散发性结直肠癌中MMR与突变p53的表达

目的　探讨错配修复基因MMR(hMSH2与hMLH1基因 )在散发性结直肠癌发生中的作用。方法　采用PCR SSCP和PCR产物直接测序法对 41例散发性结直肠癌患者肿瘤组织及正常组织的hMSH2、hMLH1与p53基因进行检测。结果　41例散发性结直肠癌中,有 2例发生hMSH2基因突变,占 4. 88% (2 /41), 5例发生hMLH1基因突变,占 12. 20% (5 /41), 20例发生p53基因突变,占 48. 78% (20 /41)。hMLH1和hMSH2基因在p53突变患者的突变率 30. 00% (6 /20)显著高于p53未发生突变患者的突变率 4. 76(1 /21) (P<0. 05)。结论　部分散发性结直肠癌患者中存在MMR基因缺陷,其中hMLH1基因的作用大于hMSH2。MMR基因突变与p53突变密切相关。     

高压液相色谱法测定血小板腺苷酸环化酶活力

测定腺苷酸环化酶(AC)活力一般用同位素标记底物 ATP,测定反应生成的标记 cAMP量。为建立简便、高效、无放射性的 AC 活     

MHCI类样分子(MICA)在部分肿瘤组织和肿瘤细胞系中的表达及临床意义

目的:探讨MHC Ⅰ类样分子(MICA)在肿瘤组织和肿瘤细胞系中的表达及其临床意义.方法:分别采用半定量RT-PCR和免疫组织化学技术检测肿瘤组织和肿瘤细胞系MICA表达,MTT法测定NK细胞细胞毒活性.结果:人红白血病细胞K562、喉癌细胞系Hep2、宫颈癌细胞系Hela、肝癌细胞系HepG2和结直肠癌细胞系HT29均有MICA mRNA和蛋白表达,而人Burkitt淋巴瘤Raji和高转移肺癌PG不表达MICA.MICA表达阳性的肿瘤细胞对NK杀伤敏感性明显高于MICA阴性者.多数肿瘤组织存在MICA mRNA和蛋白表达,但并非在所有肿瘤均有表达,癌旁组织均无MICA表达.结论:肿瘤细胞表达MICA可激发NK细胞对肿瘤的杀伤,NKG2D及其配体的相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用,肿瘤细胞分泌sMICA分子为肿瘤发生免疫逃逸的机制之一.     

尿毒清对阿霉素肾病大鼠致纤维化因子表达的影响

目的观察尿毒清对阿霉素（ADR）肾病大鼠肾脏转化生长因子 β1（TGF β1）、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP 1)、纤溶酶原激活物抑制物1 (PAI 1)和骨调素(OPN)mRNA 表达的影响,探讨尿毒清治疗慢性肾脏疾病的机制。方法成年雄性SD大鼠24只,采用单侧肾切除加重复尾静脉注射ADR的方法制作ADR肾病模型,随机分为正常组（N组）、模型组（M组）、尿毒清组（Ni组）、贝那普利组（B组）4组,每组6只。用药第4、8周后观察各组大鼠24?h尿蛋白定量、血脂、血浆总蛋白（TP）、血浆白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）的水平,实时荧光定量PCR测定第8周肾组织中TGF β1、TIMP 1、PAI 1及OPN mRNA的表达。结果尿毒清和贝那普利均能减少ADR肾病大鼠尿蛋白,降低BUN、Scr,升高血浆蛋白,纠正脂代谢紊乱,减少TGF β1、TIMP 1、PAI 1及OPN mRNA的表达,与M组相比有显著差异（P＜0.01）;而Ni组PAI 1 mRNA水平较B组显著降低（P＜0.01）。结论尿毒清可下调ADR肾病大鼠肾脏组织TGF β1、TIMP 1 、PAI 1及OPN mRNA的合成,可能是其治疗慢性肾脏疾病的重要机制之一。     

