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目的 获取小鼠内皮抑素(endostatin)基因并进行序列测定,为今后研究其机制及应用创造条件。方法 以小鼠肝脏总RNA为模板,用RT-PCR法从中扩增endostatin基因,并将所得基因重组入pUC19载体质粒,采用自动测定仪及荧光素标记引物,测定目的基因序列。结果 从小鼠肝组织中成功扩增endostatin基因,莘成功克隆入pUC19载体。经酶切鉴定正确后,命名为pUC-Endo。经测序证实所获基因序列与已知的endostatin基因序列一致。结论 成功构建小鼠endo-statin基因的重组克隆pUC-Endo,为今后利用endostatin进行胶质瘤的抗血管生成治疗研究奠定了实验基础。 相似文献
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小鼠endostatin基因的克隆、表达及表达产物的活性鉴定 总被引:4,自引:2,他引:2
目的 克隆并表达小鼠endostatin基因,并初步检测其血管生长抑制功能,为胶质瘤的基因治疗探索新的途径。方法 从小鼠肝组织用RT-PCR法扩增endostatin基因,重组人pUC19质粒,经测序证实无误后,重组人表达载体pDH,经温度诱导表达,并用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测表达产物活性。结果 从小鼠肝组织中成功扩增到endo-statin基因,测序与报道序列一致,重组进pDH后经温度诱导表达,在SDS-PAGE电泳上得到一条新的蛋白表达带。分子质量为20ku,纯化后的蛋白能明显抑制CAM的血管生长。结论 成功构建了小鼠endostatincDNA的重组克隆pDH-Endo,并在大肠杆菌中获得高效表达。在CAM实验中表明纯化后的蛋白具有明显血管抑制作用。为利用endostatin进行脑胶质瘤等实验 全瘤的基因治疗奠定了实验基础。 相似文献
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Angiostatin kringle(1-3)体外诱导人脐静脉内皮细胞凋亡 总被引:7,自引:4,他引:3
目的 探讨 angiostatin kringle (1- 3) [简称 AK(1-3) ]抑制血管内皮细胞增殖的作用机制 .方法 以加入重组人 AK(1- 3)蛋白 (30 0 nmol· L- 1 )的含 10 0 m L· L- 1小牛血清 DMEM培养基培养人脐静脉内皮细胞 ECV30 4,72 h后 ,采用透射电镜、流式细胞术细胞周期分析和核 DNA琼脂糖凝胶 (15 g· L- 1 )电泳检测重组 AK(1- 3)蛋白作用后血管内皮细胞的凋亡情况 .结果 实验组 ECV30 4细胞检测到了典型的凋亡 .透射电镜下可见细胞核染色质浓缩、边集、核碎裂及胞质浓缩等凋亡细胞典型的形态学改变 ;流式细胞术周期分析显示在 G1期峰前存在一个凋亡峰 (2 0 .6 % ) ;核琼脂糖凝胶(DNA15 g· L- 1 )电泳呈梯状 .对照组 ECV30 4细胞表现正常 .结论 重组人 AK(1- 3)蛋白诱导了血管内皮细胞的凋亡 ,这是其抑制血管内皮细胞增殖的机制之一 相似文献
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代谢型谷氨酸受体拮抗剂MCPG对大鼠弥漫性脑损伤的保护作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 观察和探讨代谢型谷氨酸受体拮抗剂α-甲基,4-羧基苯丙氨酸(MCPG)对大鼠弥漫性脑损伤(DBI)的保护作用及其机制,方法 在自由落体致DBI模型的基础上,通过测定脑组织含水量、TXB2,6keto-PGF1α,CAMP,CGMP等水平变化,以及应用硝酸镧标记电镜分析观察血脑屏障的通透性改变,探讨MCPG对DBI的保护作用及及其机制。结果DBI后脑组织含水量增加,TXB2,CGMP,TXB2 相似文献
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小鼠endostatin基因的克隆与C6鼠脑胶质瘤的治疗 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 克隆小鼠endostatin基因,检测其表达蛋白的生物学活性,应用该蛋白治疗大鼠C6脑胶质瘤。方法 从小鼠胶原XⅧcDNA用PCR法克 endostatin基因,重组入PUC19,测序后构建非融合表达载体pDH-endostatin,使其在DH5α内经温度诱导表达,纯化该表达蛋白并用鸡胚绒 囊膜 内皮细胞抑制实验检测其活性,经荷瘤大鼠皮下注射该蛋白治疗其脑胶质瘤,结果 成功获得551bp的e 相似文献
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江西省一例人感染1型猪链球菌病例的流行病学调查与分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的通过对江西省一例人感染1型猪链球菌病例的流行病学调查与分析,查找可能的感染来源,为人感染1型猪链球菌病病例的防治提供科学依据。方法采用描述流行病学方法分析。结果经流行病学调查发现,该病例在发病前1周食用过市场上购买的猪肉,可能通过接触携带1型猪链球菌的猪肉感染。结论 1型猪链球菌一般不导致人类感染,但对免疫功能低下或伴有基础性疾病的老年人有致病性,要进一步关注1型猪链球菌毒力的变化和耐药情况,以便今后更好地应对此类病例,减少死亡。 相似文献
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大鼠C6脑胶质瘤模型的实验研究 总被引:1,自引:1,他引:0
应用定向法将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞悬液 10 μl注入大鼠右脑尾状核 ,悬液内含 1%琼脂糖和 1× 10 6个C6细胞。接种后行一般和MRI检查 ,对 5组接种大鼠分别在第 10、15、2 0、2 5天和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定 ,对脑组织和瘤体标本行HE染色。MRI结果表明 ,5 0只接种大鼠脑内均有肿瘤生长 ,远处和颅外转移率为 4%。所建C6脑胶质瘤模型生长稳定、大鼠生存时间易于判定 ,为脑胶质瘤化疗、放疗和基因治疗奠定了实验基础。 相似文献