男性孤独症儿童甲基CpG结合蛋白-2基因突变的分析

目的： 应用甲基CpG结合蛋白-2（methyl-CpG-binding protein 2,MECP2）基因突变筛查方法,检测孤独症患者的MECP2基因,探讨孤独症与MECP2基因的关系。方法： 收集男性孤独症44例,均满足孤独症《美国精神障碍诊断和统计手册》第4版诊断标准,应用变性高效液相色谱（denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC）筛查MECP2基因变异,并进行DNA测序鉴定。对存在MECP2基因错义突变的病例进行家系调查。结果： 在44例患者中经DHPLC筛查阳性和 DNA测序发现,4例患者存在不同的MECP2基因突变,包括c.590C>T（T197M）和c.602C>T（A201V）2种错义突变,以及c.1053C>G、c.897C>T 2种同义突变;17例的内含子3位于Exon 4前74位点C>T, 为SNP (rs2071569) ;1例c.602C>T错义突变患者家系调查发现, 突变来源于母亲及外祖父,母亲呈杂合子,为X染色体随机失活,母亲与外祖父智力均正常,外祖父有抑郁症。结论： 在男性孤独症患者中,存在MECP2基因较高的变异率,MECP2基因在孤独症致病中可能起着一定作用,不除外是孤独症的易感基因。     

1例伴发恶性胸腺瘤的副肿瘤性天疱疮临床及免疫学研究

目的报告我国首例伴发恶性胸腺瘤的副肿瘤性天疱疮(PNP)临床及免疫学特征。方法对患者进行系统体检、医学影像学、组织病理学和免疫学检查,使用重组蛋白免疫印迹法对由胸腺瘤分泌抗体所针对的自身抗原进行了研究。结果患者确诊为PNP,伴发恶性胸腺瘤,患者血清中含有抗重组人包斑蛋白(envoplakin)和周斑蛋白(periplakin)L亚区GST融合蛋白的抗体。结论PNP具有独特的临床表现、组织病理以及免疫学特点,患者血清中的自身抗体针对多种抗原,包斑蛋白和周斑蛋白的L亚区很可能是PNP患者血清抗体结合的主要位点。     

IL-10基因单核苷酸多态性与急性淋巴细胞白血病易感性的相关性研究

Objective To observe the relationship of IL-10 gene single nucleotide polymorphism and the susceptibility to ALL. Methods The bone marrow and peripheral blood samples from 115 ALL patients and 323 healthy controls were collected in Peking University First Hospital and Beijing Dao-pei Hospital from January 2007 to December 2009. The DNA were extracted from all samples. The primers of -819C/T and -592A/C in the promoter region of IL-10 gene were designed for the PCR. The restrictive fragment length polymorphism of IL-10 gene was analyzed by using restrictive enzyme Msl Ⅰ and HpyCH4 Ⅲ.Sequencing was done in part of these samples to confirm the results of PCR. The differences of genotypes and allele ratio of -819 and -592 sites were analyzed between the ALL patients and healthy controls. Real-time quantitative PCR was performed to detect the EB virus (EBV) infection and the expression of BCR/ABL fusion gene. The differences of genotypes and allele ratio of -819 and -592 sites were analyzed between the positive and negative group. Results The genotype ratios of -819CC, -819TT, - 819CT, -592AA,- 592CC and - 592AC were 14. 8% ( 17/115 ), 45.2% ( 52/115 ), 40. 0% ( 46/115 ), 43.5% ( 50/115 ),16. 5% ( 19/115 ), 40. 0% ( 46/115 ) in ALL patients, and were 9. 9% ( 32/323 ), 16. 4% ( 53/323 ),73.7% ( 238/323 ), 11.8% ( 38/323 ), 15.5% ( 50/323 ), 72. 8% ( 235/323 ) in the healthy controls,respectively. The genotypes of -819 and -592 sites had statistically significant differences between the two groups(x2 values were 46.000 and 54.550, all P ＜ 0. 05 ). The allele ratio of -819T and -592A were (65.2%, 150/230) and (63.5%, 146/230) in ALL patients, while they were 53.5% (344/646) and 48. 1% (311/646)in the healthy controls. There were statistically significant differences between the two groups (x2 values were 9. 877 and 15.986, all P ＜ 0. 05 ). The EBV DNA were detected in 42 ALL patients,among which 22 were positive and 20 were negative. The genotype ratios of -819CC, -819TT, -819CT,-592AA, - 592CC, - 592AC in EBV positive group were 9. 1% ( 2/22 ), 40. 9% ( 9/22 ), 50. 0%(11/22) ,31.8% ( 7/22 ), 13.6% ( 3/22 ), 54. 5% ( 12/22 ), while they were 35.0% ( 7/20 ), 45.0%(9/20) ,20. 0% (4/20) ,35.0% (7/20) ,45.0% (9/20) ,20. 0% (4/20) in the EBV negative group. The genotypes of -819 and -592 sites showed no statistical differences between the two groups( all P ＞ 0. 05 ).The BCR/ABL fusion gene were detected in 36 ALL patients, among which 20 were positive and 16 were negative. The genotype ratios of - 819CC, - 819TT, - 819CT, - 592AA, - 592CC, - 592AC in BCR/ABL positive group were 0% (0/20) ,45.0% (9/20) ,55.0% ( 11/20), 45. 0% (9/20) ,5.0% (1/20) ,50. 0%( 10/20), while they were 18. 8% ( 3/16 ), 50. 0% ( 8/16), 31.3% ( 5/16 ), 50. 0% ( 8/16 ), 18. 8%(3/16), 31.3 % (5/16)in the BCR/ABL negative group. The genotypes of -819 and -592 sites showed no statistical differences between the two groups ( all P ＞ 0. 05 ). Conclusion The population with - 819TT and - 592AA genotype of IL-10 gene shows susceptibility to ALL.     

