毛囊无黑素性黑素细胞的分离和培养

目的：分离和培养毛囊无黑素性黑素细胞，探讨其生物学特性。方法：采用胶原酶V游离毛囊，0．5％分离酶消化婴幼儿包皮。0．05％胰酶和0．53mmol／L乙二胺四乙酸(EDTA)消化游离的毛囊和来自包皮的表皮，分别制备单细胞悬液进行培养。传至第3代，待细胞爬上盖玻片后，分别以NKI／heteb和HMB-45单抗染色。结果：毛囊的培养细胞，绝大多数为双极细胞，增殖较快，被NKI／beteb单抗识别，而HMB-45染色阴性，包皮的黑素细胞染色结果则与之相反．结论：毛囊的外根鞘中存在功能和形态上不成熟的无黑素性黑素细胞(AMMC)、AMMC长期培养的成功，有利于研究AMMC在毛囊生物学中所起的作用。     

皮肤表面酸碱度及其测定方法

皮肤表面pH值在维持正常的皮肤生理屏障功能、参与角质层细胞代谢酶的活性调节、保持皮肤微生态平衡和正常的皮肤感觉上发挥重要的作用。许多因素参与并影响皮肤表面pH值的形成，皮肤pH值测定方法的改进为临床皮肤生理、病理的研究奠定了基础。     

人毛囊无色素黑素细胞培养方法的改良及色素生成相关酶表达的研究

目的进一步改良人毛囊无色素黑素细胞（amelanotic melanocytes，AMMC）培养的方法，并研究了AMMC内黑素生成相关酶的表达：酪氨酸酶（tyrosinase,TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1（tyrosinase related protein-1，TRP—1）和酪氨酸酶相关蛋白-2（tyrosinase related protein-1，TRP-2）。方法采用1％分离酶（dispase）消化分离毛囊，选用含干细胞因子（stem cell factor，SCF）、内皮素-3（endothelin-3，ET-3）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast grow factor，bFGF）和霍乱毒素（cholera toxin，CT）的成黑素细胞培养基培养AMMC，同时培养表皮黑素细胞（melanocytes，MC）作为对照，采用免疫组化、多巴染色和透射电镜对细胞进行鉴定，蛋白印记法分析TYR、TRP-1和TRP-2的表达。结果1％分离酶消化24h可以容易获得游离的毛囊，结合我们所用的培养基完全排除了成纤维细胞的污染。所用成黑素细胞培养基促AMMC增殖明显，细胞可传5代以上。免疫组化结果显示，AMMC表达gp100、酪氨酸酶（tyrosinase，TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1（tyrosinase related proteifl-1，TRP-1）和酪氨酸酶相关蛋白-2（tyrosinase related protein-1，TRP-2），证明培养的细胞为黑素细胞。AMMC的多巴染色呈阴性，并且透射电镜发现AMMC胞质中仅含大量的Ⅰ期、Ⅱ期黑素小体，未见Ⅲ、Ⅳ期黑素小体，因此说明AMMC处于未分化状态。TYR和TRP-1在MC中的表达明显强于AMMC。TRP-2的表达在两种细胞间没有明显差别，进一步说明AMMC与MC具有异质性。结论我们成功培养了完全纯化、快速增殖的AMMC，并且培养的细胞不能生成黑素，生物学性状更接近活体中的状态，其与表皮黑素细胞具有异质性。     

人毛囊无色素黑素细胞培养的纯化和培养基成分对细胞影响的实验研究

目的研究geneticin在毛囊黑素细胞培养过程中对成纤维细胞的去除作用,研究12-O-十四烷佛波酯-13-醋酸酯TPA和含牛垂体提取物BPE角质形成细胞无血清培养基K-SFM对毛囊无色素黑素细胞AMMC形态和增殖的影响。方法通过胶原酶法培养毛囊黑素细胞,观察不同浓度geneticin对污染的成纤维细胞的去除。同时观察不同浓度TPA和含BPE的K-SFM对AMMC形态和促增殖的影响。结果采用100μg/mLgeneticin处理2d后,剩余细胞主要是黑素细胞,其中部分成纤维细胞呈死亡状态,继续培养至第7天后,黑素细胞的纯度达到90%以上。50ng/mLTPA可以促进细胞增殖,与100ng/mLTPA比较差异无显著性(P>0.05),但对细胞形态影响不大;100ng/mLTPA明显促进黑素细胞的树突增加。含20%、40%和80%的K-SFM含BPE培养基中,浓度为80%时促增殖作用最明显。结论100μg/mLgeneticin作用2d去除黑素细胞培养中污染的成纤维细胞是一种简单有效的方法,并可重复使用。在毛囊黑素细胞培养中,TPA以50ng/mL的浓度即可明显促进增殖,而不影响细胞的形态。含BPE的K-SFM可以浓度依赖性地促进AMMC增殖。     

