早期应用富血小板血浆凝胶对自体脂肪组织移植存活率的影响

背景：自体颗粒脂肪组织填充广泛用于修复重建领域,移植后组织大量被吸收可严重影响远期效果。目的：观察早期应用富血小板血浆对自体移植脂肪组织存活率的影响。方法：取健康成年人腹部脂肪组织颗粒进行纯化,同时抽取少量静脉血,采用离心法提取自体富血小板血浆,利用纤维蛋白胶的物理特性制备含有富血小板血浆的脂肪组织复合移植物,在裸鼠背部中线两侧各分离一个腔隙,富血小板血浆组将脂肪组织颗粒-富血小板血浆凝胶随机注射入一侧腔隙深筋膜下,对侧仅注入脂肪组织颗粒作为对照组。结果与结论：移植后1个月和3个月,与对照组比较,富血小板血浆组移植脂肪局部的血管增生均较明显（P〈0.05）,脂肪质量保持率均较高（P〈0.05）;移植物脂肪细胞纤维坏死率均较低（P〈0.05）。提示早期应用富血小板血浆凝胶可促进移植脂肪组织局部的血管再生,增加脂肪组织的质量保持率,减少脂肪移植后的纤维坏死程度。     

细菌纤维素减轻兔耳增生性瘢痕的作用

背景：国内外已有研究报道细菌纤维素对皮肤创伤愈合具有促进作用,但是其对增生性瘢痕是否有治疗作用尚不清楚。 目的：观察细菌纤维素对兔耳增生性瘢痕的疗效。 方法：建立兔耳腹侧增生性瘢痕模型,术后第21天创面上皮化后,对每只兔耳5个不同瘢痕面随机给予5种不同处理方式：持水性分别为1∶5,1∶6,1∶8细菌纤维素组、阳性对照组(贴敷瘢痕贴)、阴性对照组(未贴任何敷料且瘢痕自然生长)。观察不同处理后第0,14,21,28,42,56天瘢痕面大体形态学及组织学变化。 结果与结论：持水性1∶5,1∶6,1∶8细菌纤维素组瘢痕增生厚度低于阴性对照组,但高于阳性对照组(P < 0.01)。与阴性对照组比较,持水性1∶5,1∶6,1∶8细菌纤维素组瘢痕组织中真皮层薄,成纤维细胞少,胶原纤维较细、排列较整齐;与阳性对照组组比较,持水性1∶5,1∶6,1∶8细菌纤维素组成纤维细胞数稍多,胶原也稍粗、排列也稍不整齐。3种细菌纤维素组间瘢痕厚度及成纤维细胞数量为1∶5细菌纤维素组> 1∶6细菌纤维素组> 1∶8细菌纤维素组(P  < 0.05)。说明细菌纤维素有效抑制了兔耳创面愈合后增生性瘢痕的形成,并且持水性越高,效果越好。     

荧光活性染料DiI标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖及其成骨分化

背景：目前关于骨髓基质干细胞的标记报道较多,各有其优缺点,寻找一种有效、简便的细胞标记与示踪的方法尤为关键。目的：观察经荧光活性染料DiI标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖与成骨分化情况。设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-09/12在南方医科大学组织工程研究中心完成。材料：SD大鼠10只,由南方医科大学实验动物中心提供。DiI应用液为美国Molecular ProbeInc公司产品。方法：全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞,加入无血清的DMEM制成细胞悬液,再加入1×109L-1的DiI应用液5μL,37℃下孵育25min,清洗离心后,加入DMEM高糖完全培养基,荧光显微镜观察细胞荧光强度及形态变化。另取传至第3代细胞,加入含地塞米松、维生素C、β-磷酸甘钠、体积分数为10%胎牛血清的成骨诱导剂进行诱导分化。主要观察指标：DiI标记后细胞形态变化,XTT比色法测定细胞增殖状况,细胞上清液中乳酸脱氢酶活性,成骨诱导后细胞碱性磷酸酶活性及成骨分化能力。结果：锥虫蓝染色见骨髓基质干细胞活力好,仅偶见蓝染细胞,荧光显微镜下DiI标记后全部细胞的胞浆、胞膜均显红色荧光,标记的骨髓基质干细胞呈梭形,胞浆丰富,保持了良好的正常形态,DiI标记阳性率为100%,标记早期细胞形态呈荧光环状,48h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光。与未标记细胞比较,DiI标记的骨髓基质干细胞增殖吸光度、培养上清液乳酸脱氢酶活性、碱性磷酸酶活性均无明显变化（P〉0.05）。成骨诱导7d后,钙钴法染色两组骨髓基质干细胞均见不同程度的胞质呈棕黑色改变。结论：DiI能有效标记体外培养的骨髓基质干细胞,并在细胞内稳定表达,且标记细胞形态良好,对活体细胞无毒性作用;此外,DiI标记不影响骨髓基质干细胞的生长、增殖及成骨分化能力。     

