Bcl-2基因对丝裂霉素C诱导的膀胱癌细胞凋亡抑制及其机制的研究

目的：探讨Bcl-2基因对丝裂霉素C（MMC）诱导的膀胱癌细胞凋亡的抑制作用及其分子机制。方法：采用DNA重组技术构建真核表达载体pcDNA3．1（＋）／Bel-2；利用脂质体将重组载体pcDNA3．1（＋）／Bcl—2和空载体pcDNA3．1（＋）转入人膀胱癌BIU-87细胞，RT-PCR检测基因转录水平；MMC作用于转染前、后的细胞，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、吖啶橙（AO）荧光染色法、Western blot技术对细胞生长、凋亡、Caspase-3活性及细胞色素C在细胞内分布的变化进行检测。结果：1）成功构建真核表达载体pcDNA3．1（＋）／Bcl-2，建立Bcl-2基因高表达的膀胱癌细胞株BIU-87／Bcl-2。2）在MMC作用下，与未转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞株BIU-87和BIU-87／neo相比，BIU87／Bcl-2细胞株存活率上升，P〈0．01，其IC50是后者的15倍，q＝6．41，Pd0．01；BIU-87／Bcl-2的凋亡率显著降低，q值分别为22．62和20．45，P值均〈0．01，Caspase-3激活和线粒体细胞色素C的释放受到抑制，BIU-87／Bcl-2的A450显著低于BIU-87和BIU87／neo，q值分别为28．20和26．70，P值均〈0．01，表明BIU-87／Bcl-2的Caspase-3激活受限。结论：Bcl-2基因高表达通过抑制线粒体细胞色素C的释放和Caspase-3的激活，使膀胱癌细胞对MMC诱导的凋亡产生抗性，导致耐药性的产生。     

高压氧对大剂量激素用药后大鼠股骨近端组织的影响

目的 研究不同疗程高压氧干预对大剂量激素用药后大鼠股骨近端组织学、BMP-2及其受体表达水平的影响。方法对90只4月龄雄性Wister大鼠进行大剂量地塞米松肌肉注射6周后，将其随机分为3组，即对照组（A组）、1个疗程组（B组）和3个疗程组（C组）。以B、C组高压氧治疗开始后4，8，12周作为观察时间点，对3组大鼠股骨近端骨质进行组织学观察，同时检测BMP-2和BMP-RI表达水平的变化。结果B组、C组股骨髓腔内血管数量多于A组，骨小梁较A组宽，骨皮质较A组厚，3组骨小梁／髓腔面积比（TCR）、皮质／髓腔面积比（CCR）、BMP-2平均染色面积百分比（DAP）、BMP-2染色平均光密度值（OD）、BMP-RI含量（BRC）在各观察时间点的关系均为：C组〉B组〉A组，各组间差异均具有统计学意义（P〈0．01）；A组TCR、CCR、DAP、OD、BRC均随时间延长呈降低趋势，但在3个观察时间点间的差异无统计学意义（P〉0．05），而B组、C组上述5个指标则呈升高趋势，其中BRC在各时间点间的差异均有统计学意义（P〈0．01），其它4项指标在4周与8周时、4周与12周时的差异均有统计学意义（P〈0．01），而在8周与12周时的差异无统计学意义（P〉0．05）。3组大鼠空骨陷窝率（ER）间差异具有统计学意义（P〈0．01）；A组的ER有随时间延长而增高的趋势，但在3个观察时间点间的差异无统计学意义（P〉0．05）；而B组、c组ER随时间延长而降低，在4周与8周时、4周与12周时的差异均具有统计学意义（P〈0．01），而8周与12周时的差异不具有统计学意义（P〉0．05）。结论 停止使用大剂量激素后，大鼠股骨近端组织的病理改变继续存在，并且在早期有加重的趋势；高压氧干预可以抑制甚至逆转这些病理改变；3个疗程高压氧治疗效果优于1个疗程干预。     

