反向重复序列法构建神经病靶标酯酶RNA干涉表达质粒

目的构建基于通用真核表达载体的人神经病靶标酯酶双链RNA的稳定表达载体。方法在正义和反义引物两端分别加上EcoRⅠ和BamHⅠ的识别位点扩增得到神经病靶标酯酶活力域序列,构建含有目标基因的倒置重复序列的双链RNA表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,酶切分析鉴定重组载体。脂质体法转染到Hela细胞中瞬时表达重组载体,酶活力测定其对细胞内神经病靶标酯酶活力的影响。结果成功构建了NTE双链RNA稳定表达载体pcDNA.NTE.dsRNA,表达该载体细胞内NTE活力明显下降至对照细胞的20%左右。结论采用反向重复序列法将靶标基因的编码序列正反向插入到通用真核细胞表达载体中,是构建哺乳细胞基因双链RNA稳定表达载体的有效方法。     

氨硫脲的三种容量测定法的比较

关于氨硫脲即对乙酰氨基苯甲醛縮氨硫脲的含量测定法文献的报导是很多的。重量法的原理是根据氨硫脲与硝酸銀生成銀盐的作用。在容量法中有日本藥局方注解追补的酸鹼滴定法;以及硝酸銀法、溴量法、碘量法和三氯化铁法。很多比色法是采用酸或鹼使氨硫脲的乙酰基脫下而形成游离氨基,再經重氮化反应和偶合反应成为有色物質而比色的。此外,还有使氨硫脲与-溴代苯乙酮及与Grote氏試剂作用而比色的方法。     

Effect of mosapride on Kv4.3 potassium channels expressed in CHO cells

Mosapride and cisapride are gastroprokinetic agents with 5-hydroxytryptamine₄ receptor agonist activity and have been widely used in the treatment of a variety of gastrointestinal disorders. The effects of mosapride and cisapride on cloned Kv4.3 channels stably expressed in Chinese hamster ovary cells were investigated using the whole-cell patch-clamp technique. Mosapride and cisapride inhibited Kv4.3 in a concentration-dependent manner with IC₅₀ values of 15.2 and 9.8 μM, respectively. Mosapride accelerated the rate of inactivation and activation of Kv4.3 in a concentration-dependent manner and thereby decreased the time to peak. The rate constants of association (k ₊₁) and dissociation (k _?1) for mosapride were 9.9 μM^?1 s^?1 and 151.3 s^?1, respectively. The K _D (k _?1/k ₊₁) was 16.2 μM, similar to the IC₅₀ value calculated from the concentration–response curve. Voltage-dependent inhibition by mosapride was observed in the voltage range for channel opening but was not observed over a voltage range in which all Kv4.3 channels were open. Both the steady-state activation and inactivation curves of Kv4.3 were shifted in the hyperpolarizing direction in the presence of mosapride. Mosapride also caused a substantial acceleration in closed-state inactivation of Kv4.3. Mosapride produced use-dependent inhibition, which was consistent with a slow recovery from inactivation of Kv4.3. M1 and norcisapride, the major metabolites of mosapride and cisapride, respectively, had little or no effect on Kv4.3. These results indicate that mosapride inhibits Kv4.3 by both preferential binding to the open state of the channels during depolarization and acceleration of the closed-state inactivation at subthreshold potentials.     

