IL-10基因单核苷酸多态性与急性淋巴细胞白血病易感性的相关性研究

Objective To observe the relationship of IL-10 gene single nucleotide polymorphism and the susceptibility to ALL. Methods The bone marrow and peripheral blood samples from 115 ALL patients and 323 healthy controls were collected in Peking University First Hospital and Beijing Dao-pei Hospital from January 2007 to December 2009. The DNA were extracted from all samples. The primers of -819C/T and -592A/C in the promoter region of IL-10 gene were designed for the PCR. The restrictive fragment length polymorphism of IL-10 gene was analyzed by using restrictive enzyme Msl Ⅰ and HpyCH4 Ⅲ.Sequencing was done in part of these samples to confirm the results of PCR. The differences of genotypes and allele ratio of -819 and -592 sites were analyzed between the ALL patients and healthy controls. Real-time quantitative PCR was performed to detect the EB virus (EBV) infection and the expression of BCR/ABL fusion gene. The differences of genotypes and allele ratio of -819 and -592 sites were analyzed between the positive and negative group. Results The genotype ratios of -819CC, -819TT, - 819CT, -592AA,- 592CC and - 592AC were 14. 8% ( 17/115 ), 45.2% ( 52/115 ), 40. 0% ( 46/115 ), 43.5% ( 50/115 ),16. 5% ( 19/115 ), 40. 0% ( 46/115 ) in ALL patients, and were 9. 9% ( 32/323 ), 16. 4% ( 53/323 ),73.7% ( 238/323 ), 11.8% ( 38/323 ), 15.5% ( 50/323 ), 72. 8% ( 235/323 ) in the healthy controls,respectively. The genotypes of -819 and -592 sites had statistically significant differences between the two groups(x2 values were 46.000 and 54.550, all P ＜ 0. 05 ). The allele ratio of -819T and -592A were (65.2%, 150/230) and (63.5%, 146/230) in ALL patients, while they were 53.5% (344/646) and 48. 1% (311/646)in the healthy controls. There were statistically significant differences between the two groups (x2 values were 9. 877 and 15.986, all P ＜ 0. 05 ). The EBV DNA were detected in 42 ALL patients,among which 22 were positive and 20 were negative. The genotype ratios of -819CC, -819TT, -819CT,-592AA, - 592CC, - 592AC in EBV positive group were 9. 1% ( 2/22 ), 40. 9% ( 9/22 ), 50. 0%(11/22) ,31.8% ( 7/22 ), 13.6% ( 3/22 ), 54. 5% ( 12/22 ), while they were 35.0% ( 7/20 ), 45.0%(9/20) ,20. 0% (4/20) ,35.0% (7/20) ,45.0% (9/20) ,20. 0% (4/20) in the EBV negative group. The genotypes of -819 and -592 sites showed no statistical differences between the two groups( all P ＞ 0. 05 ).The BCR/ABL fusion gene were detected in 36 ALL patients, among which 20 were positive and 16 were negative. The genotype ratios of - 819CC, - 819TT, - 819CT, - 592AA, - 592CC, - 592AC in BCR/ABL positive group were 0% (0/20) ,45.0% (9/20) ,55.0% ( 11/20), 45. 0% (9/20) ,5.0% (1/20) ,50. 0%( 10/20), while they were 18. 8% ( 3/16 ), 50. 0% ( 8/16), 31.3% ( 5/16 ), 50. 0% ( 8/16 ), 18. 8%(3/16), 31.3 % (5/16)in the BCR/ABL negative group. The genotypes of -819 and -592 sites showed no statistical differences between the two groups ( all P ＞ 0. 05 ). Conclusion The population with - 819TT and - 592AA genotype of IL-10 gene shows susceptibility to ALL.     

人趋化素样因子1基因转移对心肌梗死大鼠外周血CD34+细胞的影响

目的:探讨人趋化素样因子1(chemokine-like factor 1,CKLF1)基因转移动员大鼠骨髓CD34 细胞的作用和在心肌梗死情况下对外周血CD34 细胞数量变化的影响.方法:肌肉电转不同剂量CKLF1质粒,构建大鼠急性心肌梗死模型,检测基因转移后不同时间外周血CD34 细胞的数量,分析CD34 细胞数与CKLF1质粒的量效关系和时间动力学的变化.结果:逆转录聚合酶链反应和免疫荧光染色均能检测到CKLF1的表达.CKLF1基因转移引起大鼠外周血CD34 细胞的数量增加,在基因转移第5至7天达高峰,其中CKLF1质粒100 μg组的峰值最高,分别为基因转移前的3.88倍和空质粒组的3.34倍(P＜0.01).对心肌梗死大鼠CKLF1基因转移增加了心肌梗死后第1天外周血CD34 细胞数的升高,其中100 μg组最明显(14.61×106/L vs 7.85×106/L, P＜0.01).结论:CKLF1能动员骨髓CD34 细胞及在心肌梗死情况下增加外周血CD34 细胞的数量,其中CKLF1质粒100 μg效果最明显.     

