2012-2014年湖南省感染性腹泻哨点医院儿童诺如病毒感染及基因型别分析

目的 了解湖南省感染性腹泻哨点医院儿童诺如病毒的感染状况及基因型别。 方法 2012年1月-2014年12月采集湖南省哨点医院腹泻患儿的粪便标本,应用诺如病毒特异性引物进行扩增,选择扩增阳性产物进行基因测序和进化分析。 结果 936份粪便标本RT-PCR检测诺如病毒核酸,阳性100份,阳性率10.68%。对40份诺如病毒核酸阳性标本进行基因序列测定与分析,38份为GⅡ型,其中31份为GⅡ.4型。在31株GⅡ.4型中,Sydney 2012和GII.4 Den Haag 2006b各栓出14株。 结论 2012-2014年湖南省哨点医院儿童腹泻病例中诺如病毒的感染率较高,GⅡ.4是优势株,其中GⅡ.4 sydney 2012和Den Haag 2006b是主要型别。     

隆突性皮肤纤维肉瘤一例误诊

[病例] 女,34岁.因右肩部硬结4年就诊.此前在外院诊断为血管瘤,多次行冷冻治疗无效.查体:全身系统检查无明显异常.皮肤科情况:右肩部可见一隆起的3.0 cm×3.0 cm×2.0 cm大小的硬性斑块,边缘皮肤呈青蓝色,中央隆起部位呈紫红色,与皮肤粘连,质偏硬.门诊行部分切除送病理检查,报告为隆突性皮肤纤维肉瘤(dermatofibrosarcoma protuberans, DFSP).收住外科行扩大切除术,痊愈出院.随访1年未复发.     

ST2928新型耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌引起的重症肺炎1例

目的 分析耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（CR-HvKP）的分子特征和毒力,以加强临床工作者对该菌的认识。方法 对1株分离自重症肺炎患者呼吸道标本的CR-HvKP进行药敏试验,并研究其对碳青霉烯类的耐药机制,通过拉丝试验、毒力基因检测、毒力相关荚膜抗原基因检测、多位点序列分型、大蜡螟感染模型试验和患者临床表现分析该菌的分子及毒力特征。结果 CR-HvKP引起了患者严重的肺部感染,予以纤维支气管镜检查取肺泡灌洗液标本培养分离病原菌,根据其药敏结果及时更改抗菌药物后患者病情得到控制。该菌为多重耐药株,表达IMP-4型碳青霉烯酶,拉丝试验阴性,为ST2928型,prmpA₂毒力基因阳性,K54荚膜抗原基因阳性,在大蜡螟模型试验中表现出较高的体外毒力。结论 此次分离的ST2928型、K54荚膜抗原基因阳性并且产IMP-4型碳青霉烯酶的CR-HvKP系首次报告,CR-HvKP因其高耐药性和高毒力的结合可引起较为复杂和严重的感染,其分子特征呈多样性。     

湖南省2018年登革热本地暴发流行病学和病毒分子特征分析

目的 对湖南省2018年登革热本地暴发疫情进行流行病学及病原学特征研究。方法 对报告的8例疑似登革热病例进行实验室诊断,对病例密切接触者搜索出的186例疑似登革热病例和发热病例开展病原学监测,应用C6/36细胞对病例急性期血清开展病毒分离,对15株登革病毒株E基因测序,分析病毒的血清型别和基因亚型,构建系统发生树,分析可能的传播来源。在疫点开展蚊媒密度应急监测和健康人群回顾性血清流行病学调查。结果 8例疑似病例血清标本,6例登革病毒核酸阳性,4例登革病毒NS1抗原阳性。186例疑似登革热病例,96例病原学检测结果阳性,分离到登革病毒株64株,经鉴定全部为登革病毒2型全球型,来源于广东和浙江省的可能性较大。应急蚊媒密度监测,疫点布雷图指数最高达65,具有极高的登革热传播风险。回顾性调查377名健康人群进行登革热抗体水平监测,IgG抗体阳性率为0.53%（2/377）。结论 现场流行病学调查和分子遗传分析提示,湖南省2018年本地暴发疫情由输入性病例引起,由单一的登革病毒2型全球型引起。     

急性外伤性颅内血肿患者术后发生迟发性脑出血的临床分析

目的:探讨急性外伤性颅内血肿患者的临床特征与术后迟发性脑出血发生的相关性,寻找防治措施。方法:回顾分析58例急性外伤性颅内血肿患者开颅血肿清除术后再出血的临床资料,其中23例患者术后发生迟发性脑出血(DTIH组),35例未发生(NDTIH)组。对2组患者的临床特征进行总结归纳,分析寻找再出血原因,对迟发性脑出血患者行再次手术治疗,并随访行GOS评分。结果:与NDTIH组比较DTIH组有如下特征:术前GCS评分<8分(p<0.05);术前头颅CT提示多有多发脑挫伤,对冲伤,合并颅骨骨折等,并予及时再次手术治疗,术后随访行GOS评估≥4分18例。结论:根据急性外伤性颅内血肿开颅术后患者的临床特征,及时发现迟发性脑出血,并清除迟发性颅内血肿,是提高疗效的关键。     