基于人脂肪组织获取基因构建pET28a-leptin（瘦素）重组子

背景：新近的一些研究认为,采用体外重组瘦素替代疗法对遗传性肥胖、难愈性创面和内源性瘦素缺乏应是行之有效的方法。目的：取人脂肪组织获取瘦素基因,构建pET28a-leptin重组子。设计、时间及地点：单一样本观察,实验于2004—06/00712在江西省医学科学研究所抗肿瘤室完成。材料：取自22岁汉族女性行重睑手术时皮下脂肪组织,冻存于液氮中备用,供者知情同意。方法：取人脂肪组织,反转录一聚合酶链反应得到瘦素基因后,通过DNA重组技术克隆至pMDl8T载体与pET28a原核表达载体,EcoRI＋XhoI双酶切及测序鉴定。主要观察指标：①cDNA扩增结果。②重组质粒鉴定。③DNA测序结果。结果：扩增得到520bp目的基因;所构建重组瘦素原核表达载体pET28a-leptin经双酶切电泳见520bp目的条带,DNA测序与相应基因序列同源性达100％。结论：通过DNA重组至pET28a原核表达载体,经EcoRI＋XhoI双酶切及测序鉴定成功构建pET28a．1eptin重组子。     

汉防己甲素对增生性瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶Ⅰ合成的影响

目的：基质金属蛋白酶Ⅰ(matrix metalloproteinase I，MMP-1)在增生性瘢痕的形成过程中起重要作用，观察汉防己甲素对成纤维细胞MMP-1合成的影响．探讨汉防己甲素对增生性瘢痕的治疗作用。方法：实验于2003-03／12在沈阳军区总医院医学实验科完成。培养增生性瘢痕来源的成纤维细胞，然后分别加入浓度为1，5，10mg／L汉防己甲素，继续培养24h，通过ELISA方法检测培养细胞的上清夜中MMP-1的含量。结果：在汉防己甲素的作用下，成纤维细胞合成MMP-1的量增加，其中对照组是(11．34&;#177;1．15)μg／L，加入1，5，10mg／L的汉防己甲素后MMP-1分别为(23．65&;#177;1．41)，(29．74&;#177;1．92)及(37．12&;#177;1．75)μg／L。结论：汉防己甲素可以促进增生性瘢痕来源的成纤维细胞合成MMP-1，因此其可能对增生性瘢痕具有预防及治疗作用。     