鲜壁虎冻干粉抑制H22肿瘤血管生成机理的实验研究

目的 探讨鲜壁虎冻干粉对H22肝细胞癌血管生成的机制。方法 建立移植瘤小鼠H22肝细胞癌模型。将30只小鼠随机分为顺铂治疗组、壁虎治疗组以及对照组,分别给予顺铂腹腔注射（1mg/g）,口服鲜壁虎冻干粉（1．2g/kg）及口服等量生理盐水。给药20次后,用肿瘤组织称重法评价抗肿瘤活性,用TUNEL方法检测细胞凋亡率。采用Weidner方法检测肿瘤组织的微血管密度,S-P免疫组化法检测血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞因子（bFGF）的蛋白表达。结果 鲜壁虎冻干粉可抑制H22小鼠肿瘤生长及诱导肿瘤细胞凋亡,并可降低肿瘤组织VEGF、bFGF蛋白的表达,使肿瘤组织内微血管密度下降。结论 鲜壁虎冻干粉可抑制H22小鼠肿瘤生长及血管生成,其机制可能与下调VEGF、bFGF蛋白的表达有关。     

一毛囊角化病家系中ATP2A2基因的突变

目的 :检测国内一毛囊角化病家系中ATP2A2基因的突变 ,探讨该病的发病机制。方法 :采用电镜、PCR、单链构象多态性 (singlestrandedconformationpolymorphism ,SSCP)分析和DNA测序方法。 结果 :电镜显示表皮基底细胞桥粒减少 ,张力微丝在核周凝聚。PCR SSCP方法提示ATP2A2基因 (编码肌浆网 /内质网钙离子 ATP酶 2 )第 5外显子可能存在异常 ,DNA测序证实了一种未见报道的新突变位点 :第 44 5位碱基由鸟嘌呤突变为腺嘌呤 ,使编码高度保守的 β链区第 149位氨基酸由门冬氨酸突变为门冬酰胺。 结论 :该毛囊角化病家系中存在ATP2A2基因突变 ,突变可能影响钙离子的转运 ,使表皮的细胞连接和分化出现异常     

PCR法扩增角鲨烯环氧化酶鉴定白念珠菌的研究

目的：通过扩增角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,进行PCR来鉴定白念珠菌。方法：根据白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框中编码1MSSVKY^6的序列设计上游引物5‘－ATGAGTTCAGTTAAGTATG－3‘,编码^492NEIVR^496的序列设计下游引物5‘-CTATCTTACAATCTCGTTC-3‘,对白念珠菌ATCC11006,22株临床分离株,7株其它致病性念珠菌,8株致病性丝状真菌,1株新生隐球菌及1份人的基因组DNA进行了PCR扩增,并对PCR产物用酶切方法鉴定,结果：所有23株白念菌均可获得约1．5kb大小的PCR产物,16株其它致病性真菌及人的DNA标本均无扩增产物,PCR产物经BamHI酶切,产生两个大小分别约为1．0kb和500bp的片段。结论：利用设计的引物,扩增角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,可以特异地鉴定白念珠菌。     

STK11基因多态性与家族性热性惊厥关联研究

目的研究丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11(serine/threonine kinase 11,STK11)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点与家族性热性惊厥(familial febrile convulsions,FC)的关系.方法用关联分析的方法,结合传递不平衡检验(transmission disequilibrium test,TDT),对来自中国北方的家族性热性惊厥病人和对照组进行分析.结果 SNPs位点的基因型频率在惊厥患儿和对照组中分布均符合Hardy-Weinberg平衡.前期实验位点rs741764的基因型频率和基因频率及rs2075604的基因型频率在两组人群中分布差异有显著性(P＜0.05),后期选择一般人群作为对照组进行的关联分析,除rs741764基因型频率在两组间差异有显著性(P＜0.05)外,其余差异均无显著性.进一步用TDT得到3个位点都没有发现传递不平衡现象.结论 STK11基因的四个SNPs位点均与家族性热性惊厥不相关,STK11基因可能不是中国北方人家族性热性惊厥的易感基因.     

