外源性组织型纤溶酶原激活物信号肽突变体增强蛋白质在哺乳细胞中的表达及分泌

目的 比较不同tPA信号肽突变体对目的蛋白表达和分泌水平的影响,优化并筛选通用性外源信号肽序列.方法 通过定点突变技术将人类组织型纤溶酶原激活物（tPA）的信号肽第22位氨基酸由脯氨酸（P）突变为丙氨酸（tPA22P/A）或甘氨酸（tPA22P/G）,并将突变前后的3种信号肽序列分别插入HIV-1 p24基因的N末端,构建不同的p24蛋白表达载体,这些重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞,转染72 h后,通过SDS-PAGE与western blot检测并比较各组培养上清和细胞中p24蛋白的表达水平.结果 成功构建了3个p24蛋白的真核表达载体P24T.tPA、P24T.tPA22P/A和P24T.tPA22P/G,经序列测定证实基因序列和方向与预期相符;重组载体转染293T细胞72 h后均检测到分泌性p24的表达.与P24T.tPA组相比,P24T.tPA22P/A转染组培养上清中和细胞内p24蛋白表达水平分别提高62%和29%,P24T.tPA22P/G转染组分别提高8%和6%.结论 tPA信号肽22位由脯氨酸突变为丙氨酸或甘氨酸,这就提高了目的蛋白的表达和分泌水平,为优化外源蛋白在哺乳细胞中的表达和分泌提供了实验基础.     

Effect of nuclear factor-κB p65 ASOND on I typ collagen expression and rat hepatic stellate cells proliferation

Objective Sstudy effect of nuclear factor-κB ASOND on I type collagen expression and rat hepatic stellate cells(HSC)proliferation.Methods Rat HSCs were separated by affusing and digestingof Ⅳ type collagenenzyme and density acentric method.Lipid-mediated NF-κB p65 ASOND(0.001,0.01,0.1,1μmol/L)Was transferred into rat HSCs.Toxicity of HSCs caused by NF-κB p65 ASOND and activity of LDH were determined by trypan blue staining.Proliferation affection of transferring NF-κB p65 ASOND into HSCs was determined by MTT.In different concentration NF-κB p65 ASOND.expression of Ⅰ type collagen stimulated by 1mg/L TNF-αwas determined by RT-PCR and ELISA.Results After transfection of NF-κB p65 ASODN,expression of NF-κB protein in HSCs was decreasing.Toxicity experiment indicated that NF-κB p65 ASOND of different concentration(0.001,0.01,0.1 and 1.0 μmol/L)had no effect on HSCs livability and LDH activity(P<0.05).Four different concentration NF-κ B p65 ASOND could restrain HSCs proliferation stimulated by 1 mg/L TNF-α.The expression of I type collagen and mRNA stimulated by 1mg/LTNF-αwas increased,and had a positive correlation with concentration(P>0.05).Conclusion NF-κB p65 ASOND may depress NF-κB activity to restrain HSCs proliferation and Ⅰ type collagen expression,and reduce extracellular matrix.     

核因子κB p65反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞增殖和I型胶原表达的影响

目的 探讨核因子κB(NF-κB)p65反义寡核苷酸(ASOND)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和I型胶原表达的影响.方法 Ⅳ型胶原酶消化密度梯度离心法分离培养大鼠HSC;脂质体介导的不同浓度的NF-κB p65 ASOND(0.001、0.01、0.1和1μmol/L)进入HSC;台盼蓝染色排斥法检测NF-κBp65 ASOND对HSC的毒性实验并检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性;MTT法测定NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC增殖影响;RT-PCR法和ELISA法检测不同浓度NF-κB p65 ASOND对1mg/LTNF-α刺激后HSC I型胶原表达的影响.结果 转染NF-κB p65 ASODN后,HSC细胞NF-κB蛋白的表达下降,不同浓度(0.001、0.01、0.1和1 μmol/L)的NF-κB p65 ASOND对于体外培养HSC的存活率和LDH无明显影响(P>0.05),0.01～μmol/L的NF-κB p65 ASOND抑制HSC的增殖,lmg/L TNF-α刺激HSC的I型胶原蛋白和mRNA的表达,且随浓度的增加作用增强(P<0.05).结论 NF-κB p65 ASOND可通过抑制NF-κB活性减少HSC活化增殖及Ⅰ型胶原生成,从而减少细胞外基质的产生.     

