灵芝孢子油对肺腺癌癌性胸水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用

目的:研究灵芝孢子油对肺腺癌的癌性胸水中原代肿瘤细胞的抗癌作用。方法:体外培养肺腺癌细胞系A549,用CCK-8法检测灵芝孢子油对A549细胞的体外抗肿瘤作用。收集12例经病理确诊的肺腺癌患者的癌性胸水分离原代肿瘤细胞,用CCK-8法检测灵芝孢子油及临床常用化疗药物对原代肿瘤细胞的药物敏感性;流式细胞仪检测灵芝孢子油对原代肿瘤细胞的凋亡诱导作用,RT-PCR检测灵芝孢子油对凋亡相关蛋白基因bax及bc l-2 mRNA表达的影响。结果:灵芝孢子油对5例癌性胸水中原代肿瘤细胞的IC50平均值为0.28±0.04μl/m l,与对A549细胞的IC500.46±0.08μl/m l无显著差异(P>0.05)。在各测试药物浓度(TDC)下,灵芝孢子油、多西紫杉醇、顺铂和健择对原代肿瘤细胞的抑制率分别为48.7%±3.3%,31.6%±14.1%,30.2%±11.6%,51.4%±5.6%,灵芝孢子油与这些化疗药物的抗肿瘤作用无显著差异(P>0.05)。灵芝孢子油显著促进原代肿瘤细胞凋亡,对原代肿瘤细胞中凋亡相关蛋白bax mRNA有明显上调作用,对bc l-2 mRNA有明显下调作用。结论:灵芝孢子油对肺腺癌的癌性胸水原代肿瘤细胞有较好的抗癌作用。     

中国弯颈霉胞外多糖对小鼠免疫细胞影响的初步研究

目的:测定中国弯颈霉(Tolypocladium sinense)胞外多糖对体外小鼠免疫细胞功能的影响.方法:将中国弯颈霉在适宜的条件下进行培养,收集培养液并提取胞外多糖(EPS).采用细胞培养的方法测定EPS对体外培养的小鼠巨噬细胞、胸腺和脾脏淋巴细胞的影响.结果:EPS不仅能够显著提高小鼠巨噬细胞吞噬中性红的能力和对肿瘤细胞的杀伤能力(P＜0.05),而且还能显著促进小鼠胸腺淋巴细胞的增殖(P＜0.05),但EPS对体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞的增殖没有显著影响.结论:胸外多糖EPS在一定程度上对小鼠的细胞免疫功能有增强作用.     

肿瘤坏死因子相关凋亡配体抗肿瘤作用研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TNFrelatedapoptosisinducingligand,TRAIL)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员。TRAIL与其受体结合后能选择性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常组织细胞没有明显的伤害。以TRAIL为靶点的肿瘤治疗方法受到众多学者的关注。     

系统性红斑狼疮患者骨髓间充质干细胞多向分化能力异常

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)多向分化能力是否存在异常. 方法 密度梯度离心法和贴壁筛选法分离培养MSCs,定向诱导骨髓MSCs向脂肪和成骨细胞分化,脂肪细胞经油红O染色鉴定并定量,成骨细胞经茜素红S染色鉴定.将骨髓MSCs与羟基磷灰石共孵育,将共孵育物植于裸鼠皮下,8周后常规苏木素-伊红(HE)染色.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2(PPARγ-2)、脂蛋白酶(LPL)、Runx2/CBFA1、降钙素(osteocalcin) mRNA的表达水平.结果 SLE骨髓MSCs分化成脂肪细胞比例低于健康埘照组,油红O染色定量低于健康对照组[(35±7)%与(80±5)%],(0.14±0.04与0.27±0.04),LPL mRNA表达低于健康对照组(0.369±0.020与0.481±0.038),两组PPARγ-2 mRNA表达差异无统计学意义(0.421±0.052与0.441±0.012).SLE骨髓MSCs分化成骨细胞后形成钙结节低于健康对照组[(35±4)%与(45±4)%],Runx2/CBFA1、osteocalcin mRNA表达低于健康对照组(0.371±0.000与0.563±0.069),(0.819±0.023与0.962±0.049);羟基磷灰石与SLE患者骨髓MSCs共孵育后移植裸鼠皮下8周后,成骨细胞形成明显少于健康埘照组. 结论 SLE骨髓MSCs成脂和成骨分化能力存在异常,提示SLE患者骨髓MSCs存在缺陷.     