链球菌M6蛋白诱导点滴型银屑病样动物模型的研究

目的利用链球菌M6蛋白建立严重联合免疫缺陷鼠(SCID鼠)银屑病样动物模型。方法将点滴型银屑病患者非皮损区全层皮片、正常对照全层皮片移植到不同的SCID鼠背部,分别在移植皮片皮内多次注射经链球菌M6蛋白刺激后和未经链球菌M6蛋白刺激的外周血单一核细胞(PBMC)悬液,4周后对移植皮片行组织活检。结果光学显微镜下观察,13例点滴型银屑病患者非皮损区皮片内注射经链球菌M6蛋白刺激后的PBMC有12例产生银屑病样改变;9例正常对照皮片内注射经链球菌M6蛋白刺激后的PBMC均未出现银屑病样改变;10例点滴型银屑病患者非皮损区皮片及9例正常对照皮片内注射未经链球菌M6蛋白刺激后的PBMC均未出现银屑病样改变。经统计学处理两组间差异有显著性(P<0.001)。结论本试验利用链球菌M6超抗原成功建立了银屑病样动物模型,从而进一步证实链球菌M6蛋白在点滴型银屑病发病中发挥着重要的作用。     

CO2点阵激光联合硅酮凝胶治疗面部痤疮瘢痕的疗效观察

目的：观察CO2点阵激光联合硅酮凝胶对面部痤疮瘢痕的疗效及其不良反应。方法：应用cO：点阵激光对40例面部痤疮瘢痕患者进行连续5次治疗,其中治疗组术后联合硅酮凝胶外用,而对照组不外用任何药物,治疗后随访3～5个月。结果：治疗组痤疮瘢痕总有效率为85％,对照组总有效率70％。其中治疗组增生性瘢痕总有效率高于凹陷性瘢痕,而对照组增生性瘢痕总有效率略低于凹陷性瘢痕。术后随访治疗组仅1例出现暂时性色素沉着,对照组有3例出现色素沉着,两组均无1例发生新的瘢痕。结论：点阵CO2激光联合硅酮凝胶治疗面部痤疮瘢痕优于单纯点阵CO2激光治疗,联合治疗可提高增生性瘢痕的疗效。     

受皮区负压吸疱法与磨削法自体表皮移植治疗白癜风疗效比较

我们自2000-2003年治疗白癜风患者83例，供皮区全部采用负压吸疱法，受皮区同一白斑处分别采用负压吸疱与磨削法进行对比观察，现将观察结果报告如下。     

橙皮苷对人黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响

目的:观察橙皮苷对人原代黑素细胞酪氨酸酶及黑素合成的影响,探讨其作用机制.方法:选择50、100、200、300、400、500 和600 mg/L 7 个浓度的橙皮苷作用于体外培养的人表皮黑素细胞72 h,分别测定细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量.结果:橙皮苷显著抑制黑素合成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性.结论:橙皮苷可抑制黑素合成和酪氨酸酶活性.     

丘疹性弹性纤维离解

报告1例丘疹性弹性纤维离解.患者女,24岁.因双侧前臂多发白色质硬非瘙痒性丘疹10年就诊.皮损散在分布,不能自行消退.皮损组织病理检查显示病变部位弹性纤维崩解,弹性纤维数量显著减少.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线诱导的角质形成细胞分泌血管内皮生长因子的影响

目的：研究绿茶中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对中波紫外线（UVB）诱导角质形成细胞HaCaT株（简称HaCaT细胞）分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法：试验共设立空白对照组、单纯加药组、单纯照光组和加药照光组4组,以15mJ/cm^2 UVB的剂量照射细胞,酶联免疫吸附试验（EUSA）方法检测不同时间细胞上清液中VEGF含量。反转录（RT）-PCR测定VEGFmRNA表达。结果：UVB照射后,HaCaT细胞分泌的VEGF在照光后12h开始明显增加,随时间延长。VEGF水平逐渐增加。EGCG对UVB诱导的VEGF升高有明显抑制作用。在12、18、24h3个时间点．EGCG明显抑制VEGF水平的升高。结论：EGCG可以抑制紫外线诱导的HaCaT细胞分泌VEGF。