反义寡核苷酸靶向肝细胞体外抗乙型肝炎病毒的实验研究

作者在对２．２．１５细胞中乙型肝炎病毒基因测序的基础上，设计合成了１段针对Ｕ５样序列区的１６－聚硫代磷酸反义寡核苷酸，并将其与直导向性载体－半乳糖化白蛋白和半乳糖化多聚赖氨酸连接，在２．２．１５细胞中观察了它们的抗病毒作用。     

结核杆菌含信号肽的Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的：克隆含信号肽的Mtb8．4（MS）／hIL12嵌合基因，构建其真核表达质粒，并进行鉴定。方法：以peDNA3．1（＋）-含信号肽的Mtb8．4（pMS）质粒为模板，经聚合酶链反应（PCR）扩增出MS-linker基因，与pCIneo载体进行连接重组，构建成pCI-neo-MS-linker（pMSL）重组质粒，然后以pORF-hIL12质粒为模板，经PCR扩增出hIL12基因，将hIL12基因与pMSL质粒进行连接重组，构建成MS／hIL12嵌合基因真核表达质粒，用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等方法进行鉴定。结果：MS／hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功。结论：MS／hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建，为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病MS／hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础。     

Hsp70/CD80嵌合DNA疫苗对结核杆菌的治疗作用

目的　研究结核病Hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗结核杆菌感染小鼠的治疗作用。 方法用结核杆菌强毒株攻击小鼠后 ,接种Hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗 ,观察该疫苗对结核杆菌感染的治疗作用。结果　疫苗接种后 14d ,测得卡介苗组、注射 pcDNA3组、注射 pcDNA3 hsp70组及Hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠的血清IFN γ分别为 (12 1.5 4 5 6 .39) pg/ml、(192 .0 0 6 4 .36 )pg/ml、(5 4 2 .33 99.77) pg/ml及 (1336 .98 12 9.6 4 ) pg/ml,嵌合DNA疫苗组与前三组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。肝、脾组织涂片细菌计数及组织培育菌落记数 ,嵌合DNA疫苗组与其他组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　Hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗与卡介苗及单一hsp70DNA疫苗相比 ,具有更好的免疫治疗效果。     

结核杆菌含信号肽的Mtb8．4真核表达质粒的构建及鉴定

目的 对结核杆菌新抗原一带信号肽的Mtb8．4(MS)进行基因克隆，构建其真核表达质粒并加以鉴定。方法 采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中扩增出带信号肽的Mtb8．4(MS)目的基因，经HindⅢ和EeoR Ⅰ消化后，与pcDNA3.1( )载体进行连接重组。结果 pcDNA3．1( )-MS真核表达质粒构建完成后，用限制性内切酶消化、PCR及DNA测序等多种方法进行鉴定，证实其构建成功。结论pcDNA3．1( )-MS真核表达质粒的成功构建，为进一步研究该质粒的免疫保护效果，了解信号肽序列在MS蛋白表达和分泌过程中所起的作用及制备相应的结核病DNA疫苗奠定了基础。     

白细胞介素12在DNA疫苗中的分子佐剂效应

白细胞介素12(IL-12)作为分子佐剂，可促进或抑制DNA疫苗的免疫效果。本文就近年来IL-12作为分子佐剂应用于多种传染病和肿瘤DNA疫苗的研究进展作一综述。     

根治性宫颈切除术中淋巴结转移冰冻病理检查准确性的研究

目的:评价根治性宫颈切除术中盆腔淋巴结冰冻病理检查的准确性。方法:2003年12月至2012年2月北京协和医院妇产科收治的育龄期早期宫颈癌患者中共有38例患者要求保留生育功能而接受了根治性宫颈切除术,术中行盆腔淋巴结切除,并送冰冻病理检查,比较术中淋巴结快速冰冻切片及盆腔淋巴结石蜡切片结果。结果:38例患者的术中淋巴结冰冻病理检出4例淋巴结转移阳性,假阴性1例。术中淋巴结冰冻病理的敏感性80%,特异性100%,阴性预测值97%,阳性预测值100%。结论:术中淋巴结冰冻病理能较为准确地判断早期宫颈癌盆腔淋巴结的转移状况,但其可行性和安全性还需要更大样本量的前瞻性病例研究来进一步评价。     

