双歧杆菌表达肠致病性大肠埃希菌EspA蛋白的体外研究

目的构建肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)EspA蛋白双歧杆菌表达重组菌株,并验证蛋白表达。方法采用常规PCR扩增EspA片段,体外构建重组质粒pBAD-EspA,转化大肠杆菌BL21感受态细胞培养,挑取单克隆提取质粒,双酶切和PCR对重组质粒鉴定。pBAD-EspA电转化长双歧杆菌感受态细胞,挑取阳性克隆并PCR鉴定,经木聚糖诱导表达,蛋白质印迹试验(Western blot)分析验证EspA蛋白在双歧杆菌中的表达。结果经酶切后琼脂糖凝胶电泳及测序结果证明pBAD-EspA重组质粒构建成功。pBAD-EspA重组质粒转化双歧杆菌后经阿拉伯糖诱导,在诱导表达不同时间点菌液沉淀均有良好的蛋白表达。结论体外成功构建表达EPEC EspA蛋白的长双歧杆菌,为制备ESPA口服疫苗提供科学依据。     

利奈唑胺体外诱导粪肠球菌耐药株23S rRNA V区基因突变位点分析

目的阐明体外诱导利奈唑胺耐药粪肠球菌的核糖体23SrRNA V区基因位点变异特征。方法收集1株血流感染的粪肠球菌和1株粪肠球菌质控菌ATCC29212（编号分别为F3和F4菌株,均为利奈唑胺敏感株）,通过体外浓度倍增法诱导利奈唑胺耐药;挑取单克隆,经E-test条测定MIC值,获得各菌株的耐药浓度梯度;提取耐药菌株基因组DNA,PCR扩增23SrRNA V区基因,扩增产物经测序后与野生株比较,获得V区的突变位点。结果经体外多步法诱导利奈唑胺耐药的不同MIC值粪肠球菌共13株。PCR测序分析2株母株均无变异位点,23SrRNA V区的突变位点主要是G2576U,此外还有T2504A、G2505A、C2610A、C2424U。结论体外多步法可诱导粪肠球菌利奈唑胺耐药,耐药机制与23SrRNA V区位点突变密切相关,突变位点随着MIC值的增高而增多。     

粪肠球菌分子分型特点及其与泰利霉素敏感性的关系

目的 了解临床分离的粪肠球菌分子分型特征及其与泰利霉素药物敏感性之间的关系。方法 收集深圳市南山医院2010-2016年不同临床标本分离的粪肠球菌320株,采用多位点序列分型技术进行分型,用微量肉汤稀释法测定菌株对泰利霉素的最低抑菌浓度,采用PCR检测耐药基因ermB的分布。结果 320株粪肠球菌分为48个ST型和56株新的ST分型,以ST16、ST179型为主。ST16型85株（26.6%）,其中72株（84.7%）ermB阳性,29株（34.1%）对泰利霉素敏感,10株（11.8%）中介,46株（54.1%）耐药;ST179型80株（25.0%）,其中71株（88.8%）ermB阳性,15株（18.8%）对泰利霉素敏感,4株（5.0%）中介,61株（76.3%）耐药。结论 该院粪肠球菌以ST16、ST179为优势菌株,该两型菌群高比例携带ermB基因,对泰利霉素耐药率较高。     

2009年深圳地区泌尿生殖道支原体属感染状况及耐药性分析

目的了解深圳地区支原体属在泌尿生殖道中的感染和对抗菌药物的敏感率。方法使用商品化试剂盒对10 226份临床标本进行支原体属培养、鉴定和药敏试验,并进行统计学分析。结果支原体属培养总阳性率为45.1%,女性支原体属分离率明显高于男性(62.1%vs30.3%),解脲脲支原体(Uu)单一感染(86.2%)显著高于人支原体(Mh)单一感染(1.8%)和两种支原体(Uu+Mh)混合感染(12.0%);Uu、Mh和Uu+Mh对交沙霉素、多西环素、四环素的敏感率均≥80.2%;Uu、Mh和Uu+Mh的耐药谱存在一定差异,Uu对阿奇霉素、红霉素、罗红霉素和克拉霉素的敏感性均≥67.7%,而Mh、Uu+Mh对这4种抗菌药物的敏感性均≤10.3%;喹诺酮类药物的抗菌活性最弱。结论泌尿生殖道感染以Uu为主,女性感染率高于男性,Mh、Uu+Mh分离株多为多药耐药菌株,对泌尿生殖道感染患者应及时进行支原体属培养及药敏试验,指导临床合理用药,以有效提高治愈率和控制耐药菌株的产生。     

