零下非结冰抑制线粒体途径相关的细胞凋亡成功保存生物人工肝用L02细胞

目的 比较常规低温(4℃及0℃)及零下非结冰温度(-0.8℃)保存L-02肝细胞时Bcl-2/Bax基因和蛋白表达的差异及与低温保存引起细胞凋亡的关系.方法 L-02细胞分为3组:-0.8C组(零下非结冰组),0°C组(0℃非结冰组),4℃组(对照组).低温保存72 h后,分别测定细胞存活率及凋亡率(流式细胞术),检测LDH、ALT释放及凋亡基因Bcl-2与Bax的mRNA及蛋白定量表达并计算Bcl-2/Bax比值.结果 零下非结冰组较0℃组及4℃组显著提高了低温保存72 h的L-02细胞存活率[(70.95％±3.33％)vs(65.9％±3.22％)、(61.02％±3.37％),均P＜0.05];降低了细胞凋亡率[(5.82％±1.68％)vs(8.53％±1.67％)、(9.40％±2.57％),均P＜0.05];抑制了LDH[(101.50±6.58) U/L vs(127.67±12.09)U/L、(150.13±11.38) U/L,均P＜0.05]与ALT释放[(6.07±0.63) U/L vs (7.00 ±0.60) U/L、(8.63±1.25) U/L,P ＜0.05];提高了L-02细胞Bcl-2基因mRNA及蛋白表达(均P＜0.05),降低了Bax基因mRNA及蛋白表达(均P＜0.05),Bcl-2/Bax指数上升(均P＜0.05).结论 同常规低温保存相比,零下非结冰可显著提高肝细胞低温保存后细胞存活率,降低低温损伤引起的细胞凋亡.零下非结冰降低了低温源性细胞凋亡的机制可能同Bcl-2基因表达增加、Bax基因表达降低即Bcl-2/Bax比值上升有关.     

旋转生物反应器内微载体共培养CL-1肝细胞与人肝星形细胞

目的评估CL-1肝细胞跟人肝星形细胞(HSC)的微载体微重力共培养来提高CL-1肝细胞的活力与功能的可行性。方法实验分为两组:CL-1肝细胞微载体微重力单培养组和CL-1肝细胞、HSC微载体微重力共培养组。通过倒置显微镜观察、细胞计数、MTT染色及扫描电子显微镜比较两组肝细胞的形态、细胞活力差异,并通过、培养上清中ALT、白蛋白浓度等功能指标测定,比较两组肝细胞活力和功能差异。结果共培养组较单培养组细胞生长迅速,细胞从24 h贴壁后开始增长,到第5天进入高峰。共培养组1~7 d的肝细胞密度明显高于单培养组的细胞密度(P<0.05)。两组肝细胞ALT、白蛋白从第1天开始不断分泌增加,第5天达到峰值,第6、7天有所下降。ALT功能比较,共培养组明显低于单培养组(P<0.05)。白蛋白功能比较,共培养组明显高于单培养组(P<0.05)。倒置显微镜、扫描电镜及MTT均提示共培养组肝细胞形态、活力优于单培养组。结论人肝细胞、HSC微载体微重力共培养研究有利于维持及增强旋转生物反应器的肝细胞活力及功能,对人工肝的培养模式发展具有重要意义。     

温肾壮骨方合钙尔奇D治疗绝经后骨质疏松症28例临床观察

目的:观察温肾壮骨方合钙尔奇D治疗绝经后骨质疏松症肾阳虚型的临床疗效。方法:将56例绝经后骨质疏松症肾阳虚型患者随机分为治疗组和对照组各28例。对照组采用钙尔奇D治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加服温肾壮骨方治疗。两组均治疗6个月后统计疗效。结果:总有效率治疗组为92.9%,对照组为67.9%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组骨密度改善情况比较,治疗组总有效率为89.3%,优于对照组的64.3%(P<0.05)。结论:温肾壮骨方治疗绝经后骨质疏松症肾阳虚型疗效满意。     