人白细胞介素-16真核表达载体的构建及其对Th2型肿瘤细胞的促逆转作用

构建人IL-16真核表达载体,分析其对Th2型肿瘤细胞的逆转作用。方法用RT- PCR技术从人外周血单个核细胞中获取IL-16cDNA,插入PUC-18T载体并测序,构建并鉴定真核表达载体PcDNA3-IL-16,转染KarpasT淋巴瘤细胞,分析阳性克隆中IFNγ,IL-2,IL-4,IL-6,IL-13,TNFα和IL-16等细胞因子的表达状况。结果序列测定显示所克隆的人IL-16cDNA与基因库中所登录的序列完全一致,EcoRI和BamHI双酶切及PCR鉴定显示所构建的真核表达载体PcDNA3-IL-16完全正确,RT-PCR显示转染PcDNA3-IL-16的KarpasT淋巴瘤细胞高表达IL-16mRNA,同时,Th1类细胞因子IFNγ表达明显增高,Th2类细胞因子IL-4,IL-6,IL-13表达降低,MTT法显示KarpasT淋巴瘤细胞的增殖受到明显抑制。结论成功构建了真核表达载体PcDNA3-IL16,转染KarpasT淋巴瘤细胞后使其细胞因子类型由Th2型向Th0型逆转,且生长受到明显抑制,表明向肿瘤细胞转染人IL-16是一种有用的肿瘤生物治疗方法。     

人白细胞介素-18基因克隆、重组表达及活性测定

白细胞介素 18（ Interleukin 18, IL-18）是单核巨噬细胞系统分泌的重要的 Th1类细胞因子,对 NK细胞的成熟、活化起到重要的调节作用,可以与 IL-12协同增强 NK细胞及 Th1细胞的细胞毒活性,并在细胞免疫的启动过程中起到重要作用。 IL-18基因缺陷鼠的细胞免疫不能被启动, NK细胞的体外活化能力明显下降。小鼠体内外实验显示 IL-18具有较显著的抗肿瘤效应。 IL-18为相对分子质量 18 500的单链活性蛋白,没有 N-糖基化位点,不形成链内二硫键,适于在大肠杆菌（ E.coli）中表达。本实验根据 IL-18成熟蛋白的 cDNA序列,设计引…     

高脂血症患者血浆血管紧张素Ⅱ水平与其血小板1型受体表达的相关性

目的通过观察高胆固醇血症患者血管紧张素Ⅱ与其1型受体表达的变化,探讨肾素—血管紧张素系统在动脉粥样硬化发生中的作用。方法在本院健康查体中心随机选取健康对照40例(对照组)和高胆固醇血症患者60例(高脂组),分别自肘静脉取血,分离血清、血浆并提取血小板。放射免疫法检测血浆的血管紧张素Ⅱ水平,逆转录聚合酶链反应和Western blot方法分别检测血小板1型受体表达的mRNA和蛋白质表达水平。结果高脂组的血浆血管紧张素Ⅱ水平较对照组明显升高(92.13±25.27比50.85±21.12,P<0.01),血小板的1型受体mRNA和蛋白质表达较对照组明显升高(0.93±0.22比0.25±0.06,P<0.01;1.35±0.32比0.42±0.10,P<0.01);高脂组血管紧张素Ⅱ与1型受体表达的相关分析显示,1型受体表达与血浆的血管紧张素Ⅱ呈显著正相关(r=0.369,P<0.01)。结论高胆固醇血症患者血小板1型受体的表达增高与血浆血管紧张素Ⅱ浓度增加有关。     

小儿肾母细胞瘤Th1／Th2类细胞因子的漂移及临床意义

采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术,检测正常儿及肾母细胞瘤患儿肿瘤组织,手术前后外周血Th1/Th2类细胞因子的基因表达,观察肾母细胞瘤患儿手术前后Th1/Th2类细胞因子的表达和漂移情况,结果显示肾母细胞瘤患儿外周血,肿瘤组织均出现明显的Th2类细胞因子偏移趋势,手术和化疗可促进Th1/Th2平衡向Th1漂移,肾母细胞瘤患者体内Th2类细胞因子的强势表达,可能与肾母细胞瘤的发生发展有关,Th1/Th2平衡漂移是观察机体抗肿瘤免疫动态变化的良好指标。     

新辅助化疗对Ⅲ期非小细胞肺癌骨髓中CK19表达的影响

目的:探讨新辅助化疗与Ⅲ期非小细胞肺癌骨髓微转移的关系.方法:应用RT-PCR技术,术中取肋骨骨髓检测新辅助化疗患者(化疗组)36例及直接手术患者(对照组)35例Ⅲ期非小细胞肺癌患者骨髓中CK19的表达情况.结果:化疗组CK19的阳性率为22.2%(8/36),对照组CK19的阳性率为45.7%(16/35),两组差异显著(P=0.026).新辅助化疗疗效与CK19的表达呈负相关(P=0.026),rs-0.372.COX模型分析提示,化疗疗效、CK19的表达是影响化疗组预后的独立指标.结论:新辅助化疗可减少Ⅲ期非小细胞肺癌骨髓微转移的发生,通过检测骨髓中CK19的表达可指导临床治疗.