉴定*

目的:从Tet-off/Tet-on 转基因脑肿瘤小鼠模型中分离鉴定脑肿瘤干细胞,为进一步研究其是否起源于神经干细胞奠定基础。方法:从出现临床症状的转基因小鼠天幕区肉眼可见的肿瘤组织中取材,一部分做冰冻切片;另一部分制成单细胞悬液,培养于含生长因子的无血清培养基和含血清培养基。在光镜下观察常规病理,用相差显微镜和电镜分别观察细胞形态及其超微结构,用流式细胞仪检测Hoechst33342 阴性的SP细胞,以及其染色体倍体和细胞周期,免疫荧光染色检测细胞球体及其分化细胞中的神经巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、glialfibrillaryacidicprotein（GFAP）表达情况。结果:肿瘤位置均位于小脑天幕上下约2～3mm的松果体区域内,常规病理诊断为髓母细胞瘤。肿瘤细胞在无血清培养条件下,呈悬浮的球状生长,在含血清培养条件下贴壁分化成瘤性胶质细胞、神经元。电镜见到了核质比高、细胞器不发达、具干细胞特征的细胞。流式细胞仪检测肿瘤细胞球中的SP（sidepopulation）细胞为17.27% ,异倍体细胞为26.77% 。免疫荧光染色发现细胞球中大部分细胞表达干细胞标志物Nestin,少数细胞表达分化标志物GFAP和NSE 。与之相反,贴壁细胞大部分表达分化标志物微管相关蛋白2（MAP2）或胶质纤维酸性蛋白（GFAP）,同时共表达干细胞标志物Nestin。结论:Tet-off/Tet-on 转基因小鼠脑肿瘤组织中存在具有自我更新和多向分化潜能的脑肿瘤干细胞。      

垂体上动脉显微外科解剖学研究

目的 了解垂体上动脉的起始、行程、分布和变异,为鞍区肿瘤手术时保护垂体上动脉以有变垂体上动脉瘤与床突旁其他类型动脉瘤区别提供依据。方法 ５０具成人尸体头颅垂体上动脉标本,在解剖显微镜下解剖和分析。结果 垂体上动脉为一组血管丛,分１～４支,起始于颈内动脉则,平均直径０．２２ｍｍ。起始部距眼动脉起始部小于５ｍｍ者占８２％,二种分支类型：粗大支型占４５％,呈烟台式供应垂体柄、视神经和视交叉,平均直径为０