钙黏蛋白11和核心结合因子α1双基因修饰人骨髓间充质干细胞

背景:钙黏蛋白11对骨髓间充质干细胞进行基因修饰,可促进细胞的黏附性能.利用核心结合因子α1对骨髓间充质干细胞进行基因修饰,有望实现多能干细胞的成骨定向分化,并在诱导成骨分化的级联效应中发挥重要的信号作用.目的:拟采用腺病毒为载体,介导钙黏蛋白11、核心结合因子α1基因修饰骨髓间充质干细胞,观察两基因的表达情况.设计、时间及地点;细胞-基因学实验,于2008-08在珠江医院中心实验室完成.材料:人骨髓间充质干细胞来源于1例胸椎骨折男性患者,由珠江医院提供,患者对实验知情同意.钙黏蛋白11全长cDNA质粒由日本神户理研Riken分子生物中心Takeichi教授惠赠,全长核心结合因子α1基因质粒由美国Baylor医学院Ducy博士提供,pAdeasy腺病毒系统由美国约翰霍普金斯遗传所Bert博士馈赠.方法:Percoll密度梯度离心+贴壁法分离培养人骨髓间充质干细胞.利用PCR技术获得钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因,分别构建到腺病毒穿梭载体上,然后分别通过同源重组获得重组腺病毒质粒,再将两病毒质粒包装获得重组病毒液,最后通过病毒将两基因导入骨髓间充质干细胞.主要观察指标:Western blot法检测钙黏蛋白11、核心结合因子α1基因在入骨髓间充质干细胞中的表达.结果:获得携带钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因的病毒液,将其感染人骨髓间充质干细胞后,以Wastern blot检测两种基因同时获得高表达.结论:实验成功构建钙黏蛋白11和核心结合因子α1基因腺病毒载体,通过病毒转染入骨髓间充质干细胞,二者获得高效表达.     

汉防己甲素对增生性瘢痕中成纤维细胞增殖和活力的影响

目的 :观察汉防己甲素对成纤维细胞的生物学作用。方法 :通过对增生性瘢痕中的成纤维细胞进行培养 ,然后加入不同浓度的汉防己甲素 ,继续培养后观察成纤维细胞增殖和活力的变化。结果 :当汉防已甲素的浓度达到100mg/L时 ,抑制率达到了89.4 % ,细胞的活力也下降到对照组的38.5%。结论 :汉防己甲素可能对增生性瘢痕具有预防和治疗作用     

胚胎无瘢痕愈合的调控机制研究：（Ⅱ）胎儿皮肤成纤维细胞体外合成胶原的实验研究

目的 探讨胶原合成特征和合成类型在胚胎成纤维细胞的表达。方法 应用^3H-脯氨酸掺入法，Ⅰ、Ⅲ型前胶原放免测定法，观察分析胎儿，成人正常皮肤，增生性瘢痕3种不同来源成纤维细胞的胶原合成情况。结果 与成人比较，胎儿成纤维细胞有更为强大的胶原合成能力（P＜0．01），和较高的Ⅲ型胶原合成比率，（Ⅰ：Ⅲ胎儿组为67％：32％，成人正常皮肤组80％：19％，增生性瘢痕为75％：24％）。结论 胎儿创伤愈合没有明显瘢痕形成，并不能归因于胶原合成的缺如，而胎儿成纤维细胞合成Ⅲ型胶原能力增高可能是胚胎创伤无瘢痕修复的内在机制。     

卵磷脂注射溶脂安全性的实验研究

目的 观察卵磷脂注射溶脂的安全性.方法 用卵磷脂注射液0.10 ml(5 mg/cm2)分别对30只昆明小鼠的一侧腹股沟皮下和同侧后肢骨骼肌内局部注射,对其进行肉眼观察及组织学检查.结果 卵磷脂对不同组织的细胞膜均有溶解作用:肌肉组织可见溶解断裂;肝肾组织存在水样变性;大部分脂肪细胞进入凋亡过程并有单核细胞和淋巴细胞浸润.结论 卵磷脂有明显的溶脂效果,但其对脂肪组织的溶解为非特异性.     

基于人脂肪组织获取基因构建pET28a-leptin(瘦素)重组子

目的：构建pET28a-leptin重组子。方法：取人脂肪组织,RT-PCR得到瘦素基因后通过DNA重组技术克隆至pMD18T载体与pET28a原核表达载体,EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切及测序鉴定。结果：扩增得到520bp目的基因;所构建重组瘦素原核表达载体pET28a-leptin经双酶切电泳见520bp目的条带,DNA测序与相应基因序列同源性达100%。结论：成功构建pET28a-leptin重组子,为后续研究提供了基础和物质保障。