定坤汤联合敏使朗治疗椎动脉型颈椎病的临床疗效分析

目的观察定坤汤联合敏使朗治疗椎动脉型颈椎病的临床效果。方法随机选取106例门诊椎动脉型颈椎病患者,将106例患者随机分为治疗组与对照组,每组各53例。治疗组给予口服定坤汤、敏使朗,对照组给予口服敏使朗,分别观察治疗前后两组患者临床症状的变化。结果治疗组痊愈31例,显效11例,有效6例,无效5例,总有效率为90.57%;对照组痊愈21例,显效8例,有效12例,无效12例,总有效率为77.36%,两组疗效比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论定坤汤联合敏使朗治疗椎动脉型颈椎病的疗效可靠,值得临床推广应用。     

IL-17、MMP-3在类风湿关节炎患者滑膜液及血浆中的表达及意义

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者滑膜液及血浆中白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的水平及其临床意义.方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测RA患者滑膜液及血浆中IL-17及MMP-3的水平,分析IL-17及MMP-3与临床指标的关系.结果:RA患者滑膜液IL-17及MMP-3水平明显...     

依达拉奉防治缺血性脑损伤研究的新进展

近年来,依达拉奉脑保护作用的研究取得了很大进展,尤以对缺血性脑卒中和新生儿缺血缺氧性脑病的防治研究最为深入,而联合治疗策略也得到了广泛的重视.本文就近5年这些热点研究的新进展进行综述.     

SonoVue谐波超声造影判定经皮微波凝固治疗肝细胞癌残余瘤的效用SonoVue谐波超声造影判定经皮微波凝固治疗肝细胞癌残余瘤的效用

目的：评估SonoVue谐波超声造影即刻判定经皮微波凝固治疗（PMCT）肝细胞癌残余瘤的疗效和用途.材料和方法：53例肝细胞癌患者的55个癌灶（1.3～6.0cm）经皮微波凝固治疗后,经肘部静脉团注射SonoVue,观察癌灶凝固治疗区造影的增强情况.引导临床实施肝细胞癌治疗区穿刺活检,对治疗区局部动态超声增强部位,追加二次 PMCT.治疗1周内,全部患者进行增强CT随访,之后,每月随访一次,随访6月.结果：46个无超声动态增强治疗区,其中1个组织病理证实为残余瘤存在.9个治疗区局部呈结节形或新月形动态增强,组织病理学检查证实为残余瘤存在.以病理组织学所见结果为诊断标准,谐波超声造影结果与之比较,其检测肝细胞癌凝固区残余瘤的敏感性、特异性和准确性分别为 90%、100%和98.2%.随访增强CT检查,9个补加PMCT肝细胞癌治疗区中,1个显示CT强化.结论：谐波超声造影是一种PMCT肝细胞癌后及时判断治疗效果,并指导临床治疗残余瘤的有效方法.     

经肝动脉与门静脉同时插管灌注化疗治疗晚期肝癌

<正> 1988年5月至2000年5月我们对不能手术切除的31例晚期肝癌患者经肝动脉与门静脉同时插管、间断灌注化疗,临床观察治疗效果尚满意,现总结报告如下。 1 临床资料 1.1 一般资料:31例中男27例,女4例,年龄最小37岁,最大68岁,平均年龄54例。原发性肝癌24例,弥漫性肝癌7例,均经病理诊断证实。 1.2 辅助治疗:为完成整个治疗过程,减少化疗药物抑制造血系统的毒性作用,保护消化功能。本组在化疗灌注的前、中、后同时应用以下辅助治疗:①聚肌胞2ml肌注或静滴2～3次/周。②干扰素1支,肌注1～3次/周。③华蟾素10～30mg     

带血管蒂组织瓣在高位股骨颈骨折中的临床应用

自1995～2001年对28例有移位，头下型及头颈型、颈中型青壮年股骨颈骨折病人应用切开复位，加压螺钉内固定，带旋髂深血管的髂内瓣及腹壁肌支或带旋髂深血管的髂骨瓣 旋股外侧动脉升支的血管束移植治疗，效果满意。报告如下。     

眼色素膜炎患者弓形体感染情况调查

<正> 我们近年来又进一步对临床眼内病患者,作了弓形体IHA的血清学调查及部分病例病原体分离的研究,现报告如下。 一、对象与方法 以随机抽样的方法,收集门诊及住院眼病患者计207例。所有病例均经临床检查,确诊为色素膜炎者141例,其他眼内病(色素膜瘤、白内障、青光眼、视网膜动脉硬化、视神经炎等)66例。患者年龄为21～76岁。血清学检测用常规微量间接血凝试验(IHA),测定血清弓形体抗体。试验