人脐静脉来源间充质干细胞向神经样细胞分化的体外分离扩增实验

目的:探讨人脐静脉来源的间充质干细胞的体外分离、纯化、扩增及向神经元样细胞的定向分化,为间充质干细胞治疗神经系统疾病提供实验依据。方法:实验于2004-06/2005-03在华中科技大学同济医学院附属协和医院血研所完成。无菌条件下取正常人脐静脉,10g/L胶原酶Ⅱ消化脐静脉内皮细胞,以IM DM作为培养基进行培养和纯化细胞,检测其生物学特点;用全反式维甲酸诱导,倒置相差显微镜观察诱导前后细胞的形态;免疫组织化学、免疫荧光化学和W estern blot方法检测分化前后细胞上的神经丝蛋白和胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:脐静脉来源的细胞呈纤维样贴壁生长,具有骨髓间充质干细胞的生物学特征;诱导分化后,大部分间充质干细胞呈现典型神经样细胞形态,出现神经丝蛋白和胶质纤维酸性蛋白表达。结论:人脐静脉可以分离培养出间充质干细胞,并可以在体外定向分化为神经样细胞,为神经系统疾病的治疗提供细胞来源。     

人脂肪组织分离培养基质干细胞的方法及其表型鉴定

目的:分离培养人脂肪基质干细胞,鉴定其表型。方法:实验于2005-03/2005-12在华中科技大学同济医学院血研所实验室完成。脂肪组织取自华中科技大学同济医学院附属协和医院普通外科阑尾炎及腹股沟斜疝的14例手术患者,排除了冠心病、高血压病及糖尿病等。手术前均与本人谈话并征得其同意获取脂肪组织进行实验。分离人脂肪组织,胶原酶消化后制备细胞悬液并培养,消化传代以纯化细胞。传代的脂肪基质干细胞进行细胞生长曲线绘制,流式细胞术及免疫荧光法检测其表型。结果:14份标本均成功培养出脂肪基质干细胞并生长良好,平均传至20～25代。①原代细胞培养72h后可见细胞贴壁,5d后可见细胞呈纺锤形、多角形改变,9d后细胞生长明显增加,排列密集并呈涡旋状生长,随着培养时间的延长,梭形细胞逐渐占据优势。到第12天后可见细胞铺满瓶底80%。传代后细胞增殖速度明显加快,于第3天开始数量明显增多,五六天后细胞即已长满培养瓶底,融合成片状,细胞排列更加整齐有序。多次传代后细胞呈更均匀有序的分布。②脂肪基质干细胞倍增时间约为48h。③第5代的脂肪基质干细胞细胞表型,呈CD31-,CD34-,CD45-,HLA-DR-,CD29 ,CD105 。④免疫荧光法鉴定脂肪基质干细胞表达CD13和CD44。结论:本实验成功从人脂肪组织中分离培养出基质干细胞,通过流式细胞术和免疫荧光检测,培养后的细胞表达CD13、CD29、CD44、CD105,而不表达CD31、CD34、CD45、HLA-DR。     

TKIs联合自体造血干细胞移植治疗成人费成染色体阳性急性淋巴细胞白血病的Meta分析

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)联合自体造血干细胞移植治疗成人费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)的效果。方法通过计算机检索PubMed、Embase、Cochrane library、CNKI、万方、维普等数据库,检索时间均从建库至2019年6月30日,检索TKIs联合自体与异基因造血干细胞移植治疗成人Ph+ALL的临床对照试验。由2位研究者严格按照纳入标准与排除标准独立筛选相关文献、提取资料和评价纳入研究的方法学质量,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果全面检索得到892篇相关文献。最终纳入5篇文献,总共872例患者,其中自体造血干细胞移植(auto-HSCT)组136例,异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)组736例。Meta分析结果显示,自体组与异基因组相比,二者总体生存率(OR=1.14,95%CI:0.77～1.70,P=0.52)、无病生存率(OR=1.35,95%CI:0.56～3.28,P=0.50)、非复发死亡率(OR=0.42,95%CI:0.00～60.76,P=0.73),差异均无统计学意义。结论对于不能耐受异基因造血干细胞移植的Ph+ALL患者,TKIs联合自体移植可能使患者获益。     