人胃腺癌BGC823细胞Midkine高表达前后基因表达谱芯片分析

目的：用基因芯片技术分析、筛选Midkine高表达前后胃腺癌相关基因谱的差异表达。方法：建立Midkine高表达BGC823胃腺癌细胞系,提取细胞总RNA,逆转录Cy3、Cy5标记cDNA探针,应用晶芯唧表达谱芯片,分析差异表达的基因。结果：发现Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞有显著性表达差异的基因共有550个,其中上调基因407个,下调基因143个。对550条差异表达基因进行初步功能分类分析,结果表明这些基因与Midkine促进胃腺癌发病机制存在相关性。结论：Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞部分功能基因存在显著的表达差异,多数差异表达的基因参与细胞黏附、细胞骨架形成、细胞周期以及细胞代谢等过程。     

原癌基因Zbtb7A的POZ区在大肠杆菌中的表达及其多抗制备

目的:原癌基因Zbtb7A在肿瘤的发生发展过程中起"分子开关"的作用.本研究制备Zbtb7A蛋白POZ功能区重组蛋白及相应的多克隆抗体. 方法:根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化其编码序列,用2步法PCR合成目的片断,并将其构建入原核表达载体pET-26b(+)中.重组表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),用0.5mmol IPTG诱导重组蛋白表达.所获重组表达蛋白经15%SDS-PAGE分离,切胶回收目的蛋白,研磨后免疫家兔制备抗血清.收集的抗血清经饱和硫酸铵沉淀和G蛋白柱联合纯化,用Western blot证实对纯化的抗血清进行鉴定.结果:获得了密码子优化后的Zbtb7A POZ区的编码序列,并成功地获得了其重组蛋白,制备了高纯度的抗POZ区多克隆抗体. 结论:所获得的重组POZ区蛋白及其多克隆抗体可应用于对Zbtb7A的进一步研究.     

薏苡仁油诱导乳腺癌细胞系MCF-7细胞的凋亡及机理研究

目的研究薏苡仁油对人乳腺癌细胞系MCF-7的凋亡诱导作用及机理。方法在体外设定不同浓度的薏苡仁油处理MCF-7细胞系的实验组,细胞培养24 h后,用MTT法测定其细胞活力;碘化丙啶(PI)染色后流式细胞仪检测其凋亡情况;罗丹明123(Rodamine 123)标记后于酶标仪530 nm处测定其荧光强度值以检测线粒体膜电位情况。结果与对照组相比,随薏苡仁油浓度的上升,MCF-7细胞活力和增殖呈剂量依赖型的下降;流式细胞仪检测PI染色显示,各处理组的MCF-7细胞凋亡率随作用浓度的上升而增强,最高浓度组尤为明显;在高浓度组,罗丹明123荧光强度明显降低。这些结果表明薏苡仁油能抑制MCF7细胞的活力和增殖;诱导其凋亡;罗丹明荧光强度的减少,说明MCF-7线粒体膜电位有倒塌和去极化的情况发生,提示MCF-7细胞的凋亡与线粒体有关。结论薏苡仁油可明显促进MCF-7细胞的凋亡,其凋亡可能与线粒体破坏有关。     

Midkine特异的shRNA对胃肿瘤细胞BGC823增殖及凋亡的影响

目的研究shRNA干扰midkine对胃肿瘤细胞BGC823增殖能力及凋亡的影响。方法构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染BGC823细胞,运用CCK-8检测细胞的增殖能力,PI染色检测细胞凋亡情况。结果成功转染重组体的BGC823细胞增殖明显受到抑制（P〈0.01）细胞形成克隆数明显降低（P〈0.01）,并且有明显的亚二倍体峰出现（P〈0.05）。结论针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞BGC823 midkine表达,细胞增殖能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine基因靶向治疗提供一定的实验依据。     

Midkine 与肿瘤关系的研究进展

 Midkine（MK）是1988年Kadomatsu等用差异杂交的方法在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系HM-1细胞cDNA文库中筛选出的一种新基因。它与PTN（多效营养因子，又称肝素结合相关因子）基因结构很相似，共同组成MK家族。二者均由5个外显子和4个内含子组成，其中外显子Ⅰ为非翻译区，外显子Ⅱ编码信号肽和N端几个氨基酸残基，Ⅲ和Ⅳ编码核心区域氨基酸残基，Ⅴ编码C端氨基酸残基，只是外显子Ⅴ和内含子大小不等。人的MK基因位于p11.2，该基因上游有视黄酸应答因子的位点、IgG增强子元件、AP-1和NF—kB结合位点、WT1（Wilm’s肿瘤抑制基因产物1）的作用位点（5＇-GCGGGGGGCG-3’）及固醇类／甲状腺激素受体结合位点，这些位点均与基因的表达调控相关，见图1。     

MSCs上清可减轻雷公藤甲素对KGN细胞的损伤作用

目的:探讨MSCs上清对雷公藤甲素损害卵巢颗粒细胞的缓解作用及机制。方法:用CCK-8法分析了雷公藤甲素对KGN活力的影响;用混合酶消化法分离脐带来源的MSCs,并用流式细胞术对其表型进行了鉴定;收集MSCs上清,用CCK-8法及PI法检测MSCs上清对雷公藤甲素损伤的KGN活力及周期的影响;用Real-time PCR法对周期调节相关基因CDKN1A的表达进行检测。结果:雷公藤甲素能够通过抑制KGN活力及阻滞KGN在S期抑制其生长;MSCs上清不影响正常KGN的增殖和周期,但可提高雷公藤甲素损伤的KGN细胞的活力,缓解雷公藤甲素引起的S期阻滞,抑制雷公藤甲素对KGN的CDKN1A表达的异常上调。结论:MSCs上清可能减轻雷公藤甲素对KGN细胞的损伤作用。