随机人群与精神分裂症患者微卫星DNA vWA多态性的关联性分析

背景精神分裂症的发病与遗传关系密切,但对相关基因定位相当困难,因此有必要先寻找有关遗传标志.目的通过对微卫星DNA vWA多态性的分析,了解精神分裂症与vWA有关等位基因的关联情况.设计以精神分裂症患者和随机人群为观察对象的病例-对照研究.单位大连市第七人民医院病房和大连医科大学分子生物学实验室.对象精神分裂症病例为2002-03/07大连市第七人民医院(精神病专科医院)住院患者32例,诊断符合<美国精神疾病诊断统计手册>第3版精神分裂症诊断标准,临床表现以阴性症状为主.随机人群样本为在大连市红十字血液中心随机选取的正常人血液样本123份,无精神疾病和严重躯体疾病,无明确亲缘关系.方法采取抗凝全血标本,用PE Profiler plus系统进行聚合酶链反应复合扩增,然后用ABI310型基因分析系统对扩增产物进行电泳和基因检测.计算出各等位基因的基因频率,并按Hardy-Weinberg平衡定律计算出各等位基因的理论频率与实际观测值,作吻合度检验和连锁分析;将精神分裂症患者与随机人群进行比较,按RR=Pd×(1-Pc)/Pc×(1-Pd)公式进行相对危险度分析并作统计学显著性检验(RR相对危险度;Pd精神分裂症患者基因频率;Pc随机人群基因频率),RR＞1为有易感倾向,RR＜1为有抗性倾向.找出vWA与精神分裂症相关基因的易感连锁或抗性连锁的等位基因.主要观察指标主要结局精神分裂症患者与随机人群vWA等位基因关联性分析.次要结局精神分裂症患者和随机人群vWA等位基因频率与Hardy-Weinberg定律的吻合度.结果两组受试对象的测试样本均纳入结果分析.①精神分裂症患者和随机人群vWA等位基因频率符合Hardy-Weinberg平衡定律(P＞0.05).②精神分裂症患者vWA-14的检出率(17.2%)低于随机人群(33.3%),差异有显著性(RR=0.415,P=0.014);精神分裂症患者vWA-17的检出率(31.3%)高于随机人群(19.5%),差异有显著性(RR=1.866,P=0.043);其他各等位基因检出率差异无显著性(P＞0.05).结论精神分裂症患者vWA-14的检出率显著低于随机人群,提示vWA-14在精神分裂症时可能会因某种原因而被负选择,其附近可能存在抵抗精神分裂症发病的基因.精神分裂症患者vWA-17的检出率显著高于随机人群,表明vWA-17与精神分裂症相关联,其附近可能存在精神分裂症易感基因.     

精索静脉扩张并血栓形成一例报告

患者,30岁.久立后突然出现右侧腹股沟及阴囊内肿物7 d,剧痛,伴恶心、无呕吐,于2008年4月12日入院.经卧床休息、局部热敷后疼痛渐缓解,肿物明显缩小.查体:右侧躯干、右上臂皮下见多处蓝色肿块,质软,按压可缩小,颜色变浅.右侧腹股沟区可扪及索条样肿物,沿精索走行,质韧、界限清、轻压痛,外环未扪及.双侧睾丸、附睾、左侧精索未及异常.血常规、出凝血时间正常.     

白藜芦醇对长期高热量饮食小鼠海马神经元及认知水平的影响

目的 通过观察白藜芦醇对长期高热量饮食小鼠海马神经元内质网应激凋亡相关因子的影响,探讨其对长期高热量饮食小鼠海马神经元及认知水平的神经保护机制.方法 采用高热量饮食诱发肥胖相关认知功能障碍小鼠模型,并给予白藜芦醇干预24周,测定其体重、糖耐量和胰岛素耐量,新物体识别实验和Morris水迷宫检测其认知水平,逆转录—聚合酶...     

白藜芦醇抑制NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡信号通路改善肥胖小鼠认知功能

目的 观察白藜芦醇(RES)对肥胖小鼠认知功能的保护作用,并探讨其海马组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体—细胞焦亡信号通路机制。方法 50只小鼠随机均分为：正常对照组、模型组和白藜芦醇高(100 mg/kg)、中(50 mg/kg)、低(25 mg/kg)剂量组,喂养6个月后,检测小鼠认知功能,海马组织细胞焦亡水平,海马组织沉默信息调节因子1(SIRT1)、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等蛋白表达情况。采用单因素方差分析或重复测量方差分析进行结果分析。结果 与模型组比较,白藜芦醇高剂量组小鼠终体质量降低(t=-14.453,P=0.021),海马组织细胞焦亡水平降低(t=-17.328,P=0.011),学习记忆能力改善,海马组织SIRT1蛋白表达升高(t=32.812,P<0.001),NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18和TNF-α蛋白表达均下降(t=-28.462,P=0.003;t=-38.148,P<0.001;t=-...     

