同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡caspase3途径作用的机制

目的 了解同型半胱氨酸(Hcy)是否通过caspase途径诱导内皮细胞凋亡,以及辛伐他汀是否可以通过调节c-IAP行使其拮抗效应.方法 Hcy、辛伐他汀或两者联合处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 24 h后,采用Annexin V染色加流式细胞术及TUNEL观察细胞凋亡状态;RT-PCR和蛋白质印迹技术检测caspase3、c-IAP-1和c-IAP-2的mRNA和蛋白质水平.结果 0.5 mmol/L和3 mmol/L的Hcy均导致HUVEC凋亡, Hcy浓度高时凋亡细胞数较高,并伴有caspase3 表达和活化增强;c-IAP-1、c-IAP-2的mRNA和蛋白质水平降低; 辛伐他汀可以上调c-IAP-1和c-IAP-2的表达.结论 Hcy诱导HUVEC凋亡作用可能涉及caspase3相关途径;辛伐他汀可促进c-IAP系统的表达,从而部分拮抗Hcy的作用.     

卡托普利对家兔动脉粥样硬化内皮依赖舒张反应的影响

目的研究卡托普利对家兔动脉粥样硬化（ＡＳ）动脉内皮依赖舒张反应的影响。方法２７只家兔随机分成正常对照组，ＡＳ组及卡托普利（２５ｍｇｋｇ－１ｄ－１）组，饲养１２周。取一段（０．５ｃｍ）靠近升主动脉起始部的动脉做常规病理切片，一近端腹主动脉（３ｃｍ～４ｃｍ）做血管功能测定，观察对不同浓度乙酰胆缄及硝普钠的舒张反应。结果与ＡＳ组比较，卡托普利组血浆总胆固醇浓度无显著改变，但病理形态学发现卡托普利组脂纹数量减少，平均最大脂纹厚度明显降低，示卡托普利有抗ＡＳ作用。腹主动脉乙酰胆缄引起的平均最大舒张百分数３组分别为６２．３±２．５％、３．７±３．２％、３５．９±１１．４％，表明卡托普利能改善内皮依赖的舒张反应，而非内皮依赖的舒张反应（硝普钠引起者）３组间无差异。结论改善内皮功能不全可能是卡托普利抗动脉粥样硬化的重要机制     

NF-kB核酸对大鼠血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响

目的 探讨NF-kB核酸对增殖的血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响。方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞传代培养，实验共分六组。阳离子脂质体转染法将NF-kB寡核苷酸导人血管平滑肌细胞，检测细胞凋亡、细胞内NF-kBp65基因表达以及ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白合成情况。结果血管平滑肌细胞转染NF-kB反义或诱骗寡核苷酸后．细胞凋亡增强，凋亡时间延长。反义组NF-kBp65蛋白质表达较正义组降低（P〈0．05）；反义＋诱骗联合干预并未优于反义组单独治疗，但与诱骗组相比NF-kBp65的蛋白质表达降低（P〈0．05）。反义组、诱骗组的ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白质表达较相应的对照正义组、诱骗对照组均降低（P〈0．05）。结论 NF-kB的反义和诱骗寡核苷酸均能抑制血管平滑肌细胞ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的蛋白质表达，抑制血管平滑肌细胞增殖，使细胞凋亡增强；NF-kB反义寡核苷酸及反义＋诱骗寡核苷酸联合干预可减少NF-kB生成。     

外耳湿疹的诊治及护理体会

外耳湿疹是指发生在耳廓、外耳道及其周围皮肤的多形性皮疹，多因受药物或其他过敏物质刺激所致，以小儿多见，分为急性、慢性两类。秋冬季节发病率高。主要症状为瘙痒，皮肤可出现多形性皮疹、弥漫性潮红、丘疹、水疱、渗液、结痂。急性湿疹极痒，有黄水样分泌物；慢性湿疹除瘙痒外，外耳皮肤可增厚致外耳道狭窄、表皮脱屑、皲裂、结痴，鼓膜受累者可有轻度传导性耳聋及耳鸣。     

