大鼠蛋白激酶Cγ基因小发卡RNA慢病毒载体的构建及其干扰效率的鉴定

目的：研究指出蛋白激酶Cγ（PKCγ）在脊髓水平上参与了伤害性信号的传递,文中拟构建大鼠PKCγ基因的小发卡RNA（shRNA）慢病毒载体,并在细胞水平鉴定其干扰效率。方法：根据PKCγ-mRNA序列,选择3条19nt的靶序列,设计并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入到pLVTHM载体的H1启动子后获得重组质粒,同时构建一个非特异性对照质粒。将所构建的质粒与pMDLg-pRRE、pR sv-REV、pMD2G共转染293T细胞,包装产生慢病毒后,分别感染C6细胞,经免疫印迹技术（W estern b lot）检测PKCγ基因的蛋白表达水平以评价慢病毒载体的抑制效率。结果：测序证实成功构建了3个大鼠PKCγ基因shRNA慢病毒载体,分别感染C6细胞后pLV-PKC2和pLV-PKC3可明显降低PKCγ蛋白的表达,其中以pLV-PKC2（靶向位点：＋1913＋1931）的慢病毒抑制效率最高。结论：成功构建了大鼠PKCγ基因shRNA慢病毒载体,且慢病毒载体pLV-PKC2能特异、高效地抑制PKCγ基因的表达。     

危重新生儿转运149例临床分析

目的了解区域性危重新生儿转运系统(NETS)对本院危重新生儿救治工作的重要性。方法与有NICU的市三级医院建立协作关系,通过绿色通道应用单程或双程转运的方式转运危重新生儿。结果转运的149例高危儿中先天性梅毒可能的有98例,占转运总数的首位。余51例中早产儿为21人,占第一位,其中出生体重小于1500克有10例,1500克～2000克有7人,大于2000克有4人。新生儿窒息为11人,占第二位,先天性心脏病为8人,占第三位。其中呼吸困难有36例,需要机械通气的有19例。由于转运及时及转运途中有效的监护和处理,转运途中无一例死亡,转运病死率为0,转运成功率为100%。结论建立区域性危重新生儿转运系统是降低新生儿死亡率、减少伤残及改善患儿预后的重要措施。     

颅内注射罗哌卡因对大鼠胃癌痛阈的影响

目的 观察颅内注射局麻药罗哌卡因对大鼠骨癌痛阈的影响,探讨骨癌痛的机制. 方法 建立大鼠骨癌痛模型后,立体定位引导下在大鼠脑干延髓头端腹内侧区（rostral ventromedial medulla,RVM）置管,通过von Frey filaments, Pin Prick test, Ambulatory pain三种方法检测骨癌痛大鼠在RVM内给予罗哌卡因后痛阈的改变. 结果 构建骨癌痛模型后,大鼠痛阈呈现进行性下降趋势. 颅内微注射0.5%罗哌卡因后,骨癌痛大鼠的机械性痛觉超敏,机械性痛觉过敏,移动触诱发痛3种不同性质的疼痛痛阈均显著升高,痛觉行为显著改善. 结论 RVM区内注射局麻药罗哌卡因可以起到显著的镇痛效果,提示脑干RVM区在骨癌痛的形成和维持中起重要作用.     

不同条件下小鼠白念珠菌性阴道炎易感性的研究

目的研究不同条件下小鼠阴道粘膜对白念珠菌的易感性。方法建立免疫系统正常小鼠(雌激素化)与免疫抑制小鼠模型,建立初发与复发白念珠菌性阴道炎模型,对比观察不同干预措施下小鼠的一般生长情况、阴道灌洗液涂片细胞学检查结果、阴道组织病理学改变并测定其阴道灌洗液真菌载量。结果免疫抑制组各时点平均CFU水平均高于雌激素化组,且峰值后移,自第4天起两组相比有显著性差异(P<0.05)。雌激素化组、免疫抑制组各时点平均CFU分别与正常对照组相比均显示极显著性差异(P<0.01)。结论处于免疫抑制状态的小鼠阴道粘膜对白念珠菌更具有易感性;再次感染与初次感染不存在易感性差异。     

PFKFB3敲减抑制肺腺癌细胞A549增殖和转移

目的探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3（PFKFB3）敲减对肺腺癌细胞A549增殖和转移的影响。方法将人肺腺癌细胞系A549分3组,si-ctrl转染阴性对照序列组、si-PFKFB3#1组和si-PFKFB3#2组,分别转染2种不同的敲减siRNA序列。WB检测PFKFB3蛋白表达,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,transwell检测细胞转移能力。结果与si-ctrl组比较,si-PFKFB3#1组（0.103±0.024）和si-PFKFB3#2组（0.106±0.028）PFKFB3/GAPDH蛋白相对表达量显著降低（P<0.05）;孵育48、72和96 h,si-PFKFB3#1组和si-PFKFB3#2组细胞活力降低,细胞增殖抑制率升高（P<0.05）;si-PFKFB3#1组[（63.51±3.87）%]和si-PFKFB3#2组[（61.26±3.66）%]细胞G1期比例增加,si-PFKFB3#1组[（25.64±2.71）%]和si-PFKFB3#2组[（24.79±2.59）%]S期比例减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。与si-ctrl组（305±27）比较,si-PFKFB3#1组（125±20）和si-PFKFB3#2组（136±18）转移细胞数显著降低（P<0.05）。结论 PFKFB3敲减可以抑制肺腺癌细胞A549增殖和转移。     

