山东沿海地区高尿酸血症患者SLC22A12基因的多态性

目的:观察山东沿海地区人群SLC22A12基因的多态性,分析其与高尿酸血症的关系。方法:该实验于2005-11/2006-04收集病历于2006-05/07完成实验室部分。纳入青岛大学医学院附属医院门诊或青岛市社区高尿酸血症患者138例为高尿酸血症组,同时选取青岛市区健康者117人健康对照组。两次来访,初访时进行详细的记录,包括用药情况、身高、体质量、腰围、腹围、体质量指数、血压以及家族史。再访时隔夜空腹12h抽血测血尿酸、血糖、血脂、肝酶等,分析两组生化指标的差异。所有标本采用PCR、DNA序列分析、病历对照等方法对138例高尿酸血症者和117例健康对照者基因进行分析。结果:高尿酸血症组患者138例,健康对照组117人全部进入结果分析,无脱失。①健康对照组和高尿酸血症组一般情况比较,年龄、血肌酐、空腹血糖两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。体质量指数、腰臀围比、血压、血尿酸、总胆固醇、三酰甘油空腹血糖两组比较差异有显著性意义(P<0.001)。②健康对照组CC CT基因型和TT基因型频率与高尿酸血症组比较差异有非常显著性意义(77.8%,97.1%;22.2%,2.9%;P<0.001)。③健康对照组CC CT基因型和TT基因型相对应的血尿酸值比较差异有显著性意义[(271±33.5),(301±37.8)mmol/L,P<0.01]。高尿酸血症组CC CT基因型和TT基因型相对应的血尿酸比较差异无统计学意义[(457±71.2),(459±80.1)mmol/L,P>0.05]。结论:高尿酸血症和正常人hURAT1基因同样存在多个突变位点,基因的多态性与血清尿酸水平有关。SLC22A12基因C258T位点多态性与中国沿海地区高尿酸血症有关。     

构建双突变型低氧诱导因子1α腺病毒载体的实验

目的:前期实验已成功构建无突变及564位是单突变腺病毒载体。在此基础上构建人双突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体,为进一步研究低氧诱导因子1α基因及其突变体的临床应用奠定基础。方法:实验于2005-12/2006-12在南方医院心内科重点实验室完成。①实验材料:限制性内切酶PacI(NEB),PI-SceI、I-CeuI(Clontech);IPTG、X-Gal(Takara),转染试剂Lipofectamine2000(Invitrogen),凝胶回收试剂盒(Omega);DMEM(Omega);小牛血清(PAA);北京天为时代公司病毒基因组提取试剂盒;HIF-1α单克隆抗体(Chemicon International公司);羊抗鼠辣根过氧化物酶标记二抗(北京鼎国生物公司)。质粒、菌珠、细胞系等:Adeno-XTM-Adenoviral Expression Systems(BD.CLONTECH):包括有pShuttle2、pShuttle2-lacZ、Adeno-XTMViralDNA等;重组穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803及pShuttle2-lacZ(本室已构建成功);大肠杆菌DH5α(本室保存);HEK293A细胞(中科院上海细胞所)。②实验方法:采用分子克隆技术,以PI-SceI和I-CeuI双酶切重组穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803,然后切下含有低氧诱导因子1αcDNA表达的盒片段,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-XViralDNA连接,重组成pAdeno-HIF-1α腺病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,在HEK293A细胞中包装成为重组腺病毒Adeno-HIF-1α-Ala564-Ala803。③实验评估:进行PCR鉴定及滴度测定。用重组腺病毒转染293A,采用Westernblot鉴定低氧诱导因子1α蛋白表达。结果:提取重组腺病毒质粒pAdeno-HIF-1α-Ala564-Ala803以引物A、B和引物1、2、3、4进行PCR鉴定,分别扩增出287,460,214bp的3种引物片段,与预期一致,经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功。pAdeno-lacZ转染293A细胞后X-Gal原位染色,显示约有近20%左右细胞染成蓝色,病毒滴度为6.8×107pfu/mL。Adeno-HIF-1α-Ala564-Ala803转染293A后稳定表达低氧诱导因子1α蛋白。结论:成功构建了重组腺病毒突变型的Adeno-HIF-1α-Ala564-Ala803。     