H2S 通过上调HO-1 表达保护坏死性小肠结肠炎大鼠肠黏膜

目的观察新型外源性硫化氢(H2S)供体GYY 4137对坏死性小肠结肠炎(NEC)大鼠肠黏膜的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法取60只健康新生SD大鼠,随机分成4组。正常对照组,不施加任何干预;NEC模型组,通过人工喂养、缺氧、冷刺激、脂多糖方法制备NEC模型;H_2S干预组,在NEC模型的基础上,腹腔注射H2S供体GYY 4137;血红素加氧酶-1(HO-1)抑制剂组,在H_2S干预组已有干预的基础上,腹腔注射HO-1抑制剂Znpp。于试验第4天处死大鼠,取回盲部肠管进行苏木精-伊红(HE)染色并作组织病理学评分;检测各组新生鼠小肠组织中丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平以及肠道组织HO-1表达。结果 4组新生大鼠肠组织病理评分的差异有统计学意义(P0.001),NEC模型组的病理评分最高,其次为HO-1抑制剂组、H_2S干预组。NEC组病理评分≥2,表明建模方法有效。NEC组与对照组相比,MDA及TNF-α含量明显上升,T-SOD含量下降,差异有统计学意义(P0.05);H_2S干预组同NEC组相比,MDA及TNF-α含量明显降低,T-SOD含量明显升高,HO-1表达增加,差异有统计学意义(P0.05);HO-1抑制剂组较H_2S干预组相比,MDA及TNF-α含量明显升高,T-SOD含量降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论新型H2S供体GYY 4137能够有效保护NEC大鼠肠黏膜,降低MDA及TNF-α的含量,增加T-SOD的含量;其保护作用可能与上调HO-1蛋白的表达有关。     

结核病Mtb8.4基因疫苗构建、表达及诱导的细胞免疫应答

目的制备结核病Mtb8.4基因疫苗,并研究其免疫原性。方法克隆结核杆菌新抗原Mtb8.4基因,导入真核表达载体pcDNA3.1( ),构建重组质粒pcDNA3.1( )Mtb8.4,转染COS7细胞后,用RTPCR检测Mtb8.4基因在细胞内正确表达。将Mtb8.4基因疫苗肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第3次DNA免疫后4周,处死小鼠,制备免疫小鼠脾细胞,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤检测。结果Mtb8.4基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFNγ)和白细胞介素2(IL2)含量分别为787.317±45.586pg/ml和319.953±57.978pg/ml,BCG组分别为1486.540±39.600pg/ml和767.043±50.269pg/ml,BCG组IL4的含量为90.580±10.998pg/ml,明显高于其他各组(P<0.01)。效靶比为100∶1、50∶1、10∶1时,Mtb8.4基因疫苗组的CTL活性分别为55.3%、35.7%、9.2%,BCG组分别为28.9%、21.4%、9.8%。Mtb8.4基因疫苗主要使抗原特异性Th1型细胞免疫应答增强,细胞因子IFNγ和IL2分泌增加,IL4分泌减少,CTL活性增加;而BCG使IFNγ、IL2和IL4分泌均增加。结论结核病Mtb8.4基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,可作为结核病的候选疫苗。     

结核杆菌保护性抗原研究现状

近年来,结核病有卷土重来之势,新型结核病疫苗领域的研究日益受到人们的关注,而寻找结核杆菌保护性抗原成分则是研究的重点.本文就保护性抗原的可能作用机制、保护性抗原的种类及研发结核病疫苗所面临的问题予以综述.       

复方丹参注射液治疗慢性乙型肝炎的荟萃分析

目的评价复方丹参注射液治疗慢性乙型病毒性肝炎的疗效。方法用电子和手工检索鉴定比较复方丹参注射液与西药安慰剂、不治疗、西药非特异性保肝治疗、西药常规保肝药如甘草甜素类制剂、西药抗病毒治疗慢性乙型病毒性肝炎患者的随机临床试验。复方丹参注射液合用西药与单用西药(与治疗组除中药的治疗相同)比较的随机试验也予以纳入。无论使用盲法与否或以何种语言发表均无限制。纳入试验的质量用Jadad记分量表参照Cochrane手册进行评价。结果共纳入17篇文章,患者均诊断为慢性乙型病毒性肝炎,并排除其他肝炎病毒感染及肝损伤因素,提取数据进行mete分析,显示复方丹参注射液合用西药在降低慢性乙型肝炎ALT、TB及肝纤维化指标方面优于单用西药。结论复方丹参注射液与西药保肝抗病毒药物及非特异性保肝治疗等方案联用对慢性乙型肝炎患者有更好的保肝降酶退黄、抗纤维化等作用。