18例多发性骨髓瘤行自体造血干细胞移植临床疗效观察

目的探讨自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)治疗多发性骨髓瘤(MM)的疗效。方法该院自2006年12月至2011年10月,对18例MM患者,采用化疗联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员造血干细胞,以口服或静脉注射美法仑预处理后行APBSCT治疗,并评价其疗效。结果 17例患者移植成功,1例植入失败。移植后随访3～60个月,13例获得完全缓解(CR),6例CR后复发,复发患者中1例经万珂治疗后再次获得CR。1例患者行2次移植达到非常好的部分缓解(VGPR)。结论 MM患者行APBSCT安全有效且耐受性好。移植后维持治疗对于延长无事件生存期(EFS)及总生存期(OS)具有重要意义。     

异基因造血干细胞移植后重度肠道急性移植物抗宿主病的临床分析

目的探讨异基因造血干细胞移植（Allo—HSCT）后重症肠道急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生情况及预后。方法2例慢性粒细胞白血病（慢性期）患者接受异基因造血干细胞移植,预处理方案为BU／CY、GIAC方案,以CsA、MMF、ATG加短程MTX预防aGVHD。结果2例分别于移植后21、40d并发重度肠炎,诊断为肠道aGVHD,予以糖皮质激素为主的综合治疗包括FK506、抗CD25单克隆抗体后缓解。结论重度肠道aGVHD是异基因造血干细胞移植后常见的最严重并发症之一,有效治疗直接关系到疾病的预后。     

同胞全相合异基因造血干细胞移植治疗年轻多发性骨髓瘤患者的临床分析

目的：探讨同胞全相合异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）在治疗年轻多发性骨髓瘤（MM）患者中的疗效及安全性。方法：收集2013年6月至2021年9月于重庆医科大学附属第一医院血液科行同胞全相合allo-HSCT的8例年轻MM患者（中位年龄46岁）的相关资料,并进行生存和预后分析。结果：8例患者均成功植活,移植后7例患者可行疗效评估。中位随访时间为35.2(2.5-84.70)个月。移植前达完全缓解（CR）者为2例,移植后达CR者为6例;2例发生急性GVHD,1例发生广泛型慢性GVHD。100 d内非复发死亡1例,8例患者中1年和2年无病生存分别为6例和5例,截至随访终点,生存超过2年的患者均全部存活,其中1例至今已无病生存84个月。结论：随着新药的逐渐发展,同胞全相合allo-HSCT对年轻MM患者可能是一种可治愈的方法。     

老年急性髓系白血病患者临床特征与预后分析

目的 探讨老年急性髓系白血病（AML）的基因突变及预后因素。方法 选取医院血液科2015年1月至2020年12月收治的年龄≥60岁的AML患者183例,将其中86例接受化学药物治疗（简称化疗）的患者分为标准化疗组（12例）和低强度化疗组（74例）;采用实时荧光定量聚合酶链式反应和DNA测序技术对133例患者行基因突变检测。分析患者基因突变情况及预后影响因素。结果 患者的基因突变频率为88.72%(118/133),突变频率排名前5的基因分别为WT1(60.90%)、NPM1(22.56%)、IDH2(12.78%)、DNMT3A(10.53%)、FLT3-ITD(9.77%)。多（≥2个）基因突变频率为46.62%(62/133),常见的共存突变基因为WT1+NPM1(16.54%)、WT1+IDH2(9.02%)、WT1+FLT3-ITD(8.27%)、WT1+DNMT3A(7.52%)。WT1+FLT3-ITD及WT1+DNMT3A突变患者的中位生存期均显著短于WT1+NPM1突变患者（P <0.05）。低强度化疗组的完全缓解（CR）率和客观缓解（OR）率分别为49.02%和...     