盐酸氨溴索口腔崩解片在健康人体的药物动力学

目的:建立快速、灵敏的氨溴索人体内血药浓度的高效液相色谱-串联质谱测定法,观察盐酸氨溴索口腔崩解片在健康人体内的药物动力学过程。方法:于2006-03选择男性健康志愿者18名,试验前实验方案经医院伦理委员会审批,志愿者签署知情同意书后,单剂量口服盐酸氨溴索口腔崩解片3片(含盐酸氨溴索90mg)后,分别于给药前和给药后15,30,45min,1,1.5,2,2.5,3,4,6,8,10,12,14,24h采集血样。实验评估:①用高效液相色谱-串联质谱测定法测定血浆中氨溴索的浓度,绘制药-时曲线。②采用PKS程序对试验数据进行统计学分析处理,计算有关药物动力学参数。③观察药物崩解时限和不良反应情况。结果:①药-时曲线:单剂量口服盐酸氨臭索口腔崩解片(含盐酸氨溴索90mg)后,其药-时曲线拟合符合二室模型。②药物动力学参数:达峰浓度,达峰时间,清除半衰期,0～24h、0～∞h血浆药-时曲线下面积分别为(171.87±53.92)μg/L,(1.3±0.3)h,(6.9±2.7)h,(730.6±243.8)μg/(L·h),(819.4±271.6)μg/(L·h)。③药物崩解时限和不良反应:18名健康志愿者中口含受试制剂后主诉口感良好,无沙砾感,崩解时限为10～40s,平均(21±11)s。在试验的过程中,未见不良反应,试验结束后复查心肝肾功能均正常。结论:试验建立的氨溴索人体内血药浓度测定方法灵敏、快速、可靠;盐酸氨溴索口腔崩解片单剂量给药后在健康人体内药物动力学与文献报道基本一致。     

诱发电位提取的子空间和小波去噪复合方法

目的:为减少提取诱发电位所需的试验次数,有效去除自发脑电噪声,提出一种新的视觉诱发电位提取方法并进行验证。方法:基于奇异值分解的子空间方法可以用于去除信号中的噪声。①其基本原理是,由含噪信号形成的数据矩阵进行奇异值分解可以获得信号子空间和噪声子空间,将含噪信号正交投影到信号子空间中即可得到去除噪声。因为在头皮测量得到的诱发电位记录信号的信噪比很低,所以仅使用基于奇异值分解的子空间方法来去除噪声并不能有效地提取诱发电位。②实验记录中对诱发电位成分影响较大的自发脑电是有色噪声,描述其奇异性的Lipschitz指数具有不确定性,可能为正,也可能为负,因此仅用小波去噪方法提取诱发电位也不能取得理想的结果。③为此,提出了一种基于奇异值分解的子空间正交投影和小波去噪复合方法来提取诱发电位。首先应用基于奇异值分解的子空间方法将包含噪声的记录信号分解为信号子空间和噪声子空间,将含噪信号投影到信号子空间可得到初步去噪的信号,再应用小波变换进一步去除噪声,即可提取诱发电位。结果:采用自发脑电模型产生有色的自发脑电噪声,与白噪声一起加入仿真的诱发脑电信号中,在低信噪比小于-10dB的情况下,可有效地提取出诱发脑电信号。仿真和实验结果表明这种复合方法的效果好于单独采用其中的一种方法,能将提取诱发电位的实验次数由20次左右缩短为四五次。结论:将基于奇异值分解的子空间方法和小波去噪结合起来,能有效提取诱发电位,减少提取诱发电位所需的试验次数。     

应用多元回归分析影响全膝关节置换术后膝关节活动度的相关因素

目的:全膝关节置换手术后患者的满意度很大程度上取决于膝关节疼痛的缓解程度以及关节的最大活动度。对87例接受全膝关节表面置换患者进行客观效果评定并分析影响术后膝关节活动度的相关因素。方法:①对象和材料:选择2005-06/2007-05解放军总医院骨科手术的全膝关节置换患者87例102膝。其中男8例9膝,女79例93膝,年龄46-78岁,平均67.3岁。TACK假体和GeminiII假体51个(Link公司)、LPS后稳定型膝假体17个(Zimmer公司)、后叉保留型及后稳定型膝假体23个(Stryker公司)、后叉保留型假体11个(北京京航公司)。②干预和评估:患者均行全膝关节置换术。采用美国纽约特种外科医院的膝关节评分标准(HSS)对膝关节进行疗效评价;使用多元回归方法对可能影响术后膝关节活动度的因素(包括年龄、体质量指数、屈曲挛缩、内外翻畸形、术前的活动度、出院时的活动度、术前的膝关节HSS评分)进行分析。结果:所有患者均获得1年以上的随访。①膝关节HSS评分:平均为87.5分。优良率90.8%,较术前明显改善(P<0.01)。②多元回归分析:显示出院时患者膝关节的活动度同术后1年的膝关节活动度有关(P<0.01)。③随访结果:所有患者都未发生深部感染、假体松动或骨溶解等远期不良的生物相容性反应。结论:出院时患者膝关节的活动度同术后1年的膝关节活动度有关。术后早期功能训练,有利于最大限度地提高置换术后全膝关节活动度。     