携qnrA耐药基因阴沟肠杆菌的分子流行病学研究

目的了解深圳地区临床分离的qnrA基因阳性阴沟肠杆菌的分子流行病学特征。方法采用PCR和产物直接测序法,检测58株临床分离阴沟肠杆菌的qnrA基因,脉冲场电泳进行菌株的DNA分型。结果11株阴沟肠杆菌中检出qnrA基因,其中甲医院6株、乙医院5株;前者可分为A和B 2个克隆系,A系包括3个相同和1个密切相关克隆,B系包括2个相同的克隆;后者5株菌间无相同或密切相关克隆。结论携qnrA基因阴沟肠杆菌的流行不仅存在散发模式,而且存在克隆株医院感染暴发的模式,应加强其医院感染的监控和分子流行病学研究。     

维酶素临床前药理实验研究

维酶素是由新鲜黄豆渣经阿氏假囊酵母固体发酵得到的含有多种活性物质的复合物,由维生素、辅酶衍生物、氨基酸、微量元素等物质组成。根据唐品志、沈琼等报告该药对慢性萎缩性胃炎有较好疗效,并对食管贲门上皮细胞重度增生有一定逆转作用。本实验目的     

E1B缺陷腺病毒对鼻咽癌CNE-2细胞杀伤作用及其机理研究

目的：研究E1B缺陷腺病毒d11520对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤作用及其作用机理。方法：用MTT法和细胞病变试验（CPE）测量d11520在体外对CNE-2细胞的抑制和杀伤作用。并通过测定病毒在CNE-2细胞中的复制产量和DAPI染色试验探讨其杀伤机理；瘤内注射d11520，观察其对CNE-2裸鼠移植瘤的治疗效果。用免疫织化方法检测肿瘤组织中病毒的复制。结果：体外实验结果显示：d11520能在CNE-2细胞中复制，导致明显的细胞病变，显著抑制CNE-2细胞的生长，在病变细胞中可见明显的核膨胀，瘤内注射d11520能明显抑制裸鼠移植瘤的生长，在肿瘤组织中可检测到病毒复制。结论：d11520能在CNE-2细胞中复制并使之裂解，从而在体内外有效地抑制和杀伤CNE-2细胞。     

~(14)C标记大肠杆菌的生物合成及提纯的简单方法

为“EB病毒特异性DNA酶在鼻咽癌患者血清的检测”研究需要[1-3]，我们生物合成纯制了14C标记大肠杆菌DNAOqE．ColtDNA[3]．获得纯度及放射活性较高的[14C]DNAS．63lllg，解决了靠国外实验室提供［’‘CIE·O0liDANt’，‘I的问题及以后大量研究工作对此DNA的需要l’，“l胸腺呼陡脱氧核着酸为DNA恃有组分，如在大肠杆菌基础培养基中加人’‘C标记的胸腺吨院或胸昔（I‘勾TdR）培养大肠杆菌胸腺店陡缺陷株，因此株的生长必须外源胸奇的存在，它能有效地吸收w］TdR令人DNA中，使DNA含有’4C标记．［flyE．coltDNA可作为E…     

骆驼蓬总碱药理作用的研究

从骆驼蓬（ＰｅｇａｎｕｍｈａｒｍａｌａＬ．）种子中提取骆驼蓬总碱（ｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｏｆｈａｒｍａｌａ，ＴＡＨ）。实验证明ＴＡＨ对６种体外培养人癌细胞有强力细胞毒作用，对３种杂种鼠移植性肿瘤和３种人癌裸鼠移植物有明显抑瘤作用，与顺铂或阿霉素有协同作用。用电子显微镜观察ＴＡＨ对肿瘤细胞超微结构影响；用显微荧光光度法分析对细胞周期的影响；用同位素掺入法测定对肿瘤细胞大分子合成的影响：用自建高效液相法进行骆驼蓬碱代谢动力学研究；毒性研究表明长期大剂量ＴＡＨ可引起可逆性肾毒性。