16种常见致病菌16S rRNA区域进化树的建立

目的:通过建立16种常见致病菌的进化树,了解细菌之间的进化关系,为设计其诊断用芯片的特异探针提供理论基础.方法:常规方法提取细菌DNA,PCR对称扩增后进行DNA测序,利用BLAST和ClustalW程序分析测序结果并建立进化树.结果:20种细菌中,16种成功扩增出PCR产物,得到了理想的测序结果,同时建立了这16种细菌的进化树.结论:根据进化树所示,可以设计不同细菌的特异诊断用探针,利用芯片快速鉴定细菌.     

临床常见致病菌快速诊断用芯片的初步构建

目的:构建针对21种常见致病菌的快速诊断用芯片.方法:针对细菌的高度保守区域设计特异探针,优化条件下与细菌的PCR扩增产物进行杂交.结果:得到特异的杂交结果.结论:芯片方法可用于快速鉴别不同种类的细菌,该方法简便可行,优于传统诊断方法.     

银屑病患者皮损和血清TNF-α受体P55检测及其意义

目的 :　探讨肿瘤坏死因子 (TNF)α受体 5 5 0 0 0 (P5 5 )在银屑病皮损和血清中的表达及其意义。方法 :　采用免疫组织化学、RT -PCR和ELISA方法对寻常型银屑病患者皮损表皮P5 5及mRNA表达和血清水平进行了检测。结果 :　正常表皮不表达P5 5及mRNA ;银屑病皮损表皮P5 5及mRNA高表达 ;银屑病患者血清P5 5水平明显高于对照组 (t=3.18,P <0 .0 5 ) ,皮损表皮角质形成细胞P5 5表达强度与其血清P5 5水平呈显著正相关 (r’s=0 .5 82 ,P <0 .0 5 )。结论 :　银屑病患者皮损和血清TNF -α受体P5 5的异常上调 ,可能是银屑病发生和发展的原因之一。     

基因芯片在医学中的应用

随着人类基因组(测序)计划(ｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ,ＨＧＰ)的逐步实施,以及分子生物学相关学科的迅猛发展,越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定,基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。然而,怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能,就成了全世界生命科学工作者共同的课题。为了研究不同个体基因变异,不同组织、不同时间、不同生理状态等基因表达差异,建立新型杂交和测序方法,以对大量的遗传信息进行高效、快速的检测与分析就显得格外重要了基因芯片[又称ＤＮＡ芯片、生物芯片、ＤＮＡ微探针阵列(ｍｉ…     

线粒体多态性检测寡核苷酸芯片的构建

目的构建用于线粒体DNA（mtDNA）D-环控制区（D—LOOP区）多态性多个位点集成检测的寡核苷酸芯片。方法根据GenBank中人mtDNA D—LOOP区序列设计2组引物[普通引物和N,N＇-对羧苄基吲哚三菁（Cy5）标记引物]和55种寡核苷酸探针。将探针固定于醛基修饰载玻片表面,制备mtDNA多态性检测芯片。提取40例健康人外周血标本mtDNA,应用Cy5标记引物不对称PCR扩增mtDNA D—LOOP区片段。取未变性和变性后扩增产物分别与芯片进行杂交,观察二者杂交信号强度差异,并将芯片检测结果与DNA测序结果进行比较。观察等倍稀释的不对称PCR扩增产物的杂交信号强度,检测芯片的灵敏度;将DNA测序结果与探针进行BLAST2比对,找出与PCR扩增产物完全匹配和仅1个碱基不匹配的探针,分析二者在芯片上相应位点杂交信号强度的差异,观察芯片的特异性;以放置6个月后的芯片检测外周血mtDNA,观察杂交信号强度的变化。结果不对称PCR扩增获得的mtDNA D—LOOP区片段（466bp）与预期表达片段大小一致。不对称PCR扩增产物直接杂交和变性后杂交的信号强度无明显差异,40例健康人外周血标本mtDNA的芯片杂交检测结果均与DNA测序结果完全吻合。灵敏度检测结果显示,杂交信号强度随扩增产物稀释程度的增加而减弱,芯片检测靶分子的灵敏度为0．1ng;与DNA测序结果完全匹配的探针174和仅相差1个碱基“C”的探针174c的杂交信号强度具有明显差异;而保存6个月后的芯片杂交信号强度基本保持不变。结论构建的寡核苷酸芯片可满足对mtDNA D—LOOP区多态性进行多个位点快速通量检测的需要,具有较高的灵敏度和特异性,适用于法医鉴定及线粒体疾病的检测。     