浅静脉留置针在急诊患者的应用体会

静脉输液是治疗、抢救患者的一项重要措施，尤其对于病情危重的患者，选择一种良好的、持续的输液途径尤为重要。近年来，使用静脉留置针(也称套管针)输液在临床中逐渐引起重视，相对于其他输液方法，其优越性也正得到了广大医护人员的认可。特别是用在急诊患者的救治中，从根本上解决了患者躁动、体位改变、快速输液、随时抢救的难题，收到了很好的效果。笔者积累了一些经验，现报告如下。     

核因子κΒ对血管成形术后平滑肌细胞增殖和新生内膜形成的影响

背景：血管壁机械性损伤后的炎症和增殖效应是血管再狭窄的主要原因。核因子κΒ／Rel家族中的核因子κΒ在多种细胞类型中表达。激活一系列与血管壁病理生理相关的靶基因。 目的：探讨核因子κΒ的反义和诱骗性寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜和单核细胞化学趋化因子的作用。 设计：随机对照动物实验。 单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院心内科。 材料：3个月龄雄性SD大鼠126只，350-380g。引物合成和寡核苷酸合成：根据文献及国际互联网cDNA文库检索、设计，由上海生物工程公司合成；寡核苷酸合成：全硫代修饰。由上海生物工程有限公司合成。方法：实验于2001-05/2003-03在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和瑞金医院心血管实验室完成。采用贴块法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞，实验选用3～5代血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原和核因子κΒ蛋白水平。制作大鼠血管球囊损伤模型。SD大鼠随机分为7组．正常组：除球囊损伤外．其余手术操作同其他组相同；反义组；正义组；诱骗组；Scramble组；反义＋诱骗组；模型组。每组分为6个时相点（6h,1,3,5,7,14d），每个时相点3只大鼠。检测血管球囊损伤后新生内膜形成以及单核细胞化学趋化因子1、核因子κΒp65和ERK2的表达水平。 主要观察指标：①核因子κΒp65寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的效应。②核因子κΒp65基因表达定位和蛋白合成。③大鼠颈动脉球囊损伤后病理形态学改变。④单核细胞化学趋化因子1mRNA表达。⑤免疫组织化学检测球囊损伤后血管壁单核细胞化学趋化因子1的蛋白质表达。⑥We8lemblol检测球囊损伤后血管壁核因子KBp65．ERK2的蛋白合成。 结果：①增殖的平滑肌细胞内增殖标记物增殖细胞核抗原表达增加。②增殖的平滑肌细胞浆、细胞核内均有核因子κΒp65的基因表达；核因子κΒp65蛋白水平增加。观察核因子κΒp65基因表达水平，反义核酸组较对照正义组降低53．66％，诱骗性寡核苷酸组较诱骗对照组降低57．35％．差异均有统计学意义（P〈0．05）。③核因子κΒ反义和诱骗寡核苷酸抑制增殖细胞核抗原表达，较阳性对照组分别降低45．12％，45．05％。④大鼠血管球囊损伤后第5天。正义组、诱骗对照组、模型组内膜面积、中膜面积、内膜，中膜比值显著升高（P〈0．05），7d后达到高峰。反义组、诱骗组显著降低内膜与中膜比值，反义＋诱骗组较单独应用无统计学意义的降低效应。⑤反转录-聚合酶链反应显示球囊损伤后6h．单核细胞化学趋化因子1mRNA表达明显增加，1d后表达减少．3,5，7,d单核细胞化学趋化因子1mRNA持续而明显的表达增强．14d后略为降低。反义组、诱骗组、反义＋诱骗组在各时间点均能减少叽核细胞化学趋化因子1mRNA表达。⑥Westem Blot检测显示血管球嚏损伤后6h，核因子κΒp65、ERK2蛋白表达微弱。1d后ERK2蛋白表达略增强。核因子κΒ的蛋白合成明显增强。7d后p65，ERK2的蛋白合成达到高峰。第14天，ERK2与p65的蛋白合成较第7天减弱。反义组、诱骗组、反义＋诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时相点蛋白合成均减弱。结论：增殖的平滑肌细胞核因子κΒp65基因表达增加。核因子κΒ调控单核细胞化学趋化因子1的基因表达和蛋白质水平。血管球囊损伤后，血管平滑肌细胞增殖有动态性变化。局部转染核因子κΒ反义和诱骗寡核苷酸能抑制所调控靶基因表达。     