长春新碱诱发外周神经病理性疼痛模型的建立

目的:建立长春新碱诱发外周神经病理性疼痛大鼠模型。方法:雄性SD大鼠,隔日尾静脉注射长春新碱,共注射五次,造成外周神经病理性疼痛模型。测定2g和12g力度机械刺激引起的缩爪反应观察机械性痛觉超敏,辐射热测痛仪测量热痛觉过敏,同时行组织切片光镜和电镜下观察坐骨神经结构的破坏情况。结果:100μg/kg和150μg/kg组大鼠在第二次注射长春新碱后,开始出现机械性痛觉超敏和痛觉过敏,150μg/kg组大鼠有热痛觉过敏表现;组织形态学研究显示坐骨神经退行性变,轴突变性。结论:从疼痛行为学、组织学研究的结果,表明长春新碱诱发外周神经痛大鼠模型建立成功。     

垂体瘤患者术后生长激素激发试验安全性观察与护理

目的 探讨垂体瘤患者术后生长激素激发试验用于诊断成人生长激素缺乏症的安全性与临床护理要点.方法 采用胰岛素耐量试验(insulin telerance test,ITT)作为探测垂体生长激素储备功能的药物激发试验.选择15例垂体瘤术后(无功能性腺瘤和催乳素大腺瘤)患者术后进行ITT试验,行ITT前禁食10 h,静脉注射短效人胰岛素 0.1～0.15 U/kg,于静注短效人胰岛素前30 min、推注前即刻,推注后第30、第45、第60、第90、第120分钟各采血3.5 mL做生长激素及静脉血糖测定,同时监测上述时间点心率及出现低血糖的频率与严重性.结果 血糖低谷主要发生在注射胰岛素后的30～45 min,试验中所有受试者均诱导出生化低血糖,30 min发生低血糖12例,45 min发生低血糖3例,其中需要静脉注射质量浓度50 g/L葡萄糖缓解症状者仅2例.结论 ITT用于诊断生长激素缺乏症过程中低血糖多发生于推注胰岛素后30～45 min,经对症处理后低血糖症状多迅速缓解.试验过程中严密监测血糖可保证试验的安全性.     

骨癌痛大鼠脑脊液谷氨酸含量的检测及意义

目的:研究骨癌痛模型大鼠脑脊液兴奋性氨基酸谷氨酸含量的变化.方法:雌性SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只.Ⅰ为正常对照组;Ⅱ为D-Hank's组;Ⅲ为热灭活细胞组:大鼠右侧胫骨上段骨髓腔注射热灭活的Walker256乳腺癌细胞10μL;Ⅳ为骨癌痛模型组.分别对各组大鼠行为学检测后,抽取大鼠脑脊液,应用反相高效液相色谱法,检测各组大鼠脑脊液内兴奋性氨基酸谷氨酸的含量.结果:Ⅳ组机械性痛觉缩爪阈值和热辐射痛觉缩爪阈值显著低于其他各组(P<0.05),而脑脊液中谷氨酸含量(19.41±0.64)μg/mL显著高于其他各组(P<0.05).Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组之间大鼠脑脊液谷氨酸含量无统计学差异(P>0.05).结论:中枢神经系统谷氨酸含量与骨癌痛的形成和维持密切相关.     

重组抗基因RNA与铁蛋白基因双启动子慢病毒表达载体的构建

目的 构建共表达抗基因RNA与铁蛋白基因的双启动子慢病毒载体.方法 将铁蛋白重链基因构建入线性化的慢病毒载体pGC-FU,以获得中间质粒pGC-FU-HF;进而将具有基因沉默效应的β-arrestin2抗基因RNA构建人中间质粒,以获得目的质粒pGC- agRNA- HF;通过病毒的包装和浓缩,应用Realtime PCR法检测重组慢病毒的滴度,应用NG108-15细胞,采用Western blot和实时定量PCR检测抗基因RNA的基因沉默效应和铁蛋白的表达.结果 抗基因RNA与铁蛋白均成功构建入慢病毒表达载体,病毒滴度2.00×109 TU/ml,该病毒转染NG108-15细胞后,β-arrestin2表达下调,铁蛋白表达上调.结论 成功构建了表达抗基因RNA与铁蛋白基因的双启动子慢病毒载体.