胃癌线粒体基因组控制区变异和不稳定性的研究

目的 :检测胃癌线粒体基因组的控制区 (controlregion)的不稳定性、多态性及其他变异 ,探讨其与胃癌的关系。方法 :对2 2例胃癌患者的癌组织及其癌旁正常组织共 44个样本的线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA)的控制区通过PCR扩增 ;然后通过直接测序检测控制区的不稳定性、多态性以及其他变异。结果 :mtDNA控制区不稳定性在胃癌组织和癌旁正常黏膜组织间无明显差异 ,分别为 5 9 1% ( 13 /2 2 )和40 9% ( 9/2 2 ) ,P =0 3 7;并且与胃癌分化程度也不相关 ,P =0 42。 7例样本显示np16182PolyC不稳定性 ,其中 5例伴有np16189T C的转换。另外研究还发现了一些新的控制区变异。结论 :线粒体DNA控制区变异和不稳定性对胃癌发生的作用有限。np165 69T C的转换很可能是np 16182PolyC不稳定性的重要原因之一     

寻常型银屑病患者皮损表皮TNF-α受体p75的表达及其意义

银屑病是一种具有遗传倾向的炎症性增殖性皮肤病 ,其发病机制尚未完全阐明 ,但其皮损表皮中有多种细胞因子包括TNF α高表达。TNF α与其细胞上的受体结合才能发挥其生物学效应 ,目前国内外尚未见有关银屑病皮损表皮p75mRNA表达与否的研究报道。为探讨TNF α受体p75在寻常型银屑病皮损表皮中的表达及其意义 ,我们采用免疫组化和RT PCR方法对进行期寻常型银屑病患者皮损表皮TNF α受体p75进行了检测。2 7例患者中男 18例 ,女 9例 ;年龄15岁～ 35岁 ;病程 1个月～ 7年。 16份正常对照皮肤取自美容整形医院。取典型皮损 2块 ,一块OCT…     

辐射对淋巴细胞RNA、蛋白质合成的影响及其诱导的适应性反应

目的　观察电离辐射对淋巴细胞ＲＮＡ、蛋白质合成的影响及其诱导的适应性反应。方法　采用体外培养的淋巴细胞,经丝裂原ＰＨＡ刺激后,　１４Ｃ－ ＵＲ、　３Ｈ－ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ 双标记掺入法观察０ ．５ ～８ ．０Ｇｙ　γ射线照射后,ＲＮＡ和蛋白质合成速率的变化及低剂量（Ｄ１ ＝４ ．８ｃＧｙ） 照射后相继攻击剂量（Ｄ２） 照射,淋巴细胞所表现的适应性反应。结果　体外培养的淋巴细胞随着照射剂量的增加,ＲＮＡ 和蛋白质合成速度下降,并表现出对低剂量辐射诱导的适应性反应。结论　电离辐射可致淋巴细胞ＲＮＡ、蛋白质合成速度下降,但低剂量辐射可诱导淋巴细胞的适应性反应     

电离辐射对淋巴细胞DNA合成的影响及适应性反应

目的：探讨淋巴细胞预先接受低剂量电离辐射后,对大剂量照射的适应性反应。方法：用０．０４８Ｇｙ γ－ 射线照射后接受０．５～８ ．０Ｇｙ 攻击剂量照射,以３Ｈ－ ＴｄＲ掺入法观察淋巴细胞ＤＮＡ合成能力的变化。结果：淋巴细胞接受低剂量照射时能提高被大剂量照射的ＤＮＡ合成能力,４．０Ｇｙ 的照射时适应性反应最充分。结论：低剂量辐射能诱导淋巴细胞对大剂量辐射的适应性反应。     

肺癌患者胸腔积液中CK19 mRNA的转录表达及临床意义

背景与目的 常规细胞学诊断肺癌患者胸腔积液中的癌细胞具有重要的应用价值,然而对胸膜微转移的诊断是有限的.本研究拟探讨CK19 mRNA在肺癌患者胸腔积液中表达的临床意义.方法 应用RT-PCR方法,分别检测86例肺癌患者和40例良性疾病患者胸腔积液中CK19 mRNA的表达,并与常规细胞学诊断进行对比.结果 肺癌组胸腔积液中CK19 mRNA阳性表达率为93.0%(80/86),肺良性疾病组胸腔积液中CK19 mRNA阳性表达率为20.0%(8/40),两组间CK19 mRNA阳性表达率有显著性差异(x2=65.69,P＜0.01).肺癌组胸腔积液中CK19 mRNA阳性表达率与病理类型无关(P＞0.05).检测肺癌患者胸腔积液中的CK19 mRNA,明显优于常规细胞学诊断的敏感性和准确性(P＜0.01).结论 CK19 mRNA可作为检测肺癌患者胸膜微转移的分子标志物,是诊断肺癌患者胸腔积液中脱落癌细胞及其临床分期的重要参考指标.