分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定

背景：分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。 目的：构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。 方法：从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提供的在线小干扰 RNA模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA 的 DNA 模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接,在JM-109菌株中扩增,并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。 结果与结论：将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25 bp 的双链 DNA插入片段,连接到pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170 bp,与预期相符。测序结果表明pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段,无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA表达载体。     

2012~2013年济南市中心医院住院患者血培养病原菌及其耐药情况调查

目的了解我院血培养中所分离病原菌的菌种构成比及其耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对我院2012年1月~2013年12月所有血标本按常规方法进行培养、分离、鉴定。采用纸片扩散法进行药敏试验,根据2013年CISI标准判定耐药性。使用WHO细菌耐药性监测中心推荐的WHONET 5.6专业统计软件进行统计分析。结果从2 457份血标本中分离出病原菌194株,分离阳性率为7.90%。包括革兰阳性菌84株(43.30%)、革兰阴性菌93株(47.94%)、单细胞真菌8株(4.12%)及厌氧菌9株(4.64%)。大肠埃希菌构成比最高为26.80%,次为凝固酶阴性葡萄球菌24.23%、金黄色葡萄球菌6.70%、肠球菌10.60%、铜绿假单胞菌6.70%、肺炎克雷伯菌6.19%、阴沟肠杆菌2.06%、单细胞真菌4.12%、厌氧菌4.64%。MRSA及MRCNS分别占金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌的23.10%和76.20%。葡萄球菌属未发现对米诺环素、万古霉素及利奈唑胺耐药株。肠杆菌科细菌未发现对碳青霉烯耐药菌株。铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药率超过60.00%。结论 2012~2013年我院大肠埃希菌在血流感染中占有重要地位。血培养临床分离菌对常用抗菌药物耐药性仍严重,应合理应用抗菌药物,并加强医院感染控制措施,遏制耐药菌传播。     

白细胞介素-1受体拮抗剂基因型2/2与白塞病葡萄膜炎易感性的相关研究

目的：探讨白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1ra）基因多态性与白塞病（Behcet′s disease,BD）葡萄膜炎间的相关性。方法：应用测定短串联重复序列的PCR技术,对27例BD患者和71例健康对照组IL-1ra基因多态性进行测定。结果：BD患者和对照组之间的IL-1ra等位基因和基因型频率差异无统计学意义（P＞0.05）。基因型2/2能增加BD葡萄膜炎易感性(OR=3.3)。其他IL-1ra基因型或基因频率与BD葡萄膜炎无关。结论：IL-1ra基因型2/2与增加BD葡萄膜炎易感性有关。     

猪胶原基真皮支架成纤维细胞生长特性的观察

目的：观察成纤维细胞在一种新型的猪胶原基真皮支架（PCDM）上的粘附生长特性,探讨提高异种真皮支架细胞相容性的方法。方法:分别在PCDM乳头层面和网状层面种植人皮肤成纤维细胞,于接种后1、7、14d通过HE染色,扫描和透射电镜下观察成纤维细胞在PCDM上的生长情况。结果:人皮肤成纤维细胞早期在乳头层真皮面的粘附优于网状真皮面,而晚期更多的网状真皮面可见到细胞形成复层并长入基质内部。结论:PCDM具有良好的细胞相容性,是与异体真皮最为接近的天然真皮支架,改良生产工艺以及去除基底膜和真皮乳头层可提高其细胞相容性。     

三维培养对脐带间充质干细胞表型及造血因子基因表达的影响

本研究探讨三维立体培养条件下脐带间充质干细胞（UC-MSC）的细胞表型变化及部分造血相关因子的基因表达,为下一步研究三维立体条件下的造血扩增及诱导分化提供基础.从脐带中分离出MSC,分别在二维及三维条件下培养,通过流式细胞术检测MSC表面抗原的表达水平,通过成血管试验比较了两种细胞的成血管能力,并通过实时定量PCR检测两种培养条件下造血相关细胞因子的基因表达情况.结果表明：从脐带中成功地分离出了MSC,在三维培养条件下其内皮细胞、内皮祖细胞和间充质原始干细胞的表面标记CD31、CD133和CD271等阳性细胞百分比显著增加,体外成血管能力增强;骨架蛋白β-actin基因在三维培养条件下表达上调,G-CSF、LIF、SCF、IL-1 α、IL-1β、IL-3、IL-7和IL-11等与造血调控有关的细胞因子基因表达也有不同程度的增高,其中LIF、IL-3和IL-7升高尤为明显;免疫调控相关的细胞因子IL-10的表达也增高,而SDF-1和IL-6的表达虽有轻微的降低,但无显著性差异.结论：三维培养条件下UC-MSC的CD31、CD133和CD271表达上调,体外成血管能力增强,并且多个造血相关因子的基因表达水平上调.     

血友病A产前基因诊断研究的进展

血友病Ａ产前基因诊断研究的进展汪运山，董建春综述（济南市中心医院）刘宗印，江森审校（山东医科大学附属医院）血友病Ａ（ＨｅｍｏｐｈｉｌｉａＡ，ＨＡ）是由于因子Ⅷ（ＦａｃｔｏｒⅧ，ＦⅧ）基因的突变导致ＦⅧ的缺陷或功能障碍所致的一种伴性隐性出血性疾病［１，...     

淋巴瘤多药耐药基因表达的检测与评估

淋巴瘤多药耐药基因表达的检测与评估汪运山主治医师李庆生济南市中心医院生物治疗中心（２５００１３）恶性淋巴瘤耐药性的产生机制复杂多样，其中多药耐药（ＭＤＲ）最为重要，作用机制是由ＭＤＲ－１基因表达的分子量为１７０ＫＤ的膜糖蛋白（Ｐ－１７０）介导。目前，...     

血浆置换在老年人中的应用展望

随着医学科学技术的不断进步，血浆置换的技术和治疗疾病的种类都已有长足的发展，本文作者就血浆置换的某些概念及其临床应用加以扼要介绍，借助展望其在老年人中的应用。     

电化学发光免疫系统测定24h尿游离皮质醇分析测量范围与临床可报告范围研究

目的根据国际化标准组织ISO15189对实验室认可的要求,对罗氏电化学发光系统检测尿游离皮质醇(urinary free cortisol,UFC)进行分析测量范围(analytic measurement rang,AMR)与临床可报告范围(clinical report range,CRR)的研究。方法高、低值样本,按要求配成5种不同浓度,各检测4次,取平均值,与理论值做回归分析,得出AMR(AMR);中值样本一份,按要求稀释成不同浓度,各检测3次,计算理论值与均值的比值(R),确定最大稀释度并计算CRR。结果 AMR为0.65~53.80μg/dl;最大稀释度1:10;由AMR与最大稀释度,CRR0.29~538μg/dl。结论 AMR、CRR符合15189对检测系统的要求,完全可以满足临床治疗监测需要;超出测量范围的高浓度样本建议10倍稀释,使检测结果更具体更可靠。     

分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定

背景：分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子，与肿瘤的发生发展有着重要的联系。 目的：构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。 方法：从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列，利用Katahdin提供的在线小干扰 RNA模板序列设计软件，设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA 的 DNA 模板单链，合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸，退火后与酶切后的pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接，在JM-109菌株中扩增，并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。 结果与结论：将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25 bp 的双链 DNA插入片段，连接到pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高，可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170 bp，与预期相符。测序结果表明pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段，无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA表达载体。