人趋化素样因子1基因转移对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的：探讨人趋化素样因子1（chemokine-like factor 1, CKLF1）基因转移对急性心肌梗死大鼠梗死面积及心功能的影响。方法：雄性3月龄Sprague-Dawley（SD）大鼠30只,随机分为3组,盐水组、CKLF1组、空质粒组,分别于股直肌内注射生理盐水100 μg、CKLF1真核表达质粒或空载质粒100 μg,并予以直流方波电脉冲刺激,第6天结扎冠状动脉前降支构建大鼠急性心肌梗死模型,第22天行超声心动图及血流动力学检查,然后处死大鼠,测定心肌梗死面积。结果：CKLF1组,左心室射血分数（67.02%±12.24%）明显高于盐水组（43.64%±7.82%）及空质粒组（47.56%±4.10%）,P＜0.05;左心室短轴缩短率（33.83%±10.15%）明显高于盐水组（18.49%±3.96%）及空质粒组（20.85%±2.24%）,P＜0.05;左心室压力上升最大速率［（5 720.01±826.32） mmHg/s,1 mmHg=0.133 kPa］明显高于盐水组［（3 955.69±685.91） mmHg/s］及空质粒组［（4 412.03±500.74） mmHg/s］,P＜0.05;左心室压力下降最大速率［（4 636.23±407.17） mmHg/s］明显高于盐水组［（2 984.82±615.24）mmHg/s］及空质粒组［（2 963.87±419.36） mmHg/s］,P＜0.05;而CKLF1组大鼠心肌梗死面积（29.63%±3.93%）明显小于盐水组（38.01%±5.48%）及空质粒组（37.50%±6.33%）,P＜0.05。结论：CKLF1基因转移可以缩小大鼠心肌梗死面积并改善其心功能。     

耐特比萘芬的白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因开放读框的克隆及序列分析

最近,我们从一例慢性黏膜皮肤念珠菌病患者的口腔中分离到一株白念珠菌(Candida albicans),并利用美国国家临床实验标准化委员会(NCCLS)1997年公布的酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感性试验参考方案M27-A[1],测定了该分离株(编号为白念珠菌BMU00657)对抗真菌药物的敏感性,发现它对多种抗真菌药物均不敏感,其中特比萘芬对它的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentrition,MIC)超过256 mg*L-1,表现出该分离株对特比萘芬显著耐药的特性.     