骨髓源性神经样细胞体外存活、增殖的特性

目的:寻找骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样/星形胶质样细胞的有效方法,并评价其体外存活和增殖特性。方法:实验于2005-07/2006-08在华中科技大学同济医学院附属协和医院完成。采用贴壁筛选法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。收集第5代骨髓间充质干细胞单细胞悬液,以1×109L-1置入6孔培养板中,加入DMEM 20%胎牛血清生长培养基,24h后更换生长培养基为DMEM/F12 2?7 40μg/L碱性成纤维生长因子 20μg/L内皮生长因子诱导分化培养基,诱导10～20d,即采用多因子分阶段逐步诱导方法定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经前体样细胞。更换诱导分化培养基为DMEM/5%胎牛血清生长培养基,分两组进行诱导:一组向神经元样诱导分化:全反式维甲酸连续加样,首次浓度0.5μmol/L,以后每天全量加样;二组向星形胶质样细胞诱导分化:10μg/L血小板衍生生长因子BB首次加样,以后每天半量加样,均连续诱导10～14d,进而分化为神经元样/星形胶质样细胞。应用活细胞计数试剂盒CCK-8检测神经元样/星形胶质样细胞的增殖及存活情况,绘制生长曲线及细胞存活曲线。结果:①碱性成纤维生长因子 表皮生长因子连续诱导7d后骨髓间充质干细胞分化为球团样的神经前体样细胞,巢蛋白表达阳性。②全反式维甲酸、血小板衍生生长因子BB分别连续诱导10d后骨髓间充质干细胞逐步分化出神经元样、星形胶质样细胞,并分别表达纤维丝蛋白200及胶质纤维酸性阳性蛋白。③神经元样细胞早期生长较缓慢,具有一定的增殖能力,六七天后达到高峰,此后增殖能力明显下降,细胞存活率明显下降,十四五天之后细胞存活率下降到7.6%以下,难以传代培养。星形胶质样细胞初期生长慢,5d后生长加速,进入对数生长期,七八天后进入平台期,仍保持较高的细胞存活率。结论:采用多因子分阶段诱导方法可成功诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样/星形胶质样细胞。神经元样细胞存活、增殖能力较差,难以传代,星形胶质样细胞存活、增殖能力较强,可建立传代的二倍体细胞系。     

“Honoring Somebody that Society Doesn't Honor”: Therapists Working in the Context of Poverty

Although it has been widely acknowledged that people living in poverty are underserved by mental health professionals, little is known about the experiences of psychotherapists who are currently working with poor clients. What can we learn from these clinicians that may help us more effectively prepare trainees for work in the context of poverty? This qualitative investigation analyzed narrative data from 10 therapists regarding their work with poor clients. Participants revealed perceptions of the challenging (and rewarding) nature of this work, the inadequacies of their training to meet these demands, and the damaging influence of social stigma within their clients’ lives and presenting problems, as well as on clinicians’ own occupational status.     

Developing a dedicated education unit in long-term care: A pilot project

Within long-term care, the transitional care setting provides post-acute and short-stay rehabilitation to older adults, easing the transition between the acute care hospital and home or long-term care. The current nursing shortage makes it difficult for these facilities to attract and retain qualified nursing staff. In order to meet the rehabilitation needs for this patient population while at the same time addressing the challenge in nursing education of limited clinical placements and severe nurse faculty shortages, an academic-practice partnership was developed to establish a Dedicated Education Unit (DEU). The DEU is an innovative clinical education model in which experienced staff nurses serve as clinical teachers to nursing students. This paper describes the process of developing a DEU using the Partners in Caring Model as the framework. Formative and summative evaluation results and recommendations for program improvement of this pilot project are discussed.     

雷公藤叶中二萜化合物的研究

从雷公藤(Tripterygium wilfordii)叶中分离出九个二萜化合物,经物理常数测定、化学反应、以及波谱数据分析,分别鉴定为雷公藤内酯酮(triptonide,1)、雷公藤内酯醇(triptolide,2)、雷公藤内酯二醇(tripdiolide,3);雷醇内酯(triptolidenol,4)、16-羟基雷公藤内酯醇(16-hydroxytriptolide,5)、雷公藤氯内酯醇(tripehlorolide,6)、雷藤内酯三醇(triptriolide,7),以及新化合物雷公藤内酯二醇酮(tripdiotolnide,8)和13,14-环氧9,11,12-三羟雷公藤内酯(13,14-epoxide 9,11,12-trihydroxytriptolide,9)。新化合物的生物活性正在研究。