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目的:研制鼠抗人FL单克隆抗体(mAb)以及对其生物学特性的研究。方法:以人FL基因转染细胞株L929-FL为免疫原,采用B细胞杂交瘤技术,获取分泌抗人FLmAb的杂交瘤细胞株。快速定性试纸法鉴定mAb亚类,体内诱生腹水法制备mAb,免疫亲和层析法纯化mAb,MTT法检测mAb对白血病细胞株U937和HL-60生长的影响,Annexin V/PI染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果:建立了3株稳定分泌抗人FLmAb的杂交瘤,命名为3C2、3C6和8D10。快速定性试纸法鉴定3株mAb均属小鼠lgG2a亚类。3株mAb分别识别白血病细胞U937和HL-60上表达的FL分子。将3株mAb分别加入共表达FL/Flt3的U937和HL-60细胞的培养体系中,MTT法检测显示,3C2、3C6和8D10对白血病细胞的生长均具有抑制作用(P〈0.05)。Annexin V/PI染色FCM检测细胞凋亡,3C2和8D10均能增加白血病细胞凋亡的作用。结论:3C2、3C6和8D10是3株功能性抗FLmAb,对于研究FL/Flt3在白血病发生、发展中的作用具有潜在的应用价值。 相似文献
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为研究4-1BB信号拮抗肿瘤细胞培养上清诱导的树突状细胞(DC)凋亡的作用,采用rmGM-CSF联合rmIL-4诱导小鼠骨髓细胞分化为未成熟树突状细胞(imDC),分别经rmTNF-α、4-1BB激发型单克隆抗体(2A)或TNF-α联合2A激发DC成熟。未成熟或成熟DC分别与不同浓度的肿瘤培养上清混合培养。流式细胞仪测定DC表面CD80、CD86的表达,3H-TdR掺入法测定DC激发T细胞活化增殖能力;JAM法测定未成熟或成熟DC与肿瘤上清混合培养后DNA片断形成率。结果显示:经2A或TNF-α刺激后,DC激发T细胞活化的能力显著提高;5%、10%、20%、50%小鼠肿瘤细胞株A20或B16培养上清与未成熟DC共育24h后,DNA片断形成率分别为16%、29%、41%、51%和20%、27%、37%、58%,且该效应具有时间依赖性;DC经2A或TNF-α激发48h后,不同浓度肿瘤培养上清诱导DNA片断形成率显著降低。因此,肿瘤细胞可以通过分泌可溶性因子诱导未成熟DC凋亡;4-1BBmAb能促进DC的发育成熟,并能有效地抑制肿瘤细胞培养上清诱导的DC凋亡。 相似文献
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用白细胞介素-6(IL-6)依赖性人多发性骨髓瘤细胞株XG-1作为免疫原,我们成功地制备获得一株分泌抗人IL-6受体单克隆抗体的杂交瘤,命名为SI15。夹心ELISA和位点竞争试验表明,SI15和抗人IL-6受体单克隆抗抗M19识别IL-6受体上的同一位点,对IL-6受体的生物活性无影响。 相似文献
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探讨小鼠髓系树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)共刺激分子4-1BB及其配体4-1BBL表达的变化。将促DC成熟活化因子CD40L-CHO、TNF-α、LPS和IFN-γ,免疫负性调节因子IL-10以及各成熟活化因子与IL-10联合加入BMDC中,观察BMDC上4-1BB及4-1BBL表达的变化。结果显示,加入成熟活化因子的各组BMDC上4-1BB及4-1BBL表达与对照组相比有显著上调(P<0.05)。而IL-10组与对照组相比两者的表达显著下调(P<0.05),且各成熟活化因子与IL-10联合应用与单用IL-10组相比,BMDC上4-1BB和4-1BBL表达上调,有显著性差异(P<0.05)。提示成熟活化因子不仅能上调BMDC上4-1BB和4-1BBL的表达并且能有效拮抗mIL-10对BMDC上4-1BB和4-1BBL表达的下调作用。 相似文献
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人可溶性gp130(sgp130)分子的克隆与表达 总被引:3,自引:0,他引:3