鲜壁虎冻干粉诱导C6胶质瘤细胞凋亡的血清药理学研究

目的探讨鲜壁虎冻干粉对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。方法将30只小鼠随机分为3组,分别给予顺铂腹腔注射,口服鲜壁虎冻干粉及口服等量蒸馏水。20天后,取小鼠血清体外处理C6胶质瘤细胞。通过形态学分析、流式细胞仪及TUNEL法,观察细胞凋亡情况;S—P免疫组化法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果形态学变化、流式细胞仪分析和TUNEL法结果均证实含鲜壁虎血清在体外可诱导C6胶质瘤细胞凋亡;鲜壁虎组与空白对照组比较,细胞内的bcl-2基因表达无明显变化,bax基因表达升高。结论含鲜壁虎血清能够诱导细胞凋亡,其机制可能与上调bax基因有关。     

小儿癫痫临床下发作的EEG和SPECT对照研究

为了解癫痫儿童临床下发作期局部脑血流灌注及神经元代谢水平的改变,首次对2例部分性癫痫患儿在EEG监测下进行临床下电发放期及发放间期的SPECT断层显像,结果显示,在EEG痫样放电区内电发放间期有限局性放射性分布减低,电发放期则有明显的局部放射性填充。提示脑内可能存在局部神经元的代谢功能低下或血流灌注不足,导致其惊厥阈值降低,引起异常放电;痫样放电又使神经元氧和能量消耗增加,引起局部血流增加。     

薄基底膜肾病基因点突变后蛋白空间二级结构的改变及与表型的关系

目的 分析薄基底膜肾病（TBMN）患者COL4A4基因点突变后导致编码蛋白中甘氨酸被其它类型氨基酸替代后的结构;探讨基因突变对编码蛋白二级结构的影响及与表型的关系。 方法 以临床确诊的1例常染色体显性连锁遗传型TBMN并发局灶节段性肾小球硬化症（FSGS）患者为研究对象,该患者症状较重,临床表现为血尿、大量蛋白尿,基因检测确定为COL4A4中的g. 1214G>A导致p．G405E。对照选取1例健康人和1例文献报道的单纯TBMN患者（基因检测确定为COL4A4中的g. 1550G>A导致p．G448S）。应用E. coli分别表达患者α4（Ⅳ）链的含有突变位点的结构域及对照α4（Ⅳ）链的相同结构域,圆二色谱检测并比较它们二级结构的差异。 结果 TBMN并发FSGS患者重组蛋白的圆二色谱最低峰所在的波长由正常对照的208 nm变为约220 nm处,而且峰度降低。单纯TBMN对照重组蛋白的检测结果与健康对照相比改变较轻微,最低峰所在的波长不变,峰度仅轻度降低。二级结构分析显示,来自健康对照的重组蛋白中α螺旋、β折叠、转角和无规卷曲均存在,其中前二者各占约1/4。与健康对照蛋白相比,来自TBMN并发FSGS患者的重组蛋白中α螺旋结构增多,约占1/3,无β折叠结构;单纯TBMN对照的重组蛋白与健康对照相似,α螺旋的比例下降而β折叠增多。 结论 位于α4(Ⅳ)链相邻结构域的两个不同位置的甘氨酸被不同的氨基酸替代,它们的临床表型不同,α4(Ⅳ)链的二级结构也存在显著差异。而且,二级结构的改变程度与临床表型的严重性一致。     

化疗药物的免疫调节作用

迄今,各种肿瘤的治疗仍然主要依赖细胞毒药物杀伤肿瘤细胞。细胞毒药物并不能特异性识别肿瘤细胞,对其他体细胞均有杀伤作用。免疫细胞(包括淋巴细胞和粒细胞)可能会在应用细胞毒类药物化疗后减少。因此,多年以来都认为,化疗药物对免疫系统起抑制作用。但是,最近的一些研究显示,应用某些化疗药物后,不仅不会抑制抗肿瘤免疫反应,反而可作用于肿瘤免疫应答的各个环节,通过改变肿瘤细胞的免疫原性、增强免疫相关细胞(如树突状细胞)的免疫活性以及降低免疫抑制细胞的数目等机制来增强抗肿瘤免疫反应,抑制肿瘤生长。这一现象的发现有可能改变人们对传统化疗抗肿瘤地位的认识,继而更加合理地优化化疗策略。     

我院科研平台之一中心实验室的建设与思考

临床医学科研水平是一流临床医学院的标志之一。近年来，我院加强了面向全院的中心实验室、实验动物中心、图书馆、医学统计室和电镜室等科研平台的建设。但是，目前临床医院在科研方面还存在很多问题。中心实验室作为设立在临床医院的研究技术平台之一，应该怎样发挥作用？是一个值得探讨的课题。