听觉脑干诱发电位在新生儿缺氧缺血性脑病中的应用

新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）是指在围产期缺氧窒息，导致脑的缺氧缺血性损害，临床上可出现一系列脑病的表现，部分病例可留有不同程度的神经系列后遗症，听觉脑干诱发电位（BAER），是由外周听觉刺激所引起的皮层下结构电位，能客观反映听神经和脑干功能障碍，现将我院临床确诊为HIE的30例BAER结果报告如下。     

阿托伐他汀对同型半胱氨酸所诱导内皮祖细胞功能损伤的保护作用

目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能损伤的氧化应激机制及阿托伐他汀的拮抗作用。方法:密度梯度离心法获取小鼠骨髓单个核细胞,培养7 d后收集贴壁细胞,FITC-UEA-1荧光染色鉴定EPCs。EPCs与不同浓度Hcy(0μmol/L,50μmol/L,500μmol/L)共孵育24 h或分别经不同浓度的阿托伐他汀(0.1μmol/L,1μmol/L,10μmol/L)预孵育0.5 h后,再加入500μmol/LHcy共孵育24 h。用MTT比色法,改良Boyden小室、黏附能力测定和体外血管生成试剂盒,分别观察EPCs的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外血管生成能力。荧光探针H2DCF-DA法检测细胞内活性氧水平,光泽精化学发光法检测NADPH氧化酶活性,硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)含量,RT-PCR法测定eNOS基因表达。结果:Hcy诱导EPCs增殖、迁移、黏附和体外血管生成功能下降,活性氧的产生及NADPH氧化酶的活性增加,eNOS基因表达及细胞培养液中NO含量减少,与无Hcy处理组相比有明显差异(P0.05或P0.01)。与500μmol/L Hcy组相比,阿托伐他汀预处理可呈剂量依赖性地拮抗Hcy诱导的上述改变(P0.05或P0.01)。结论:Hcy可能通过激活NADPH氧化酶,诱导EPCs活性氧的产生及降低eNOS基因表达和NO水平,导致EPCs增殖、迁移、黏附和体外血管生成功能下降。阿托伐他汀部分拮抗Hcy的作用。     

甲钴胺辅助治疗特发性面神经麻痹50例疗效观察

目的观察甲钴胺辅助治疗特发性面神经麻痹的临床疗效。方法将50例特发性面神经麻痹患者随机分为观察组和对照组各25例,所有患者在进行综合药物治疗的基础上,观察组给予甲钴胺（弥可保）治疗;对照组给予维生素B12治疗。分别在治疗前、治疗后28d采用House-Brackmann分级法进行评定。结果采用House-Brackmann分级评分,入院时两组比较差异无统计学意义,观察组于治疗后28d差异有统计学意义（P〈0.05）;经过28d治疗,观察组总有效率为92.0%,对照组总有效率为76.0%,观察组优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论甲钴胺（弥可保）治疗特发性面神经麻痹疗效显著,疗效优于维生素B12,值得临床推广。     

同型半胱氨酸诱导内皮祖细胞凋亡的氧化应激机制

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)诱导小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)凋亡的氧化应激机制.方法 密度梯度离心法获取小鼠骨髓单个核细胞,培养7 d后收集贴壁细胞,荧光显微镜下鉴定EPCs;与不同浓度Hcy(0、50、100、500 μmol/L)共孵育12、24、48 h,或分别经氧自由基清除剂NAC(1 mmol/L)、NADPH氧化酶抑制剂DPI(10 μmol/L)、p38MAPK特异性抑制剂SB203580(10 μmol/L)预孵育30 min后,再与500 μmol/L Hcy共孵育24 h;Annexin-V/ PI双染色经流式细胞术检测细胞凋亡,荧光探针H2DCF-DA法检测细胞内活性氧水平,光泽精化学发光法检测NADPH氧化酶活性,硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)含量.结果 Hcy呈时间、剂量依赖性诱导EPCs凋亡、活性氧产生及NADPH氧化酶激活,并减少细胞培养液中NO含量(P<0.05或P<0.01);NAC、DPI、SB203580预处理能拮抗Hcy诱导的上述改变(P<0.05或P<0.01).结论 Hcy可能通过激活NADPH氧化酶、诱导EPCs活性氧的产生、降低NO水平及激活p38MAPK途径,导致EPCs凋亡.