在成功克隆表达人膜型gp130分子的基础上,构建人可溶性gp130的重组表达质粒pKCR6/sgp130,并在CHO细胞中进行表达。经纯化鉴定和生物学检测,证实所表达的sgp130具有生物活性。 相似文献
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为调查B7-1分子在人多发性骨髓瘤细胞的表达是否可诱导出具有抗肿瘤作用的CD^+8的CTL,我们用含B7-1基因逆转录病毒载体PTG5192的包装细胞293E培养上清,感染人多发性骨髓瘤细胞系XG-7(不表达B7-1分子)用新霉素G418选择并经流式细胞仪筛选,获得了稳定高表达式B7-1分子的XG-7细胞(命名为XG-7-B7细胞)在体外增殖实验中,XG-7-B7细胞显示出比母系细胞XG-7对外周 相似文献
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激发型CD40单抗5C11对白血病细胞来源树突细胞的诱导作用及生物学特性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨激发型CD40 单抗 5C11对白血病细胞来源的树突细胞 (DC)的诱导作用及其生物学特性的影响。方法 激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合诱导白血病细胞分化为DC ,通过显微镜形态分析 ,流式细胞仪表型分析 ,活细胞计数 ,IL 6、IL 12ELISA定量检测及混合淋巴细胞反应和细胞毒性实验等细胞生物学、免疫学方法对其进行研究。结果 白血病患者外周血或骨髓的白血病细胞 ,在经激发型CD40 单抗 5C11联合不同的细胞因子组合培养后 ,能诱导成为大量成熟的DC ;形态学观察呈现典型的DC特征 ;流式细胞仪检测证实细胞表面上调性表达CD40 、CD80 、CD83 、CD86等分子 ;白血病细胞分化为DC后 ,IL 6分泌量减少 ,IL 12分泌量增加 (P <0 .0 5 ) ;同种异体混合淋巴细胞反应也显示 ,诱导的DC具有很强的刺激同种异体T细胞增殖的能力 ,这种增殖的T细胞对白血病细胞具有一定的杀伤作用。结论 激发型CD40 单抗 5C11联合细胞因子能诱导白血病细胞分化为功能性DC。这可能在白血病的过继免疫疗法中具有潜在的应用价值。 相似文献
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目的研究4-1BB信号对肿瘤上清诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)凋亡的拮抗作用及其机制。方法IL-4和GM-CSF诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞,得到未成熟DCs,磁珠纯化。以抗4-1BB激发型抗体2A或CD40激发型抗体1c10刺激DCs,在不同条件下检测DCs的凋亡情况。以抗体标记NFκ-Bp65亚基,激光共聚焦显微镜检测抗4-1BB激发型抗体2A处理后DCs内NFκ-Bp65亚基向核内的转位情况。结果DCs上4-1BB信号的激发能拮抗由B-16肿瘤上清诱导的DCs凋亡,效果低于CD40信号,并能引起NFκ-Bp65亚基向核区转位。结论4-1BB信号的激发提高了DCs抵抗肿瘤上清诱导凋亡的能力,此作用通过包含NFκ-B通路的相关胞内信号传导途径实现。 相似文献
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研制鼠抗人4-1BB功能性单克隆抗体及其在T细胞活化、增殖及信号转导中的作用。以小鼠肾肿瘤细胞转染人4- 1BB基因的细胞株4-1BB/293T为免疫原.采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌特异性4-1BB单抗的杂交瘤细胞株。以体内诱生法产生腹水,Protein G亲和层析法进行纯化,快速定性试纸法鉴定单抗的亚类,MTT法检测单抗对T细胞的刺激作用,流式法检测单抗对T细胞凋亡的影响。结果显示:成功获得1株持续分泌特异性抗人4-1BB单抗的细胞株(命名为5D5).属于IgG2b。该单抗能特异识别人4-1BB分子,介导有效的共刺激信号,体外促进T细胞的增殖,抑制活化诱导的T细胞凋亡。总之,成功获得1株功能性4-1BB单抗,具有重要的研究和潜在应用价值。 相似文献