慢性酒精中毒性肌病伴随免疫状态变化的实验研究

目的通过对慢性酒精中毒性肌病大鼠模型的免疫功能变化研究,探讨慢性酒精中毒性肌病发生时机体免疫功能的状态。方法构建SD大鼠慢性酒精中毒性肌病模型,同时设立对照组,对两组大鼠进行卵清蛋白抗原注射免疫,用ELISA法连续检测大鼠血清抗卵清蛋白抗体的变化,同时用流式细胞仪检测两组大鼠CD19阳性B细胞百分率。结果造模完成时,实验组大鼠体重与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05),HE染色与透射电镜结果显示实验组大鼠跖肌II型肌纤维受累明显,呈现慢性酒精中毒性肌病典型变化。随着慢性酒精中毒性肌病大鼠模型的逐渐建立,实验组大鼠体内抗卵清蛋白抗体效价持续下降,在7个检测点内与对照组大鼠相比,差异均有显著性意义(P<0.05)。同时,实验组大鼠CD19阳性的B细胞百分比也呈现显著下降的趋势,与对照组大鼠相比,差异有显著性意义(P<0.05)。结论在慢性酒精中毒性肌病大鼠模型机体中B细胞百分比呈现下降趋势,慢性酒精中毒性肌病发生时会同时伴有体液免疫功能低下情况发生。     

香菇C91-3转录组Unigene 28447基因的蛋白表达及其对细胞凋亡和周期的影响

[摘要]　目的〖ＨＴＫ〗　克隆香菇C91-3转录组中Unigene 28447基因,对其进行生物信息学分析,并研究该基因结构域的生物学活性。　方法　提取香菇C91-3菌丝体中的总RNA,用3′-Full RACE、5′-Full RACE方法获得香菇菌丝体Unigene 28447基因全长;构建基因表达载体,进行原核诱导表达,将表达蛋白进行纯化、复性。运用MTT法、流式细胞仪法研究蛋白对肿瘤细胞生长、周期及凋亡的影响。　结果　成功构建重组质粒pET32a（+）-Unigene,诱导重组蛋白表达,并进行纯化、复性。MTT法显示不同浓度蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用与对照组比较差异均有显著性意义（P<0.05）,流式细胞仪显示此蛋白具有诱导肿瘤细胞改变周期和凋亡的作用（P<0.05）。　结论　初步鉴定Unigene 28447基因的结构域具有抗肿瘤活性。     

胆囊原发性恶性黑色素瘤1例报告及文献复习

<正>1 临床资料患者,女,73岁,因“反复右上腹疼痛伴恶心、呕吐2 d”于2020年9月30日入湖南师范大学附属第一医院 (湖南省人民医院)肝胆外科住院。曾于当地医院就诊,诊断为“胆囊结石、胆囊炎”。患者既往无恶性肿瘤病史。入院查体：右上腹肌稍紧张,伴压痛、反跳痛,Murphy征阳性。实验室检查：白细胞计数 24.24×10⁹/L,中性粒细胞计数 22.07×10⁹/L,总胆红素 33.1 μmol/L,     

Bcl-2基因在人膀胱癌细胞中表达对CTL凋亡诱导作用的影响

目的:探讨Bcl-2基因在人膀胱癌细胞中表达对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)凋亡诱导作用的影响。方法:采用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2;应用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3.1(+)/Bcl-2导入膀胱癌BIU-87细胞,RT-PCR检测Bcl-2基因表达水平;不同浓度抗Fas单克隆抗体(Anti-Fasmab)模拟CTL的Fas-配体(Fas-L)处理转染与未转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、吖啶橙(AO)荧光染色法和流式细胞检测仪(FCM)分析细胞存活和凋亡情况。结果:酶切和核酸测序证明真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2构建成功。将重组质粒转染膀胱癌细胞后,RT-PCR分析表明,转染Bcl-2基因的BIU-87/Bcl-2细胞的Bcl-2基因表达水平较BIU-87细胞和转染空载体的BIU-87/neo细胞显著增高,P<0.01。An-ti-Fasmab作用后,BIU87/Bcl-2细胞的存活率显著高于BIU-87和BIU-87/neo细胞,P<0.05或P<0.01。3种细胞虽均发生凋亡的形态学改变,但BIU87和BIU87/neo细胞改变更为明显,两者的凋亡率分别为(25.33±3.00)%和(27.05±1.75)%,而BIU-87/Bcl-2细胞的凋亡率为(18.06±1.41)%,显著低于前两者,P<0.01。结论:Bcl-2基因高表达通过阻断CTL杀伤膀胱癌细胞的Fas/Fas-L途径,使膀胱癌细胞能够抵御免疫系统中CTL的攻击。