异种(牛)脱细胞真皮基质-游离空肠复合体构建实验研究

目的 研究异种(牛)脱细胞真皮基质-游离空肠复合体的构建技术,以期解决游离空肠移植重建长段气管术后肠腺分泌的问题。 方法 选择10只杂种犬,制备去上皮游离空肠段,将剪成合适大小的异种(牛)脱细胞真皮基质覆盖于游离空肠基底膜表面,并用覆膜镍钛合金支架支撑固定,将构建好的复合体移至腹膜外与腹部皮肤之间,分别于术后7 d、14 d、1个月、3个月和6个月后取出,查看复合体的生长情况。 结果 10只实验犬中,有1只因肠粘连和伤口感染死亡而未能完成实验,余9只实验犬术后存活良好。术后7 d、14 d肉眼观察和病理检查,在游离空肠内表面均见有异种(牛)脱细胞真皮基质成分,表面黏膜层可见部分鳞状上皮化生;术后1个月、3个月、6个月肉眼和病理检查均未再发现异种(牛)脱细胞真皮基质成分,游离空肠内表面几乎全部化生为复层鳞状上皮。 结论 合适大小的异种(牛)脱细胞真皮基质覆盖在去上皮游离空肠内表面,可以促进游离空肠内表面的鳞状上皮化生,抑制肠腺分泌。覆膜镍钛记忆合金支架有一定的弹性,可以很好的对异种(牛)脱细胞真皮基质-去上皮游离空肠复合体起到支撑固定作用。     

OSAHS多层面手术疗效评价

目的：探讨OSAHS患者多平面手术治疗的效果。方法：115例OSAHS患者行UPPP,其中加鼻中隔偏曲矫正术18例,加鼻中隔偏曲矫正术、下鼻甲部分切除术26例,加颏舌肌前徙术和舌体部分切除术1例,加舌体部分切除术5例。其中伴鼻部疾病和（或）舌体肥大、AHI〉40和（或）BMI〉30的患者术前行气管切开后插管全身麻醉。结果：术后长期随访,治愈43例（AHI〈5）,有效46例（AHI降低≥50%）,无效26例;有效率为77.4%。结论：通过多平面手术治疗OSAHS,可提高有效率;对于重度患者采用术前气管切开后插管全身麻醉,能有效预防术后严重并发症的发生。     

控制成分输血输注速率提高新生儿换血疗效

目的探讨序贯调节悬浮红细胞和血浆输注速率进行新生儿换血的有效性及安全性。方法选择2006年10月至2013年9月我科收治的需要进行换血治疗的严重高胆红素血症患儿,随机分为对照组和观察组,对照组将所需红细胞与血浆按1∶1等速输注进行换血;观察组换血总量前1/3时,输注血浆速率为红细胞的两倍,中1/3时二者输注速率相等,后1/3时输注红细胞速率为血浆的两倍。换血前、中、后检测血常规、电解质、血糖及血胆红素等指标,并密切观察和记录患儿生命体征及经皮血氧饱和度(Sa O2)。结果对照组纳入40例,观察组纳入42例。两组患儿换血治疗后胆红素水平均明显降低[对照组:(222.1±30.3)μmol/L比(455.5±52.3)μmol/L,观察组:(207.3±27.8)μmol/L比(451.2±48.6)μmol/L,P<0.001],与对照组比较,观察组换血后胆红素水平更低,差异有统计学意义(P<0.05);观察组换血后血红蛋白含量明显高于对照组[(151±22)g/L比(135±26)g/L,P<0.01]。两组患儿换血相关并发症,如高血糖、血小板减少、低钙血症和低钠血症等均可在短时间内恢复正常。结论采用序贯调节悬浮红细胞和血浆的输注速率进行换血,在不增加用血量基础上,能明显降低胆红素水平和贫血的发生,且安全有效。     

早产儿用氧

获得充分的组织氧合又避免氧化应激损伤是早产儿最适氧疗策略。然而,早产儿出生后不同时期最佳目标血氧饱和度值不同,目前仍缺少指导临床医生安全用氧的确凿证据。本文系统介绍了目前早产儿出生时、出生后早期和晚期,以及窒息复苏时氧疗策略及其管理。     

血流阻断技术在肝脏外科中的应用

肝血流阻断技术的不断改进及创新促进了肝脏手术质量的提高,并且成为近年肝脏外科进步的重要标志之一.本文对目前临床常用的一些阻断技术及改进做一综述,并评价其临床效果.