人端粒酶催化亚单位及其相关蛋白在骨肿瘤中的表达

目的：研究骨肿瘤中端粒酶相关基因中,人端粒酶催化亚单位（human elomerase catalytic subunit,hTERT)和人端粒酶相关蛋白（human telomerase associated protein,TP1)两个重要成分的表达及对评估肿瘤良、恶性的意义。方法：提取50例手术切除骨肿瘤组织、2种人成骨内瘤细胞系Saos－2、OS732和原代培养人成骨细胞的总RNA。用一步RT－PCR方法检测hTERT和TP1mRNA的表达。结果：所有骨肿瘤标本及细胞系均检测到TP1的表达。hTERT在17例良性骨肿瘤、33例骨肉瘤、2种人成骨肉瘤细胞系和人成骨细胞的表达率分别为64．7％、57．6％、0％和0％。良、恶性肌肿瘤间hTERT表达的差异不具有显著性（P＞0．05）,不同分化程度骨肉瘤间hTERT表达的差异也不具有显著性（P＞0．05）。结论：一步RT－PCR是检测端粒酶亚单位的有效方法。hTERT和TP1表达水平的上调在骨肿瘤恶性进展中可能不起主要作用,在骨肿瘤发展和维持中可能有替代性（ALT）机制导致细胞永生化。     

脂肪组织源性肿瘤中c-myc和p53基因的异常表达

目的：探讨脂肪组织源性肿瘤与ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３基因的关系。方法：采用ＬＳＡＢ免疫组化法,检测６２例脂肪组织源性肿瘤及瘤样病变ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３蛋白表达。结果ｃ－ｍｙｃ在正常脂肪组织、脂肪组织良性病变中几乎不表达,主要在脂肪肉瘤中表达。ｐ５３只在脂肪肉瘤中表达。分化较高类型脂肪肉瘤ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３表达阳性率明显低于分化较低类型脂肪肉瘤,脂肪肉瘤中,ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３表达呈正相关。结论：实验结果提示     

生物活性羟基磷灰石涂层的动物实验观察

ＨＡ涂层假体有许多有关涂层的问题尚需解决。我们研制出了表面仿生型生物活性双梯度涂层 ,体外试验证实 ,界面结合强度达 3 8Ｍｐａ[1] 。1.材料和方法 :钛合金植入体 (Ｔｉ)、带羟基磷灰石涂层的钛合金植入体(ＨａＴｉ)和ｒｈＢＭＰ 2复合涂层植入体(ｒｈＢｍｐ 2ＨａＴｉ)的制备 ,其中 3 0根棒制成粗糙表面的Ｔｉ植入体 ,另外 60根予等离子喷涂制成ＨａＴｉ植入体。为长 18 0ｍｍ、直径 4 2ｍｍ。采用直接涂抹、吸收复合方法组装ｒｈＢＭＰ 2 [2 ] 。按ｒｈＢＭＰ 22 5ｍｇ/个植入体复合。共制备ｒｈＢｍｐ 2ＨａＴｉ3 0个。按术后喂养 …     

成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合的机制研究

背景成骨细胞的同种异体移植,因其独特的优点,被认为是解决衰老骨重建修复较为理想的方法.目的研究幼龄成骨细胞移植对促进SD老龄鼠骨质疏松性骨折愈合的作用机制.设计配对设计的实验研究.地点和对象本实验完成于中山大学动物试验中心及中山大学医学院病理教研室.SD清洁级大鼠,雌性,15～18月龄,体质量400～450 g,96只;雄性,3～7 d龄,SD清洁级乳鼠,20只,均由中山大学动物试验中心提供.干预建立SD大鼠老龄骨质疏松骨折的动物模型,分为两组,每组48只.实验组将SD雄性乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD雌性鼠骨质疏松性骨折部位.对照组注入无血清培养液.手术后3,7,10,14,21,28,56,84 d处死,用X射线、原位杂交、免疫组化及图像分析检测骨折愈合不同时相的标本.主要观察指标①用X射线及病理切片观察试验组与对照组骨折愈合情况.②在骨折不同阶段,地高辛标记鼠Y染色体探针的阳性表达特点,以雄性Y染色体为标志,追踪移植细胞的远期存活及转归.③VEGF,TGF-β1及VEGFmRNA,TGF-β1mRNA的动态表达.结果实验组骨质疏松性骨折愈合的速度及程度均高于对照组;实验组成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存,生长繁殖,促进骨质疏松性骨折愈合,并于移植84 d后仍存活.实验组VEGF,VEGFmRNA在7 d左右可见有阳性表达的细胞,14 d有分泌高峰,其中以软骨细胞中阳性最强,21 d分泌量开始下降,56 d后基本消失.TGF-β1,TGF-β1mRNA在3 d左右可见阳性细胞,7～10 d有分泌高峰,其中以成纤维细胞、软骨细胞中阳性最强,14 d分泌量开始下降,56 d后完全消失.而对照组未见明显分泌高峰.结论同种异体成骨细胞移植到老年大鼠骨质疏松性骨折部位,参与骨折修复的各个环节,可至少存活84d.TGF-β1,VEGF的动态表达对促进老年骨质疏松性骨折愈合具有重要意义.     