内皮祖细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的实验研究

目的探讨大鼠内皮祖细胞(EPCs)移植于梗死心肌的增殖分化情况及对心功能的影响。方法分离培养大鼠EPCs,免疫荧光法检测其CD34+、CD133+和Flk-1+的表达。将SD大鼠冠状动脉左前降支结扎制造急性心肌梗死模型后,在梗死心肌处植入DAPI标记的EPCs(实验组)或M 199培养液(对照组)。移植后1周及4周,心脏超声检查心功能,并对梗死区心肌组织进行移植细胞形态学检查及毛细血管密度测定,逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附测定梗死周边区血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果培养获得EPCs,其表型为CD34+、CD133+和Flk-1+。植入梗死区的EPCs可以分化为血管内皮细胞,实验组梗死心肌处血管密度较对照组明显增高(P<0.01),并且VEGF基因及蛋白表达在移植后1周均较对照组明显增高(P<0.01)。移植后4周,实验组大鼠左心室射血分数及左心室短轴缩短率较对照组明显提高(P<0.01);而移植后1周,两组大鼠超声检测心功能各指标变化不明显。结论同种异体EPCs移植到梗死心肌大鼠缺血心肌能分化为毛细血管内皮细胞,促进梗死后心肌血管新生,改善心功能。     

IEAC或CEAC预处理方案用于淋巴瘤自体造血干细胞移植的疗效与安全性比较

目的 评价IEAC或CEAC方案预处理在自体造血干细胞移植（ASCT）治疗淋巴瘤的疗效与安全性。方法 回顾性分析了2013年~2018年在我院以IEAC方案（去甲氧柔红霉素+依托泊苷+阿糖胞苷+环磷酰胺）和CEAC方案（洛莫司汀+依托泊苷+阿糖胞苷+环磷酰胺）预处理后行ASCT的106例淋巴瘤患者资料,其中IEAC组43例,CEAC组63例患者,两组患者的临床特征无显著差异。通过对两组的造血重建时间、不良反应以及生存情况进行比较分析来评价预处理方案的疗效与安全性。此外,对可能影响生存的因素进行了单因素以及多因素的分析。结果 104例患者移植后造血重建,2例患者出现治疗相关死亡,两组的造血重建时间无显著差异。移植后中位随访27.4月（4.3~74.3月）,患者的5年无进展生存率和总生存率分别为72.9%和81.9%,主要的2级以上的不良反应为感染、口腔黏膜炎、恶心呕吐、肝功能损害、心脏毒性、低钾血症以及腹泻,两组的生存和不良反应无显著差异。T细胞淋巴瘤和移植前未获得完全缓解是无进展生存率（P值分别为0.015和0.007）和总生存率（P值分别为0.038和0.031）的危险因素,移植后3个月能获得完全缓解的患者可以获得更好的进展生存率（P=0.007）和总生存率（P=0.003）。结论 IEAC或CEAC预处理联合ASCT治疗淋巴瘤是安全有效的,可作为淋巴瘤ASCT预处理的备选方案。     

人外周血内皮祖细胞的分离培养及鉴定

目的:从人外周血中分离培养内皮祖细胞(EPCs),并探讨其体外诱导培养的条件。方法:密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞,置于鼠尾胶原包被的培养瓶中进行体外培养,流式细胞术和免疫荧光法检测分化细胞表面特异性抗原标记物的表达。结果:人外周血单个核细胞在鼠尾胶原包被的培养瓶中培养后呈梭形,并表达内皮细胞的特异性抗原CD34和KDR,和干/祖细胞抗原CD133。提示这些培养细胞既具有内皮细胞的表面标志和功能,又具有祖细胞特性。结论:成功从外周血中培养出EPCs。鼠尾胶原可取代EPCs培养中常用的纤维连接蛋白,是体外分离培养外周血EPCs的更节省的一种方法。