地塞米松对大鼠肝脾细胞凋亡的影响

目的探讨地塞米松对大鼠肝脾等器官淋巴细胞的影响和对机体免疫抑制作用的机制。方法将20只Wistar大鼠随机分成两组,每组10只,实验组每天腹腔注射地塞米松3 mg/(kg.d),3 d后称大鼠体重、脾湿重、肝湿重。用流式细胞仪分析Annexin V/PI双染后脾细胞的凋亡率。结果实验组体重、脾湿重明显减轻(P<0.001),肝重改变不明显(P=0.75),脾细胞的凋亡率为(34.9±5.8)%,较对照组的凋亡率(0.71±0.09)%显著高(P<0.01)。结论地塞米松促进大量淋巴细胞凋亡是其抑制机体的免疫功能的一种重要机制。     

S-腺苷蛋氨酸治疗术后肝内胆汁郁积症的临床观察

目的 :观察 S-腺苷蛋氨酸治疗术后肝内胆汁郁积症的疗效。方法 :治疗组 2 8例采用腺苷蛋氨酸治疗 ,对照组 1 8例采用甘利欣注射液治疗 ,对比两组治疗前后肝功能的变化。结果 :治疗组术后 1周显效 1 6例、有效 6例、无效 6例 ;对照组显效 9例、有效 4例、无效 5例 ,两组比较差异有统计学意义 (u =- 3.35 9,P <0 .0 1 )。4周治疗组显效 1 7例、有效 7例、无效 4例 ;对照组显效 1 1例、有效 6例、无效 1例 ,两组比较差异亦有统计学意义 (u =- 2 .4 97,P <0 .0 5 )。结论 :S-腺苷蛋氨酸治疗肝内胆汁郁积症疗效较好     

人源肝细胞系CL-1、HepFMMU、HepG2、C3A生物学特性与功能的比较

目的:比较体外培养的四种人源肝细胞系CL-1、HepFMMU、HepG2、C3A生物学与功能特性的异同,初步评价其应用于生物人工肝的可行性,为其在组织工程学研究和临床医学中的应用奠定基础。方法:4种肝细胞在接种密度相同的条件下培养7d,观察4种细胞形态特征和功能状态,检测培养液中白蛋白、尿素及安定代谢量。结果:4种肝细胞系均具有较快的生长速度,功能学比较C3A具有良好的白蛋白合成和安定代谢功能;CL-1具有良好的尿素合成功能。结论:4种肝细胞具有良好的增殖能力,C3A具有良好的白蛋白合成及安定代谢能力,但其尿素合成能力较差,需进一步改进;CL-1具有较好的尿素合成能力,但其安定代谢和白蛋白合成功能较差;HepFMMU功能较差,不适宜用于生物人工肝。     

婴幼儿法洛氏四联症的外科治疗

目的：总结我院近10年完成的89例婴幼儿法洛四联症根治术的临床经验,通过对临床手术资料的分析,明确法洛四联症婴幼儿早期手术的必要性,提高法洛四联症婴幼儿的存活率。方法：2000年1月至2009年8月我院共完成89例3岁以下的婴幼儿法洛四联症根治术,男53例,女36例;年龄为6月龄～3岁;体重5.7～15 kg。所有患儿均采用胸骨正中切口,全血＋血浆＋白蛋白预存液,全部改良超滤,在低温体外循环下行法洛四联症一期根治术,室缺依据大小及骑跨程度选择较大的补片,以保证左室流出道通畅,术终根据左室压、右室压、肺动脉压及右肺动脉压来评估矫治满意度,必要时补片改为跨环。其中2例采用一个半心室矫正。结果：全组89例婴幼儿法洛四联症根治术后治愈86例,早期死亡3例。手术早期死亡率3.5%,无晚期死亡。死亡原因：术终脱机困难1例,术后低心排伴渗漏综合征、肾衰死亡2例。19例发生较严重的并发症,出现低心排11例,肾衰2例,灌注肺3例,残余漏3例。结论：早期手术及恰当手术方法不仅可以提高法洛四联症婴幼儿的存活率,而且可以提高患儿的生活质量,而低心排导致肾功能衰竭是手术死亡的重要原因,肺动脉发育情况,左心室大小是法洛四联症手术高危因素。