成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中相关因子的动态表达

目的:探讨在幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中,生长因子TGF-β1,VEGF,bFGF动态表达的生物学意义,研究幼龄成骨细胞移植对促进SD老龄鼠骨质疏松性骨折愈合的作用机制。方法将SD乳鼠颅骨体外培养的成骨细胞移植到SD鼠骨质疏松性骨折部位,用原位杂交及免疫组化检测骨折愈合不同时相的标本:bFGFVEGF,TGF-β1及bFGFmRNA,VEGFmRNA,TGF-β1mRNA的动态表达。结果:实验组:成骨细胞移植后可在受体骨折部位局部生存,生长繁殖,bFGF、bFGFmRNA及VEGF、VEGFmRNA均在7d左右可见有阳性表达的细胞,14d有分泌高峰,TGF-β1,TGF-β1mRNA在3d左右可见阳性细胞,7～10d有分泌高峰,而对照组未见明显分泌高峰。结论:成骨细胞移植到老年大鼠骨质疏松性骨折部位TGF-β1,VEGF,bFGF的动态表达对促进老年骨质疏松性骨折愈合具有重要意义。     

成骨性肿瘤中p27基因mRNA与蛋白的表达及其意义

探讨ｐ２７ｍＲＮＡ与蛋白在成骨性肿瘤中的表达状况，了解其与肿瘤组织学类型，分化程度及生物学和赤的关系。方法：采用免疫组化和非放射性核酸原位交技术检测成骨性肿瘤中Ｐ２７蛋白和ｍＲＮＡ的表达状况。结果：骨瘤、骨母细胞瘤中Ｐ２７蛋白表达，主要定位于胞核（８５．７％、７５％），骨肉瘤中低表达，胞核表达极低（４．７％），两者间差异显著（Ｐ〈０．０１）。Ｐ２７蛋白有骨肉瘤中的表达与肿瘤的浸润、复发和转移有关。     

成骨细胞移植促进老龄鼠骨质疏松性骨折愈合过程中VEGF的动态变化

目的：动态观察在幼龄成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合过程中，VEGF在不同时相的表达及其生物学意义。方法：通过建立老龄骨质疏松SD大鼠骨折的动物模型，并将体外培养的SD雄性乳鼠成骨细胞移动到SD雌性鼠老年骨质疏松性骨缺损部位，利用免疫组化及原位杂交检测骨折愈合过程中不同时间相的移植标本VEGF、VEGFmRNA的表达，并作图像分析、绘出其动态变化图。结果：实验组VEGF、VEGFmRNA均在7d左右可见有阳性表达的细胞，14d有分泌,高峰其中以软骨细胞中阳性最强，21 d分泌量开始下降，56d后基本消失。而对照且未见明显分泌高峰。结论；成骨细胞细胞促进老龄鼠骨质疏松性骨折愈合，其机制可能是通过促进VEGF的转录和表达，从而促进骨折部位建立良好的血液循环，加速骨形成。     

人肺癌细胞株浸润人胚胸膜和心包膜的形态学观察

本文报道利用两株人肺癌细胞（ＰＣ８４０４５，ＰＬＡ８０１），对人胚胸膜和心包膜进行体外浸润实验，观察肿瘤细胞的浸润特性。形态学观察表明肿瘤细胞浸润过程有粘附、溶解和移动等步骤，并有吞饮现象及类似基底膜结构物质形成，此实验设计具有成功率高、简单易行及符合解剖结构的特点，对研究肿瘤浸润机理及筛选抗癌药物有用。     

N端截短的视网膜母细胞瘤基因对人骨肉瘤细胞株SaOS-2生长的影响

目的研究N端截短的视网膜母细胞瘤基因(Rb^66)对骨肉瘤细胞Saos-2生长的影响。方法构建携带Rb^66cDNA片段的真核细胞表达载体pcDNA3-1-Rb，用脂质体LIPOFECTAMIME^TM2000将真核表达载体pcDNA3-1-Rb、空载体对照pcDNA3-1转染至SaOS-2细胞中。RT—PCR及免疫细胞化学检测转染后SaOS-2中Rb^66mRNA及蛋白的表达；观察细胞形态的改变；测定细胞倍增时间及生长曲线的改变；流式细胞仪检测对细胞周期的影响。结果成功地将N端截短的Rb^66cDNA导入骨肉瘤细胞SaOS-2中，并在mRNA及蛋白水平获得了表达。转染后的SaOS-2细胞胞浆展开，细胞核浆比例变小；Rb^66导入后，SaOS-2细胞生长减慢，群体倍增时间延长，细胞周期呈现G．期阻滞。结论Rb^66可通过阻止细胞G1→S期进展而抑制骨肉瘤细胞SaOS-2的增殖。