不同引物介导的聚合酶链反应对人乳头瘤病毒的快速检测与分型

目的 比较通用引物、型特异性引物在检测人乳头瘤病毒（HPV）DNA中的应用。方法 104例尖锐湿疣组织中提取DNA后分别用HPV6b、11、16、18型特异性引物及通用引物MY09／11、GP5^＋／6^＋经聚合酶链反应（PCR）进行扩增。部分标本采用限制性内切酶Pst I来确定HPV11型。结果 GP5^＋／6^＋的检出率高于MY09／11，但差异无显著性（χ^2=3．78，P〉0．05）。GP5^＋／6^＋检出微量HPV DNA的敏感度高于MY09／11。型特异性引物检测HPV感染优于通用引物MY09／11结合酶切分型。结论 型特异性引物检出HPV11单一型感染显著多于HPV6b型，且发现HPV6b、11型同时感染有逐年增高之趋势。GP5^＋／6^＋引物结合型特异性引物可为临床上检测尖锐湿疣HPV型别提供方便易行的选择。     

眼镜不合适,催生白发

<正>如果头部的血液循环不良,会成为长白头发的契机之一。日本"活力门"网站总结了几点避免长白发的细节。1.饮食规律。食物进入人体后,营养会先滋润维持生命的皮肤、内脏,头发排在靠后的位置。如果营养不良,头发会变脆、变细,白发也增多。2.及时解压。压力过大会使自主神经紊乱,血液循环变差,     

23例黑棘皮病临床病理分析

黑棘皮病（acanthosisnigricans）又称色素性乳头状营养不良，是一种少见的角化性皮肤病，其发病与内分泌失调密切相关。作者收集本院23例黑棘皮病病例进行统计分析，现报道如下。1材料和方法1．材料收集我院1978～1998年皮肤活组织检查标本23例，男性8例，女性15例，年龄12～66岁，平均28．8岁。1．2方法标本经10％福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，HE染色。免疫组化染色采用ABC法，多克隆抗体cy-tokeratin、CEA均系Dako公司产品。显微镜下，细胞浆内出现多数棕黄色颗粒者为阳性。2结果2．1发病年龄分布1O岁以下2例，11～20岁9例，21～…     

小干预RNA在某些病毒性疾病的研究现状

小干预RNA是新近发现的能高效性、特异性剪切同源mRNA的短双链RNA。其强大的基因抑制功能可望用于抗病毒与抗肿瘤的治疗和生物基因功能的研究中。文中就其作用机制、生物学作用及在某些病毒性疾病中的研究现状与临床应用的可能性作一综述。     

表达人乳头瘤病毒6b和11型E6/E7基因的小鼠肿瘤细胞株的建立

目的 构建含有人乳头瘤病毒(HPV)6b和11型E6/E7基因的表达质粒和建立这些基因的转染细胞株。方法 分别将HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11E6和HPV11E7克隆于含绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1,经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性克隆,荧光显微镜观察,RT-PCR鉴定mRNA转录。结果 通过酶切鉴定和基因测序证实,构建质粒中目的基因片段序列完全正确。转染后荧光显微镜下可观测到B16细胞发出绿色荧光。以G418筛选的抗性细胞克隆提取RNA并经RT-PCR扩增出与目的基因大小一致的基因片段。结论 建立的小鼠肿瘤细胞B16表达HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11E6和HPV11E7基因。提示转染的细胞株可移植于小鼠,利于体内研究这些基因的生物学作用和免疫学机制。     

小干预RNA对人乳头瘤病毒6bE6基因的沉默作用

目的 探讨小干预RNA(siRNA)对稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)6bE6基因的细胞株中靶基因的干预作用。方法 建立并筛选稳定表达靶基因HPV6bE6的阳性细胞株,分别设计同源于HPV6bE6基因的不同序列的4对siRNA,采用实时定量PCR技术检测siRNA转染前后细胞内靶mRNA的表达情况。结果 转染细胞中HPV6bE6基因表达最低有90%以上被抑制,低浓度siRNA水平(1nmol/L~150nmol/L)即能有效抑制靶基因表达,靶mRNA的沉默于转染siRNA后24h达到最强,且至少可维持4d。结论 siRNA-HPV6bE6可以高效、特异地沉默HPV6bE6基因,可能为治疗HPV6b型感染提供实验室依据。     

钙网蛋白基因120片段和人乳头瘤病毒6bE7基因诱导的小鼠细胞免疫反应

目的研究嵌合DNA疫苗钙网蛋白基因120片段(CRT120)和人乳头瘤病毒6b型E7基因(HPV6bE7)的免疫学特性。方法克隆、构建重组质粒即嵌合DNA疫苗pcDNA3．1-GFP-CRT120／ HPV6bE7、pcDNA3．1-GFP-HPV6bE7、pcDNA3．1-GFP-CRT120;经脂质体转染获得HPV6bE7转染阳性 B16细胞株;用肌内注射法对C57BL/6小鼠进行重组质粒DNA疫苗免疫;检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群变化、小鼠脾细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性以及与靶细胞共孵育后白介素2和干扰素γ的分泌水平。结果获得构建正确的嵌合DNA疫苗pcDNA3．1-GFP-CRT120／HPV6bE7以及稳定表达HPV6bE7 的阳性细胞株。CRT120／HPV6bE7较之HPV6bE7能引起免疫小鼠外周血中CD8 T淋巴细胞亚群分化和 TCRγδ T细胞上调(P<0．05),脾淋巴细胞与靶细胞共孵育上清液中白介素2和干扰素γ的浓度也明显高于HPV6bE7和CRT120组(P<0．05);CRT120／HPV6bE7免疫的小鼠淋巴细胞对靶细胞B16／HPV6bE7 有明显的杀伤活性。结论 CRT120／HPV6bE7嵌合DNA疫苗能够诱导免疫小鼠的病毒抗原特异性细胞免疫。