单纯型大疱性表皮松解症Weber-Cockayne亚型一家系角蛋白5基因突变的检测

鉴定单纯型大疱性表皮松解症Weber-Cockayne亚型一家系中的基因突变位点。方法:应用聚合酶链反应(PCR)及DNA直接测序的方法,检测患者角蛋白5(KRT5)及角蛋白14(KRT14)基因的全部编码序列;针对所发现的突变,以限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析加以验证。结果:该家系患者存在KRT5基因突变:第2外显子第596位碱基由腺嘌呤突变为胞嘧啶,导致第199位氨基酸由赖氨酸变为苏氨酸(K199T),而正常对照无此替代。结论:KRT5K199T为导致此家系中患者临床表现的特异突变,此突变位点为国内外首次报道。     

家族性热性惊厥患儿酪蛋白激酶γ2基因单核苷酸多态性研究

目的　研究酪蛋白激酶γ2 (caseinkinaseⅠ gamma 2 ,CSNK1G2 )基因单核苷酸多态性 (singlenucleotidepolymorphisms ,SNPs)位点与家族性热性惊厥的关系。 方法　通过NCBI的dbSNP数据库选择CSNK1G2基因的 5个单核苷酸多态性位点 ,应用聚合酶链式反应 限制性内切酶片段长度多态性技术 ,检测 5 3例家族性热性惊厥患儿和 10 1名健康对照者的CSNK1G2基因 5个SNPs位点的基因型 ,并使用EH1.2 0程序构建单体型并以单体型为标记进行进一步的患儿和正常人相关分析。结果　 5个SNPs位点的基因型频率在惊厥患儿和正常人群中分布均符合Hardy Weinberg平衡。其中 3个位点SNPrs740 42 3、rs2 2 7773 7、rs10 5 9684的基因型频率和基因频率在家族性热性惊厥患儿和对照组分布差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,1个位点rs2 0 74882基因型频率和基因频率在两组人群中分布差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,另一位点rs480 682 5因基因频率较低 ,故未作统计。结论　CSNK1G2基因SNPsrs740 42 3、rs2 2 7773 7、rs10 5 9684可能与家族性热性惊厥相关。     

大鼠心肌成纤维细胞合成金属硫蛋白

目的 :探讨脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)、碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)、氧化型低密度脂蛋白 (oxidizedlow densitylipoproteins ,oxLDL)及重金属物质ZnCl2 等刺激因素对大鼠心肌成纤维细胞金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)合成的影响。方法 :用10 9Cd Hb饱和法测定细胞MT含量 ,用RT PCR法测定细胞MTmRNA含量。结果 :本实验中各种处理因素均可刺激心肌成纤维细胞MT含量的增加。 1和5mg·L-1LPS处理组成纤维细胞MT含量与对照组相比分别增加 94 %和 130 % (P <0 .0 1)。 0 .2和 1.0mg·L-1bFGF处理组分别增加 4 1%和 5 9% (P <0 .0 1)。oxLDL亦可以促进心肌成纤维细胞MT的合成 ,2和 10mg·L-1oxLDL组MT含量较对照组分别增加 2 3% (P <0 .0 5 )和 4 1% (P <0 .0 1)。 1,2 ,5mg·L-1ZnCl2 呈浓度依赖性刺激心肌成纤维细胞MT含量的增加 ,与对照组相比分别增加 6 6 %、99%和 14 9% (P <0 .0 1) ,2～ 8mg·L-1ZnCl2 诱导MT1mRNA含量增加 6 9%～ 12 9% (P <0 .0 1) ,MT2mRNA含量增加 31%～ 6 0 % (P <0 .0 1)。但 10mg·L-1ZnCl2 不能进一步增加细胞MT含量 ,仅较对照组增加 91% ,可能与高浓度ZnCl2 致细胞损伤 ,细胞存活率降低有关。结论 :LPS、bFGF、oxLDL、ZnCl2 等多     

γ射线辐射对大鼠胸主动脉平滑肌细胞肾上腺髓质素和内皮素生成的影响

为观察^60COγ射线辐射对培养的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）肾上腺髓质素（Adm)内皮素（ET）生成的影响，以探讨辐射防治再狭窄的机制，采用逆转录－竞争性聚合酶链反应观察经0,1,,24,25Gy辐射的培养大鼠血管平滑肌细胞Adm和ET mRNA水平；用放免方法测定相应的Adm和ET的生成。发现1Gy辐射对VSMC Adm和ET的生成及基因表达均无显著影响。14Gy辐射后VSMC生成的Adm较对照组增加270％（P＜0．05），ET的生成较对照组降低27．3％（P＜0．01）；25Gy辐射使VSMC生成的Adm和ET含量分别增加233％（P＜0．05）和降低58．0％（P＜0．01）。14和25Gy辐射分别使细胞Adm mRNA水平较对照组增加82．4％（P＜0．01）和101％（P＜0．01），使ET mRNA水平较对照组降低47．1％（P＜0．01）及40．2％（P＜0．01）。表明^60Coγ射线辐射可以促进Adm的蛋白及基因表达，而抑制ET的蛋白及基因表达，增加了Adm/ET比值。