湖南省1979-2010年狂犬病流行特征及其毒株遗传关系分析

目的分析1979-2010年湖南省狂犬病流行特征及分离病毒N基因特征,探讨疫情波动影响因素及病毒进化情况。方法采用回顾性与描述性流行病学方法对湖南省32年来,狂犬病疫情数据进行统计分析;利用PubMed-Entrez Search程序建立GenBank、EMBL报道的湖南省境内分离的狂犬病毒N基因序列本地数据库,应用生物信息学方法分析病毒N基因特征与变异情况,参考贵州与广西2个高发省份分离的部分狂犬病毒及国内疫苗株CTN-1-V N基因序列,运用Clustal W 1.83软件进行多重序列比对,运用MEGA 5.0.4软件构建N基因系统进化树,分析湖南省分离毒株与贵州、广西分离株亲缘关系及病毒遗传特征差异。结果 32年来,湖南省累计报告狂犬病病例12 576例,总发病率0.69/10万;全省124个县（市、区）均有疫情报告;病例集中于湘南与湘中地区;7～10月份发病数较多（43.23%）;农民所占比例最大（64.35%）。58株毒株N基因全序列平均GC含量为44.49%,AT含量为55.51%,平均单链分子量为409.7 KDa;氨基酸组成含量最高的为亮氨酸（Leu）,含量最低的为色氨酸（Trp）;58株毒株与贵州、广西及国内疫苗株有较近亲缘关系;58株病毒全部属于狂犬病毒基因I型。结论 32年来,湖南省狂犬病疫情存在较大波动;所分离的58株毒株遗传较稳定,未发生关键性变异。     

2株重组弓形虫P30抗原单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备重组P30抗原单克隆抗体,研究其生物活性。方法重组质粒pET28b-P30经BL21（DE3）表达,纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体。ELISA筛选阳性克隆,经亚克隆建株。体内诱生腹水法制备抗体,测定其亚类、效价,Western blot分析其特异性,双单抗夹心-ELISA测定其敏感度。双单抗夹心-ELISA法检测弓形虫感染鼠血清中的CAg。结果筛选出2株抗重组P30的单克隆抗体9D7、2H9,抗体重链分别为IgG2a、IgG1,轻链均为κ链,Western blot显示2株单抗均能识别弓形虫速殖体天然P30抗原。双单抗夹心-ELISA检测抗原量为0.5μg/ml;同法检测鼠血清中的CAg,感染第4、6、8 d的阳性率分别为20%、60%、60%。结论制备的P30抗原单克隆抗体具有较高的敏感性和特异性,为其应用研究打下了基础。     

湖南省首起输入性基孔肯雅热疫情的发现与病原学诊断

目的 确认湖南省首起输入性基孔肯雅热(Chikungunya fever, CHIK)疫情。方法 采集病例和同行人员的血清标本,采用实时荧光定量PCR方法进行登革病毒(Dengue virus, DENV)、黄热病毒(Yellow fever virus, YFV)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus, CHIKV)核酸检测,对核酸检测阳性病毒标本进行基因序列测定,对测序结果进行生物信息学分析,构建系统进化树。结果 病例血清标本CHIKV核酸阳性,5名同行人员中有1人血清标本CHIKV核酸阳性。基因序列Blast比对显示与CHIKV序列同源性>99%。系统进化树显示感染CHIKV属于ECSA基因型。结论 通过流行病学调查和病原学检测,确定了湖南省首起输入性CHIK疫情。     

湖南省2008-2009年狂犬病病原学监测及病毒基因特征分析

目的 分析2008-2009年湖南省狂犬病病原学监测结果及新分离病毒的N基因分子特征.方法 采用直接免疫荧光法(DFA)、巢式PCR检测狂犬病监测标本,阳性标本应用ABI3730测序仪对N基因进行全序列测序;运用生物信息学方法分析N基因特征及序列同源性,构建系统进化树,分析新分离病毒株遗传特征并与以往分离株比较.结果 1451份监测犬脑组织标本中DFA初筛阳性31份,阳性率为2.14％;31份DFA阳性标本经巢式PCR复核,17份阳性,阳性率为1.17％;巢式PCR检测疑似狂犬病病例唾液、脑脊液、血清及尿液标本56份,3份阳性,阳性率为5.36％;新分离的阳性株与巴斯德株进行N基因序列比较,核苷酸和氨基酸同源性均在87.2％～ 87.9％之间;成功构建系统进化树,新分离的20株病毒全部属于基因Ⅰ型.新分离病毒株与湖南省内、邻省和国际株比较存在不同的亲缘关系.结论 湖南省狂犬病病例及犬携带病毒的情况较为稳定,流行株仍为基因Ⅰ型,未发生变异.     

463例疑似登革热病例实验室监测结果分析

目的 对463例疑似登革热病例开展血清学和病原学监测,了解NS1抗原、IgM/IgG抗体及病毒核酸在不同病程的产生规律。 方法 对疑似登革热病例血清应用胶体金免疫层析法(gold immunochromatographic assay, GICA)和荧光免疫层析法(fluorescence immunochromatography assay,FICA)检测NS1抗原,比较两种方法的特异性和敏感性。用GICA检测IgM和IgG抗体,分析不同病程抗体产生规律。用Real-time RT PCR检测病毒核酸,了解不同病程核酸检测阳性的时间分布。 结果 463例疑似登革热病例实验室确诊353例。353例病例在发病的0~3 d内以核酸的检出率最高,达97.08%(133/137);其次是NS1抗原,检出率为91.97%(126/137);在发病的8~14 d内NS1抗原和IgM抗体的检出率最高,检出率均为78.94%(45/57);病程≥15 d NS1抗原、IgM抗体、IgG抗体、核酸的检出率分别为58.06%(18/31)、61.29%(19/31)、54.84%(17/31)、87.10%(27/31);GICA与FICA检测NS1抗原的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为94.88%(278/293)、85.00%(51/60)、93.20%(329/353),kappa值为0.768,具有较好的一致性。 结论 登革病毒NS1抗原和核酸在感染早期具有较高的检出率和一致性;IgM/IgG抗体随病程延长检出率增高,在发病的第二周后检出率最高;GICA与FICA检测NS1抗原均适合基层早期诊断与筛查。